副溶血弧菌海产品和临床分离株的表型及溶血素相关基因分析

副溶血弧菌是(Vibrio parahaemolyticus)常见的食源性病原菌,可污染多种水产品,并引起人的食物中毒,其致病性与溶血素密切相关,如直接耐热溶血素(TDH)、TDH-相关溶血素(TRH)、不耐热溶血素(TLH)。用PCR方法对分离自浙江省部分地区的副溶血弧菌临床和海产品分离株的3种溶血素基因进行检测。结果表明,所有副溶血弧菌菌株均可检测到tlh基因;11株临床分离株均检测到tdh基因,而42株水产品分离株中只有1株检出tdh基因,携带tdh的分离株神奈川试验(KP)均为阳性。所有分离菌株中均未检测到trh基因以及其尿素酶试验呈阴性,由此可知trh基因可能与尿素酶基因连锁。副溶血弧菌分离株中致病性相关毒力因子TDH的阳性率极低,然而副溶血弧菌性食物中毒发生率较高,它们之间的关系及其发病机制还有待深入研究。

宁波副溶血性弧菌临床株毒力基因与多位点序列分型研究

目的了解宁波地区副溶血性弧菌临床分离株毒力基因分布以及分子分型特征。方法收集来源于食物中毒和散发腹泻患者副溶血弧菌菌株,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh),利用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)进行分子分型。结果2006—2012年共分离临床株248株,选择48株进行毒力基因和MLST分型研究。42株tdh+,为93.75%;11株trh+,为22.92%。48株菌株可分为9个ST型和一个未分型,ST3有32株,占66.67%;ST265有5株,占10.42%;ST120有3株,占6.25%。ST3克隆群中tdh+/trh-菌株有25株,占78.16%。与全国其他地区比较,在宁波临床株中发现ST262。结论 tdh+型是宁波地区副溶血性弧菌优势菌株。有9种ST型,以ST3克隆为主,其次为ST265和ST120。ST3克隆中以tdh+/trh-型为主。另发现1个独特的ST262菌株。

海盐县副溶血性弧菌血清分型和毒力基因携带状况分析

目的了解海盐县副溶血性弧菌的优势血清型及毒力基因携带状况。方法收集2015—2016年海盐县腹泻和食物中毒患者(人源株)、食物中毒调查样品(食源株)和海产品(海产株)中分离的96株副溶血性弧菌株,根据GB/T 4789.7—2013《食品微生物检验副溶血性弧菌检验》进行血清分型试验,并采用荧光定量PCR检测耐热直接溶血素基因(tdh)、耐热直接溶血素相关基因(trh)和不耐热直接溶血素基因(tlh)。结果 96株菌株的血清型以O3∶K6和O4∶K8为主,分别占35.42%(34株)和33.33%(32株)。人源株中检出的O3∶K6和O4∶K8型合计占人源株菌株数的87.76%,食源株中检出的占76.67%;海产株中未检出O3∶K6和O4∶K8型。96株菌株tlh基因均阳性,阳性率为100.00%;58株tdh基因阳性,阳性率为60.42%;1株trh基因阳性,阳性率为1.04%。人源株的毒力基因携带率为93.88%,高于食源株的43.33%(P<0.05);海产株中均未检出tdh和trh基因。O4∶K8型菌株毒力基因携带率为87.50%,O3∶K6型菌株毒力基因携带率为76.47%;O3∶K6和O4∶K8型菌株的毒力基因携带率合计为81.82%,高于其他血清型菌株的16.67%(P<0.05)。结论海盐县2015—2016年副溶血性弧菌的优势血清型是O3∶K6和O4∶K8,血清型与毒力基因携带有一定程度关联,O4∶K8血清型毒力基因携带率最高,其次为O3∶K6血清型。

深圳市副溶血性弧菌血清型及毒力基因特征研究

目的了解从深圳市食源性疾病患者和环境中分离的副溶血性弧菌的血清型和毒力基因特征。方法2006～2008年从食源性疾病患者和海水、海产品等外环境分离到133株副溶血性弧菌,按GB/T4789.7-2008进行血清学鉴定,用PCR技术检测耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh)。结果133株副溶血性弧菌中,以O3(43.6%)、O1(16.5%)、O4(16.5%)群为主。84.4%(76/90)的食源性疾病样本分离株携带毒力基因tdh,无单独携带trh基因的菌株;79.1%(34/43)的环境样本分离株不携带tdh和trh毒力基因,无同时携带两种基因的菌株。结论近年来引起深圳市食源性疾病的副溶血性弧菌主要为tdh阳性、trh阴性菌株,在外环境中检出的绝大多数副溶血性弧菌tdh基因和trh基因均为阴性;O3仍为主要的流行群。

全基因组数据应用于多克隆副溶血弧菌感染暴发的病原学分析

目的应用实时荧光PCR方法和基因组重测序分析等技术对一起副溶血弧菌(VP)导致的腹泻暴发事件进行病原学分析。方法收集暴发事件的病例信息,采集病例样本,使用实时荧光PCR方法筛选常见腹泻致病菌,分离鉴定VP并进行血清型鉴定,检测菌株毒力基因,采用微量肉汤稀释法检测菌株对抗菌药物的敏感性,使用全基因组测序技术进行菌株的遗传学分析。结果9份肛拭子共分离出13株VP菌株,其中O4∶KUT血清型7株(trh-/tdh+),O1∶KUT血清型6株(5株trh+/tdh+,1株trh-/tdh-)。在检测的30种抗菌药物中,所有菌株仅对氨苄西林耐药,对其他29种抗菌药物均敏感。在基于全基因组序列的遗传学分析中,13株VP形成4个相互独立且遗传距离较远的分支,Lineage 1(O4∶KUT、trh-/tdh+,2株)、Lineage 2(O1∶KUT、trh-/tdh-,1株)、Lineage 3(O1∶KUT、trh+/tdh+,5株)和Lineage 4(O4∶KUT、trh-/tdh+,5株),其中3例患者由来源于3个不同遗传分支的VP混合感染。结论本次事件由多血清型、多克隆的VP感染导致,基因组重测序技术在腹泻病暴发的病原分析中有较好的应用前景。

市售生食水产品污染副溶血性弧菌的病原学分析

目的通过对2011～2012年合肥市售生食水产品中分离的副溶血性弧菌血清型、毒力基因和耐药性的研究,了解生食海产品污染的副溶血性弧菌的病原学特征。方法按GB/T4789.7-2008方法进行分离鉴定,用PCR技术检测不耐热溶血素(tlh)基因、耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh)。药敏试验采用K-B法。结果两年检获的65株副溶血性弧菌分属11个血清群,以O2(41.54%)、O1(12.31%)、O3(12.31%)群为主。65株菌均不携带tdh和trh毒力基因,tlh基因全部阳性。药敏结果显示,65株菌对15种抗生素显示出较高的青霉素(100.0%)和氨苄西林(95.4%)耐药性。结论近年来合肥市售生食水产品中污染的副溶血性弧菌以O2血清型为主,tdh基因和trh基因均为阴性。