291例溃疡性结肠炎患者中溶质相关载体26A3基因多态性分析

目的探讨溶质相关载体(SLC)26A3基因单核苷酸多态性(SNP)与溃疡性结肠炎(UC)的关系。方法收集291例UC患者和380例正常对照者,采用多重SNa Pshot技术检测SLC26A3(rs7810937、rs7785539和rs2108225)3个SNP位点的等位基因及基因型,并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果 UC组中(rs2108225)突变等位基因(G)和基因型(AG+GG)的频率均高于对照组(65.46%vs 58.68%,P=0.011;87.29%vs 81.58%,P=0.045)。与轻中度UC患者相比,重度UC患者中(rs7785539)突变等位基因(C)和基因型(GC+CC)的频率均显著增高(15.79%vs 6.13%,P=0.003;26.32%vs 12.25%,P=0.020)。(rs7810937,rs7785539和rs2108225)3个SNP位点彼此连锁,但UC和对照组中各单倍型差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SLC26A3(rs2108225)基因突变可能增加UC发病风险,rs7785539基因多态性与UC疾病严重程度相关,(rs7810937、rs7785539和rs2108225)构建的单倍型与UC发病风险无关。

溶质相关载体26A3基因多态性及其在结肠组织中的表达水平与克罗恩病的关系

目的研究浙江省汉族人群溶质相关载体26A3（SLC26A3）基因多态性及其在结肠组织中的表达水平与CD易感性的关系。方法纳入265例CD患者和566名性别、年龄相匹配的健康对照者，采用SNaPshot技术检测SLC26A3（rs17154444、rs7810937、rs7785539、rs2108225、rs6951457）的等位基因和基因型，并进行连锁不平衡和单倍型分析。选取8例结肠型CD患者和8例性别、年龄相匹配的良性结肠息肉患者（对照），采用免疫组织化学法检测结肠组织中SLC26A3蛋白质的表达水平。统计学方法采用t检验或秩和检验，并以非条件Logistic回归分析SLC26A3基因多态性分布差异及其对CD患者临床病理特征的影响。结果CD组rs2108225、rs7785539、rs6951457的突变等位基因频率分别为53.77%（285/530）、4.72%（25/530）、2.83%（15/530），突变基因型频率分别为76.23%（202/265）、9.43%（25/265）、5.66%（15/265），分别低于对照组的60.95%（690/1 132）、8.13%（92/1 132）、6.10%（69/1 132）和83.92%（475/566）、15.37%（87/566）、11.84%（67/566），差异均有统计学意义（P均〈0.05）；CD组rs17154444、rs7810937的突变等位基因频率分别为10.19%（54/530）、34.91%（185/530），突变基因型频率分别为18.49%（49/265）、56.23%（149/265），与对照组的8.30%（94/1 132）、30.92%（350/1 132）和15.55%（88/566）、51.77%（293/566）比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）。回肠末段型CD患者rs2108225突变等位基因G的频率为47.89%（91/190），突变基因型AG＋GG的频率为65.26%（62/95），分别低于结肠型的61.62%（122/198）和85.86%（85/99），差异均有统计学意义（P均〈0.012 5）。rs7810937、rs7785539、rs2108225彼此紧密连锁。CD组单倍型AGG和ACA的频率分别为53.96%（286/530）和4.34%（23/530），分别低于对照组的60.07%（680/1 132）和7.51%（85/1 132），差异均有统计学意义（χ^2＝5.534，P＝0.019；χ^2＝5.967，P＝0.015）；CD组单倍型AGA的频率为8.30%（44/530），高于对照组的1.15%（13/1 132），差异有统计学意义（χ^2＝7.793，P〈0.01）。8例结肠型CD患者结肠组织SLC26A3蛋白质的表达水平为0.19±0.07，低于良性结肠息肉患者的0.26±0.03，差异有统计学意义（t＝2.55，P＝0.023）。携带rs2108225基因型GG和AG的患者结肠组织SLC26A3蛋白质的表达水平分别为0.19±0.03和0.10±0.01，均低于基因型AA携带者的0.26±0.02，差异均有统计学意义（t＝3.19，P＝0.033; t＝9.06，P＝0.003）。结论SLC26A3 rs2108225、rs7785539和rs6951457基因多态性及其构建的单倍型与CD易感性相关。rs2108225基因多态性能影响结肠组织中SLC26A3的蛋白质表达水平。

溶质相关载体26A3基因多态性与溃疡性结肠炎的相关性

目的探讨溶质相关载体26A3（solute—linked carrier family26memberA3，SLC26A3）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）及单倍型与溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的相关性。方法收集416例UC患者和584名正常对照者，应用多重SNaPshot技术检测SLC26A3（rsl7154444、rs7810937、rs7785539、rs2108225和rs6951457）5个SNP位点的等位基因及基因型，并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果UC组中（rs2108225）等位基因（G）和基因型（AG＋GG）的频率均高于对照组（65．14％眠58．65％，P=0．030；87．02％VS．81．85％，P=0．012）。与轻中度UC患者相比，重度UC患者中（rs17154444）等位基因（C）和基因型（TC＋CC）的频率及（rs7785539）等位基因（C）和基因型（GC＋CC）的频率均显著增高（rs17154444：14．00％vs．6．01％，28．00％vs．11．48％，P均〈0．01；rs7785539：8．00％VS．7．38％，P=0．011；16．00％vs．13．93％，P=0．017）。rs17154444，rs7810937，rs7785539和rs2108225）4个SNP位点彼此连锁。与对照组相比，UC组中单倍型（T—A—G-G）的频率增高（62．60％VS．58．20％，P=0．017）；而单倍型（T-G-G-A）的频率降低（27．40％vs．31．60％，P=0．041）。结论SLC26A3（rs2108225）基因变异可能增加UC发病风险，rs17154444和rs7785539基因多态性与UC严重程度相关。携带rs17154444，rs7810937，rs7785539和rs2108225构建的单倍型（T-A-G-G）可能增加UC发病风险，而单倍型（T-G-G-A）可能降低UC发病风险。

茯苓酸通过Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路调控铁死亡改善阿尔茨海默病大鼠认知障碍的研究

背景阿尔茨海默病(AD)是一种常见且不可逆转的神经退行性脑疾病,严重影响患者的生活品质和生存质量,目前仍缺乏有效的治疗方法延缓或阻止疾病进展。中药及其活性成分在防治AD方面具有重要潜力。目的探讨茯苓酸(PA)对AD大鼠认知障碍及核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7A11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响。方法2022年1—9月将75只6~8周龄雄性SPF级SD大鼠依据随机数字表法分为对照组(Control组)、AD模型组(Model组)、PA治疗组(PA组),PA+Nrf2抑制剂组(PA+ML385组),除Control组外制备AD大鼠模型。造模成功后,PA组腹腔注射50 mg/kg PA,PA+ML385组腹腔注射50 mg/kg PA+30 mg/kg Nrf2抑制剂ML385,Control组与Model组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。末次给药24 h后进行Morris水迷宫实验,第2、4、6天进行定位航行实验,记录大鼠到达平台的时间(逃避潜伏期),第7天移走平台,记录大鼠在120 s内滞留平台时间和穿越平台次数。Nissl染色后观察各组大鼠海马神经元病理变化,普鲁士蓝染色检测海马组织铁沉积,免疫荧光染色检测海马神经元GPX4表达,检测海马组织谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+含量,蛋白质印迹法(Western blotting)检测大鼠海马组织Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达。结果末次给药第2、4、6天Model组逃避潜伏期高于Control组、PA组,PA+ML385组高于PA组,差异有统计学意义(P<0.05);Model组平台停留时间、穿越平台次数低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05)。Nissl染色结果示Model组神经元坏死严重,细胞核皱缩,尼氏体数目减少;PA组神经元坏死减少,排列紧密且尼氏体增多;PA+ML385组神经元损伤明显加重,尼氏体数目减少。普鲁士蓝染色结果示Model组铁沉积较Control组增加,与Model组比较,PA组铁沉积减少,PA+ML385组较PA组铁沉积增多。免疫荧光染色结果示Model组绿色荧光减弱,GPX4阳性细胞减少,PA组细胞绿色荧光较Model组增强,GPX4阳性细胞增多,PA+ML385组较PA组GPX4阳性细胞减少。Model组GSH低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05);Model组MDA、Fe2+高于Control组、PA组,PA+ML385组高于PA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Model组Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白相对表达量低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PA可改善AD大鼠认知障碍,其机制可能与通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制铁死亡有关。

茯苓酸通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究茯苓酸通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路抑制氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的心肌细胞铁死亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,诱导建立细胞OGD/R模型后以0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L茯苓酸处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各处理组细胞活力后筛选出合适的茯苓酸作用浓度。将H9c2细胞随机分为对照组、模型组、茯苓酸组、ML385组(Nrf2抑制剂组)、茯苓酸+ML385组,除对照组外其余各组建立细胞OGD/R模型后以茯苓酸、ML385分组处理,采用CCK-8法与流式细胞实验分别检测各组H9c2细胞活力、凋亡率;采用试剂盒检测各组H9c2细胞培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、促炎因子[前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、抗炎因子白细胞介素(IL)-10水平及细胞抗氧化因子[过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)]、铁死亡相关指标[铁含量、丙二醛(MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组H9c2细胞凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,茯苓酸组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05);ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与茯苓酸组比较,茯苓酸+ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。结论:茯苓酸可通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号而抑制OGD/R诱导的心肌细胞炎症、脂质过氧化与铁死亡,增强其抗氧化活性及细胞活力,最终减轻其细胞凋亡损伤。

鸦胆子苦醇调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对皮肤鳞癌细胞铁死亡的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对皮肤鳞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)细胞铁死亡的影响。方法:CCK-8法检测0、100、250、500、700、900 nmol/L鸦胆子苦醇处理后人cSCC细胞系A431细胞增殖率,筛选出合适的鸦胆子苦醇作用浓度。体外培养的A431细胞随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ;Nrf2激活剂)组、鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组,以鸦胆子苦醇和TBHQ分组处理后,采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法检测各组A431细胞增殖与凋亡;采用试剂盒检测各组A431细胞抗氧化因子[谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)]水平及铁死亡指标[铁含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组A431细胞增殖、凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,鸦胆子苦醇低、高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达均升高(P<0.05);鸦胆子苦醇高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达相比鸦胆子苦醇低剂量组进一步降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达进一步升高(P<0.05);TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与鸦胆子苦醇高剂量组相比,鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇通过下调Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路而促进铁死亡,诱导cSCC细胞凋亡,并抑制其增殖。

淫羊藿苷调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷调节核转录E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体蛋白7家族成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响。方法:将小胶质细胞(BV2)分为对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(35 mmol·L^(-1)葡萄糖)、淫羊藿苷低(35 mmol·L^(-1)葡萄糖+0.37μmol·L^(-1)淫羊藿苷)、高(35 mmol·L^(-1)葡萄糖+1.48μmol·L^(-1)淫羊藿苷)剂量组、抑制剂组(35 mmol·L^(-1)葡萄糖+1.48μmol·L^(-1)淫羊藿苷+1μmol·L^(-1)的Nrf2抑制剂ML385)。采用CCK-8法检测细胞增殖,进行细胞形态学观察,用超氧化物阴离子荧光探针(DHE)、氟硼二吡咯(BODIPYTM)检测细胞内活性氧(ROS)、脂质过氧化(LPO)水平,特异性荧光探针检测细胞内活性铁含量,Western Blot检测细胞Nrf2、SLC7A11、GPX4、血红素加氧酶1(HO-1)、环氧合酶2(COX2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)蛋白的表达。结果:与对照组比较,高糖组的BV2细胞形态不规则,出现细胞碎片,细胞光密度(OD450)值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达明显降低(P<0.05),ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达显著升高(P<0.05);与高糖组比较,低、高剂量淫羊藿苷组的BV2细胞损伤减少,细胞OD450值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达升高(P<0.05),ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达降低(P<0.05);与高剂量淫羊藿苷组比较,抑制剂组减弱了淫羊藿苷对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的抑制作用。结论:淫羊藿苷通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路从而抑制高糖诱导的小胶质细胞铁死亡。

三七皂苷R_(1)调控Nrf2介导的铁死亡途径改善ApoE^(−/−)小鼠动脉粥样硬化

目的探究三七皂苷R_(1)对高脂诱发的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(−/−))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的治疗作用及机制。方法高脂喂养雄性ApoE^(−/−)小鼠12周建立AS模型,将其随机分为模型组及三七皂苷R_(1)低、高剂量(25、35 mg/kg)组和铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1,1 mg/kg)组。以相同周龄的雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,给予普通饲料饲养。给药5周后采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察主动脉粥样斑块程度;加强普鲁士蓝染色法评估斑块铁沉积;生化试剂盒检测主动脉超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;免疫组化法检测主动脉4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)表达;Western blotting检测主动脉核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及4-HNE蛋白表达;qRT-PCR法检测主动脉Nrf2、Gpx4、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,Ptgs2)mRNA表达。结果三七皂苷R_(1)低、高剂量组及Fer-1组不同程度地影响ApoE^(−/−)小鼠的血脂水平(P<0.05、0.01),明显减轻主动脉粥样斑块程度,抑制铁沉积(P<0.01),提高SOD、GSH抗氧化能力(P<0.05、0.01),减少脂质过氧化MDA水平和4-HNE蛋白表达(P<0.05、0.01),上调铁死亡相关核Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白及Nrf2、Gpx4 mRNA的表达(P<0.01),下调Ptgs2 mRNA的表达(P<0.01),以三七皂苷R_(1)高剂量组效果最为显著。结论三七皂苷R_(1)改善ApoE^(−/−)小鼠脂代谢紊乱,抑制动脉粥样斑块形成,具有抗AS的作用,其机制可能与减少斑块铁沉积、激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路减少脂质过氧化,抑制铁死亡有关。

大鼠动情周期子宫及卵巢内SLC26A3的表达

目的探讨溶质相关载体26A3(SLC26A3)在大鼠动情周期子宫及卵巢内的表达。方法根据阴道涂片检测结果,将12只雌性Wister大鼠分别在动情前期(P)、动情期(E)、动情后期(M)和动情间期(D)断头处死,取出卵巢及子宫,提取总RNA及总蛋白,用RT-PCR及Western blot方法检测卵巢及子宫内SLC26A3在动情周期中各时期的表达。结果子宫内SLC26A3在动情期mRNA的转录水平和蛋白的表达水平相对较高,卵巢内SLC26A3在动情前期和动情期mRNA的转录水平和蛋白的表达水平相对较高。结论动情周期中,SLC26A3在大鼠卵巢及子宫内呈规律性表达,其变化为受孕做好了充分准备。

山柰酚调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对高糖诱导的滋养层细胞铁死亡的影响

目的探讨山柰酚调节核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-2 related factor,Nrf)2/溶质载体家族7成员(solute carrier family 7 member,SLC7A)11/谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)4信号通路对高糖诱导滋养层细胞铁死亡的影响。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分为对照组、模型组(25 mmol/L葡萄糖)、山柰酚组、ML385组(Nrf2抑制剂)、山柰酚+ML385组。采用细胞计数kit-8法检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验法检测细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-18以及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;生化法检测细胞中抗氧化因子超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、铁含量以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)相对水平;蛋白质印迹法检测各组HTR-8/SVneo细胞中Nrf2/SLC7A11/GPX4信号相关蛋白表达。结果山柰酚可升高细胞存活率、SOD、CAT、GSH水平和Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达,降低LDH释放量、细胞凋亡率、IL-6、IL-18、TNF-α、MDA、ROS水平及铁含量,抑制高糖诱导的滋养层细胞铁死亡;ML385可增强高糖诱导的滋养层细胞铁死亡,且ML385可减弱山柰酚对高糖诱导的滋养层细胞铁死亡的抑制作用。结论山柰酚可能通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路,抑制高糖诱导的滋养层细胞炎症与脂质过氧化,减轻铁死亡。