副溶血性弧菌溶血相关毒素基因原核融合表达载体的构建

目的:实现副溶血性弧菌溶血相关毒素TRH基因在大肠杆菌中的融合表达,以获得纯度较高的蛋白产物。方法:构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ(trh/pGEX—3X/DE3),并在31℃条件下,用0.6mmol/L IPTG诱导表达。用SDS-PAGE分析蛋白表达。结果:PRⅡ在上述条件下诱导后,目的蛋白呈高效、可溶、融合性表达。薄层扫描显示,细菌的周质腔中的蛋白量最高,SDS-PAGE表明,融合蛋白的相对分子量(Mr)为49Kda,与预期结果一致。结论:trh基因在原核融合表达系统pGEX-3X/DE3中获得成功表达,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、构建基因工程菌苗、阐明该菌的致病机制奠定了基础。

副溶血性弧菌直接溶血相关毒素蛋白的纯化及性质初探

目的 纯化副溶血性弧菌直接溶血相关毒素 (TRH)蛋白 ,鉴定表达产物的生物学活性和免疫原性 ,为构建副溶血性弧菌快速检测方法奠定物质基础。方法 构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ (trh/pGEX 3X/DE3) ,在 31℃条件下 0 6mmol/LIPTG诱导表达。用SDS PAGE分析蛋白表达 ,溶血试验检测表达蛋白的溶血活性。将表达产物皮下注射免疫兔 ,溶血抑制实验检测该抗体体外对TRH溶血活性的抑制作用。结果 PRⅡ在上述条件下诱导后 ,TRH呈可溶性、融合性表达。溶血试验表明 ,表达的蛋白具有溶血活性。用表达的蛋白免疫兔产生的相应抗体 ,在体外具有抑制TRH溶血活性的作用。结论 trh基因在原核融合表达系统pGEX 3X/DE3中获得成功表达 ,并得到纯度较高的TRH蛋白 ,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、制备抗TRH的多克隆和 (或 )单克隆抗体、构建基因工程菌苗。

武汉市6起食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的:了解武汉地区6起食物中毒病原菌副溶血弧菌分子特征。方法:对6起食物中毒共16株分离株进行药敏分析,运用PCR技术进行耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关溶血素基因(trh)检测,并进行肠道细菌重复基因间共同序列PCR(ER IC-PCR)分析。结果:16株副溶血弧菌对第三代头孢和喹诺酮类较敏感,tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR结果显示每起食物中毒菌株亲缘关系非常紧密,有3起属于同一个群,另外2起属于一个群。结论:武汉地区流行的主要副溶血弧菌分子特征为tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR技术是分析副溶血弧菌引起食物中毒菌株非常有效的工具。

副溶血性弧菌致病性和检测方法研究进展

本文对副溶血性弧菌的生物学性状、致病性特点、污染食品规律、食物中毒事件、检测标准等进行综述,重点介绍了溶血毒素和检测方法,提出预防副溶血性弧菌食物中毒5要点和关键措施,以期更好地预防副溶血性弧菌食物中毒的发生。

双重PCR检测海产品中携带trh毒力基因副溶血性弧菌的研究

为建立有效鉴别副溶血性弧菌及携带耐热相关溶血毒素基因的毒性弧菌的方法,用副溶血性弧菌种属特异性基因tlh及毒性基因trh设计引物进行双重PCR检测,对双重PCR体系进行优化,并对其特异性及PCR灵敏度进行检测,验证双重PCR体系检测能力及对人工污染样品的灵敏度。结果表明,该方法对海产品中的副溶血性弧菌及携带trh毒性基因的弧菌具有检测特异性,且灵敏度较高,可为食品检测提供一定的参考依据。

应用多重实时荧光PCR方法检测副溶血性弧菌及其毒力基因

目的应用多重实时荧光PCR方法检测113株食物中毒副溶血性弧菌分离株多种毒力基因携带情况。方法用水煮法提取菌株DNA后,利用四重实时荧光PCR方法对DNA同时进行4种基因的检测。结果所有的菌株均携带tlh基因,96株菌株（84.96%）携带tdh基因,9株菌株（7.96%）携带trh基因及62株菌株（54.87%）携带orf8基因的菌株同时tdh基因检测为阳性,无同时携带trh基因和orf8基因的菌株。trh、tdh基因和orf8基因阳性的菌株分布在O1-O4血清群。结论本市大部分食物中毒菌株携带除tlh基因外的1种或1种以上的毒力基因,一半以上的菌株为大流行株;四重实时荧光PCR方法可以同时鉴定和检测副溶血性弧菌及毒力基因,建议作为食源性暴发事件的常规检测方法,获得更快速、准确、完整的结果。