蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及生物学活性分析

蜡样芽胞杆菌是国内引起细菌性食物中毒的常见细菌之一， 提取其溶血性肠毒素有助于阐明它的发病机理，有可能制备诊断试剂， 从而达到预防和控制蜡样芽胞杆菌食物中毒的目的。从国内引起食物中毒的１００ 株蜡样芽胞杆菌中，选出试验用菌株。从培养后的上清液中， 经过盐析、离子交换柱层析、制备性凝胶电泳提取蜡样芽胞杆菌溶血素。溶血素由 Ｂ、 Ｌ１ 和 Ｌ２ ３ 种成份组成， 分子量分别为３５ 、３６ 和４５ｋ Ｄａ ３ 种成份的协同作用在血琼脂上引起靶状溶血， 使兔皮肤血管通透性增加， 兔小肠肠段结扎产生积液反应， Ｖｅｒｏ 细胞形态学改变。提示蜡样芽胞杆菌溶血素具有肠毒素的性质，

多重PCR检测蜡样芽孢杆菌毒力基因方法学建立与初步应用

目的 建立且优化一种能同时检测蜡样芽孢杆菌三种毒力基因的多重聚合酶链式反应(PCR)体系,初步应用于医院内环境中蜡样芽孢杆菌毒力基因检测。方法 以蜡样芽孢杆菌的细胞毒素K(cytK)、肠毒素FM(entFM)、非溶血性肠毒素(nhe)三种毒力基因为靶基因,进行多重PCR,优化体系的引物浓度、退火温度、电泳时间和电压,验证该多重PCR体系灵敏度、特异性以及稳定性,并检测医院环境中蜡样芽孢杆菌毒力基因携带情况。结果 成功建立多重PCR体系,nhe、cytK和entFM最佳引物浓度分别为8、20和6μm,退火温度为56℃,电泳条件为80V、30min。该体系灵敏度可达10^(-1)ng/μl,重复性好,特异性良好,可在-20℃稳定保存1个月。医院环境中蜡样芽孢杆菌毒力基因携带情况为:cytK基因携带率为75.00%,entFM基因携带率为66.67%,nhe基因携带率为16.67%。结论 多重PCR可同时检测蜡样芽孢杆菌三种毒力基因,操作简便,重复性好,具有灵敏、特异、稳定的优点;医院环境中蜡样芽孢杆菌的毒力基因携带率高,提示应加强医院环境的清洁与消毒。此文为蜡样芽孢杆菌毒力基因的快速检测和芽孢感染的预防提供依据。