RNA干扰沉默p300基因对亚溶解型C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡和ATF3乙酰化的影响

目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)凋亡和激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)乙酰化水平的影响。方法:用DNA重组技术针对p300基因不同位点设计3个shRNA序列,然后分别克隆到真核表达载体pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中,经电转染入GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。Western blot筛选干涉效果最佳的p300 shRNA,流式细胞术检测GMC凋亡率,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western blot联合检查ATF3乙酰化水平。结果:核酸测序表明p300 shRNA重组质粒构建成功。Western blot显示p300 shRNA-2具有最佳沉默效率。p300 shRNA处理GMC后,由sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡率显著下降,同时ATF3乙酰化水平也明显降低。结论:成功构建了大鼠p300 shRNA真核表达质粒,并初步证实了p300能够促进sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡,其机制可能与p300乙酰化修饰ATF3有关。

溶解型防污涂料动态性能研究

利用海水动态模拟实验装置模拟船舶航行时船舶水下船体防污涂料的实际服役工况,对3类船舶溶解型防污涂层进行动态模拟实验,定期测量防污涂料铜离子释放率、表面粗糙度、涂层厚度等各项性能,研究各项性能的动态变化规律,并对3类溶解型防污涂料达到一年防污期效的涂层厚度进行了计算。研究结果表明,溶解型防污涂层铜离子释放率在实验初始有大幅下降,随后逐渐稳定,表面粗糙度随时间缓慢下降;模拟航速的上升会提高涂层防污剂的释放率,增加各种涂层表面粗糙度的变化程度,加快涂层厚度减薄。

亚溶解型补体C5b-9复合物与细胞内信号转导通路

在某些免疫相关的疾病中,补体系统活化后能产生膜攻击复合体,即C5b-9复合物参与组织细胞损伤等多种反应。就C5b-9作用靶细胞的方式而言,现认为有全溶解型(lytic)和亚溶解型(sub-lytic)之分。近些年来,随着人们对亚溶解型C5b-9(SC5b-9)研究的不断深入,愈来愈多的证据表明SC5b-9可作为疾病的启动原激活细胞内多条信号转导途径。由于SC5b-9的研究是目前医学界关注的热点问题,故本文着重就SC5b-9激活细胞时介导几条主要的信号转导途径的研究进展作一综述。

沉默血小板反应蛋白-1基因对亚溶解型C5b-9诱导肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP-1shRNA(shTSP-1)后,将shTSP-1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量。结果核酸序列分析证明,4种TSP-1shRNA重组质粒均构建成功。Western blot实验证实,构建的shTSP-1-3(Thbs1-3)具有最佳的沉默效率。将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成。结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用。

沉默TSP-1基因对亚溶解型C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖的影响。方法:设计合成针对TSP-1基因的发夹式siR-NA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,将TSP-1 shRNA(shTSP-1)转染体外培养的大鼠GMC,再给予亚溶解型C5b-9刺激。以实时PCR和蛋白质印迹法检查各组GMC中TSP-1、细胞周期蛋白D2(cyclin D2)及增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA及蛋白表达情况。另用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymi-dine incorporation,3H-TdR)和CCK-8(cell counting kit-8)方法分别检查GMC的DNA合成及细胞数量的改变。最后,观察各组GMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况。结果:使用shTSP-1沉默TSP-1基因,对于亚溶解型C5b-9刺激GMC后18 h诱导的cyclin D2和PCNA表达及DNA合成均无显著影响,但是shTSP-1能够抑制亚溶解型C5b-9刺激GMC 54 h时细胞数量的增加,同时能下调由亚溶解型C5b-9刺激GMC引起的α-SMA表达。结论:用shTSP-1沉默GMC中的TSP-1基因,可抑制亚溶解型C5b-9刺激GMC的增殖和α-SMA的合成,shTSP-1对GMC增殖的影响可能与其下调α-SMA的表达有一定关系。

溶解型可脱落防砂管的研究

出砂严重的井容易引起滤砂管的堵塞,且防砂周期长,成本高。另外,在防砂作业使用丢手工具时容易造成意想不到的井下事故,影响施工作业。溶解型可脱落防砂管采用高分子材料,具有强度高、耐酸、耐油等优点,其最显著的特点是防砂过程中不需要丢手,减少了后期处理的困难。

绿地溶解型居住区规划设计研究

随着人们生活水平的不断提高和房地产市场的不断成熟完善,住户要求平等的享受环境资源,获得等同的价值回报。绿地溶解型居住区规划设计在逐步地显现出其优势。本文通过从居住小区的景观均好性、住户的心理需求、开发商分期开发的特点与楼盘开发的连续性三个方面分析绿地溶解型居住区的优势,并通过武汉南车花园这个实施项目的规划设计来分析绿地溶解型设计的落实及特点。从而得出结论,溶解型绿地规划法是在市场、开发商与住户三者的契合点上产生的新的规划设计方法,并体现了这个民主时代的精神。

利用图像不连续特性的溶解型镜头检测算法

镜头边界检测是视频分析中的关键技术.传统的镜头边界检测算法只在切变或淡入/淡出等较为简单的镜头转变类型上有较好的检测性能,而针对溶解型镜头帧尚未有成熟的算法.为此,提出一种基于图像不连续性特性的溶解型镜头帧检测算法.首先提出一种基于图像不连续的特征,来衡量每帧图像相邻图像块之间的相似程度;然后利用支持向量机对特征数据进行预分类,并通过纠正错误分类帧和延伸溶解型镜头帧长度来修正分类结果;最终完成对溶解型镜头帧的检测.在TRECVid数据库上的实验结果表明,与传统的溶解型镜头帧检测算法相比,文中算法更能准确、有效地检测出溶解型镜头帧.

基因芯片筛查亚溶解型C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞基因表达差异的研究

目的:应用高通量的基因芯片技术筛查亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)介导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesan-gial cells,GMCs)的基因表达谱的变化。方法:体外分离、培养大鼠GMCs,人工质控sublytic C5b-9复合物的形成,并用其刺激培养GMCs,然后分别提取sublytic C5b-9刺激GMCs 40 min、3 h及未刺激对照组细胞的总RNA。经逆转录合成生物素标记的cDNA探针,然后与基因芯片杂交(涵盖31 000个转录本,代表28 000个基因)。经Affymetrix Scanner 3000扫描芯片荧光信号图像、GCOS1.4读取数据后将差异表达基因注释于GO基因功能分类体系,分析其相应的功能。结果:芯片检查数据显示,sublytic C5b-9刺激GMCs 40 min时上调2倍以上及下调2倍以上的基因分别为4 124个和2 234个,刺激3 h时上调2倍以上及下调2倍以上的基因分别为4 512个和2 859个;而sublytic C5b-9刺激GMCs 40 min和3 h后同时上调2倍以上及下调2倍以上的基因分别为2 325个和1 419个。sublytic C5b-9刺激GMCs表达差异基因其功能主要涉及生物学过程调节、生物调节、定位相关、刺激应答、生长发育、增殖、代谢过程、细胞生理过程、多细胞机体过程等。结论:Sublytic C5b-9刺激GMCs确能引起基因表达谱的变化。

亚溶解型C5b-9刺激GMC诱导KLF4与PCAF结合及结合部位的鉴定

目的:鉴定亚溶解型C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)诱导Kruppel样因子4(KLF4)与P300/CBP相关因子(PCAF)相互结合以及结合部位。方法:以亚溶解型C5b-9刺激GMC,应用免疫沉淀(IP)和免疫印迹(IB)法检测KLF4与PCAF相互结合情况。另构建KLF4、PCAF过表达和KLF4、PCAF不同结构域的质粒,将质粒转染GMC,应用IP和IB鉴定KLF4与PCAF的结合部位。结果与结论:亚溶解型C5b-9刺激GMC后能够诱导KLF4与PCAF相互结合,KLF4结合于PCAF转录结合结构域,而PCAF则结合在KLF4的转录激活结构域。

有关“沉淀生成又溶解型”问题例析

一、判断图象的正确性例1 用过量的盐酸溶液溶解一块镁、铝合金,向所得的溶液中滴加 NaoH 溶液,能正确反应生成的沉淀量 n 与滴加 NaOH 溶液体积 v 关系的图象是:( )

上调HBO1基因对亚溶解型C5b-9刺激大鼠GMCs生成CCL5的作用机制研究

目的研究上调乙酰基转移酶(HBO1)基因对亚溶解型C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生成趋化因子CCL5的作用机制。方法构建外源性真核表达重组质粒pIRES2-HBO1,利用NeonTM电转仪将重组质粒转染至体外培养的GMCs中,免疫印迹(WB)实验鉴定外源性过表达HBO1的结果。再进行分组实验(MEM组、pIRES2组、亚溶解型C5b-9组,以及pIRES2-HBO1+亚溶解型C5b-9组)。分别用实时PCR和ELISA法检查不同分组处理后CCL5的mRNA和蛋白水平,并用荧光素酶报告实验检测CCL5的启动子活性情况。结果WB实验表明,真核表达重组质粒pIRES2-HBO1构建成功。用pIRES2-HBO1转染GMCs后,GMCs在亚溶解型C5b-9复合物的刺激下生成CCL5基因的水平及其启动子活性均显著升高。结论成功构建了pIRES2-HBO1真核表达重组质粒,并初步证实HBO1基因表达能够正向调控亚溶解型C5b-9诱导大鼠GMCs生成趋化因子CCL5。

基于FVCOM的宁波-舟山海域溶解型危化品泄漏扩散模拟

基于FVCOM数值模型,以宁波-舟山海域相关实测资料为支撑,选取环氧氯丙烷为典型溶解型危化品,模拟该海域突发溶解型危化品泄漏后的扩散行为。模拟结果表明,从不同事故等级来看,一般事故和较大事故危化品泄漏24 h后,环氧氯丙烷浓度基本扩散至安全浓度(0.02 mg/L)以下,重大事故泄漏24 h后仍存在较大(30~190 km2)超安全浓度污染水域;从不同扩散潮时来看,落潮时刻扩散快于涨潮时刻,落潮时刻扩散至安全浓度以下较涨潮时刻快2~6 h;从不同泄漏点来看,册子水道扩散快于镇海码头,其中在册子水道泄漏时,基本沿水道扩散,在镇海码头泄漏时,易在北仑区沿岸、北仑和大榭岛之间滞留。

组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂缺失突变体治疗兔视网膜静脉阻塞的疗效

目的在兔视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion,RVO)模型上研究组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂缺失突变体(reteplase,r-PA)的溶栓效果,并与重组人组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(recombinant tissue-type plasminogen activator,rt-PA)对照,评价两种溶栓药物在静脉应用的疗效。方法光化学法诱导45只兔RVO模型(45只眼),分别静脉注射r-PA(15只眼)、rt-PA(15只眼)和注射用水(15只眼,对照组),4 h后观察血管再通情况,检测溶栓相关血液指标。结果给药后4h,r-PA组与rt-PA组静脉完全再通率分别为77.33%和为66.67%,无统计学意义;两者与对照组比较,完全再通率有统计学意义(P<0.001)。在给药后rt-PA组血浆凝血酶时间较r-PA组延长,血浆纤维蛋白原较r-PA组下降,且有统计学意义。结论静脉注射r-PA对兔RVO模型有治疗效果,疗效与rt-PA无明显区别,r-PA对凝血和纤溶系统的影响比rt-PA小。

蛋白酶在EDTA溶解颗粒型胆色素中的作用研究

利用化学分析方法考查了有无蛋白酶存在时EDTA溶解颗粒型胆色素石的溶石效果。发现蛋白酶的加入可使EDTA螯合钙的能力提高 6 .8倍 ,EDTA吸收钙的量占总钙的 93 .7%。

结膜下注射组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂治疗眼内积血

对前房积血及玻璃体积血,临床上常规应用尿激酶、安妥碘及玻璃酸酶等进行治疗,但疗效均不理想。组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(t-PA)是一种有特异性的新型溶血栓药物,已有报导将之用于促进眼内积血的吸收。笔者等用国产的t-PA(上海医科大学提供)治疗眼内积血,采用1次或多次的结膜下注射,效果满意,现报告如下:

微量Clark型溶解氧传感器透氧膜的研究

设计两组实验,分别对不同材质、不同厚度的透氧膜进行氧气透过性、热收缩性、拉伸性能和耐化学介质浸泡性能的测试和评价,通过比较0.03 mm厚度的聚乙烯(PE)薄膜、聚四氟乙烯(PTFE)薄膜和聚全氟乙丙烯(FEP)薄膜以及0.045 mm和0.05 mm厚度FEP薄膜的测试数据,得出0.03 mm的FEP薄膜综合性能最优的结论。最后,将0.03 mm的FEP透氧膜放入北京华科仪科技有限公司的HK-258便携式溶解氧分析仪,与其原有商用膜进行比较,实验表明0.03 mm的FEP透氧膜具有更快的氧气透过速度和更高的氧气透过率,可以提高自制溶解氧传感器的响应速率,使自制溶解氧传感器达到10^(-9)级检测精度。

新型在线溶解氧快速分析仪的应用

主要介绍了 HDY- 991 0 (HDY- 2 1 1 0 )型溶解氧监测仪的工作原理和现场调试应用情况 ,它采用了流行的单片处理器接口芯片 ,软件功能丰富 ,硬件结构简单 ,特别是溶解氧传感器采用了平衡型敏感技术 ,克服了以往扩散型传感器的维护量大和易受干扰的缺点 。

ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力因子研究

了解ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(community-acquired methicillin-resistant Staphy-lococcus aureus,CA-MRSA)携带毒力因子的情况。用PCR方法扩增ST59型CA-MRSA PSMα、PVL、SEA、SEB、SEC、SED、SEE、TSST-1、ETA、ETB基因。5株CA-MRSA全部检出PSMα基因和PVL基因,均未检出SEA、SEB、SEC、SED、SEE、TSST-1、ETA、ETB基因。PSMα和PVL基因是ST59型社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌常见的毒力因子。