犊牛溶血曼氏杆菌疫苗免疫安全性及效果评价

选取2~6月龄健康荷斯坦犊牛2500头,免疫牛溶血曼氏杆菌灭活疫苗,监测免疫后不良反应。结果表明,犊牛免疫后3d内采食量下降12%,随后恢复;免疫后5d内,约有65%的牛出现体温一过性升高,95%的犊牛出现注射部位皮下肿胀,免疫后2周内自行消退。2月龄犊牛二免后14d抗体水平最高,合格率及阳性率达100%,随后开始下降,免疫后6个月抗体滴度低于临界值。免疫后6个月内犊牛肺炎发病及死亡牛只溶血曼氏杆菌未检出。溶血曼氏杆菌灭活疫苗A1型M164株临床应用安全,2月龄犊牛二免后5个月进行加强免疫。

溶血曼氏杆菌微滴式数字PCR定量检测方法的建立及应用

基于溶血曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.haemolytica)单拷贝基因sodA,通过优化反应条件和体系,建立了溶血曼氏杆菌ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测方法。结果显示,所建立的溶血曼氏杆菌ddPCR方法特异性好;检出限(limit of detection,LOD)和定量值(limit of quantification,LOQ)均为170 CFU/m L,3个平行检测的变异系数均小于25%,重复性良好。针对系列稀释的溶血曼氏杆菌纯菌液,ddPCR法能够实现对溶血曼氏杆菌的准确定量,与平板计数结果偏差小于4%。运用所建立的ddPCR方法对15份牛鼻拭子样品进行检测,结果在10份样品中检出溶血曼氏杆菌,含量在3.07×10^(2)~9.52×10^(4)CFU/mL之间。本研究所建立的ddPCR方法适用于临床鼻拭子样品中溶血曼氏杆菌的精准定量分析,可为牛群中溶血曼氏杆菌的监测和治疗提供有效的技术支持。

牛溶血曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,进一步分型确定为血清6型。成功从牛肺脏中分离到该菌株,从药敏试验结果可以看出该菌对大多数药物敏感。该试验对牛溶血曼氏杆菌病临床用药具有参考意义,也为牛溶血曼氏杆菌病临床诊断与治疗提供了技术参考。

河南省牛呼吸疾病综合征主要病原流行情况分析

为调查河南省牛呼吸疾病综合征病原的流行情况,明确牛呼吸疾病综合征病因、丰富河南省牛呼吸疾病综合征病原流行资料,在河南省内采样并使用荧光定量PCR法对患病牛只鼻拭子样品进行检测。结果表明河南省牛呼吸疾病综合征病原检出率依次是多杀性巴氏杆菌(47.39%)、牛支原体(32.09%)、溶血性曼氏杆菌(23.88%)、牛冠状病毒(16.79%)、牛副流感病毒3型(13.43%)、牛呼吸道合胞体病毒(10.45%)、牛病毒性腹泻病毒(7.46%)。同时河南省内多为混合感染,且病原流行情况有地区差异。