291例溃疡性结肠炎患者中溶质相关载体26A3基因多态性分析

目的探讨溶质相关载体(SLC)26A3基因单核苷酸多态性(SNP)与溃疡性结肠炎(UC)的关系。方法收集291例UC患者和380例正常对照者,采用多重SNa Pshot技术检测SLC26A3(rs7810937、rs7785539和rs2108225)3个SNP位点的等位基因及基因型,并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果 UC组中(rs2108225)突变等位基因(G)和基因型(AG+GG)的频率均高于对照组(65.46%vs 58.68%,P=0.011;87.29%vs 81.58%,P=0.045)。与轻中度UC患者相比,重度UC患者中(rs7785539)突变等位基因(C)和基因型(GC+CC)的频率均显著增高(15.79%vs 6.13%,P=0.003;26.32%vs 12.25%,P=0.020)。(rs7810937,rs7785539和rs2108225)3个SNP位点彼此连锁,但UC和对照组中各单倍型差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SLC26A3(rs2108225)基因突变可能增加UC发病风险,rs7785539基因多态性与UC疾病严重程度相关,(rs7810937、rs7785539和rs2108225)构建的单倍型与UC发病风险无关。

溶质相关载体26A3基因多态性与溃疡性结肠炎的相关性

目的探讨溶质相关载体26A3（solute—linked carrier family26memberA3，SLC26A3）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）及单倍型与溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的相关性。方法收集416例UC患者和584名正常对照者，应用多重SNaPshot技术检测SLC26A3（rsl7154444、rs7810937、rs7785539、rs2108225和rs6951457）5个SNP位点的等位基因及基因型，并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果UC组中（rs2108225）等位基因（G）和基因型（AG＋GG）的频率均高于对照组（65．14％眠58．65％，P=0．030；87．02％VS．81．85％，P=0．012）。与轻中度UC患者相比，重度UC患者中（rs17154444）等位基因（C）和基因型（TC＋CC）的频率及（rs7785539）等位基因（C）和基因型（GC＋CC）的频率均显著增高（rs17154444：14．00％vs．6．01％，28．00％vs．11．48％，P均〈0．01；rs7785539：8．00％VS．7．38％，P=0．011；16．00％vs．13．93％，P=0．017）。rs17154444，rs7810937，rs7785539和rs2108225）4个SNP位点彼此连锁。与对照组相比，UC组中单倍型（T—A—G-G）的频率增高（62．60％VS．58．20％，P=0．017）；而单倍型（T-G-G-A）的频率降低（27．40％vs．31．60％，P=0．041）。结论SLC26A3（rs2108225）基因变异可能增加UC发病风险，rs17154444和rs7785539基因多态性与UC严重程度相关。携带rs17154444，rs7810937，rs7785539和rs2108225构建的单倍型（T-A-G-G）可能增加UC发病风险，而单倍型（T-G-G-A）可能降低UC发病风险。

溶质相关载体26A3基因多态性及其在结肠组织中的表达水平与克罗恩病的关系

目的研究浙江省汉族人群溶质相关载体26A3（SLC26A3）基因多态性及其在结肠组织中的表达水平与CD易感性的关系。方法纳入265例CD患者和566名性别、年龄相匹配的健康对照者，采用SNaPshot技术检测SLC26A3（rs17154444、rs7810937、rs7785539、rs2108225、rs6951457）的等位基因和基因型，并进行连锁不平衡和单倍型分析。选取8例结肠型CD患者和8例性别、年龄相匹配的良性结肠息肉患者（对照），采用免疫组织化学法检测结肠组织中SLC26A3蛋白质的表达水平。统计学方法采用t检验或秩和检验，并以非条件Logistic回归分析SLC26A3基因多态性分布差异及其对CD患者临床病理特征的影响。结果CD组rs2108225、rs7785539、rs6951457的突变等位基因频率分别为53.77%（285/530）、4.72%（25/530）、2.83%（15/530），突变基因型频率分别为76.23%（202/265）、9.43%（25/265）、5.66%（15/265），分别低于对照组的60.95%（690/1 132）、8.13%（92/1 132）、6.10%（69/1 132）和83.92%（475/566）、15.37%（87/566）、11.84%（67/566），差异均有统计学意义（P均〈0.05）；CD组rs17154444、rs7810937的突变等位基因频率分别为10.19%（54/530）、34.91%（185/530），突变基因型频率分别为18.49%（49/265）、56.23%（149/265），与对照组的8.30%（94/1 132）、30.92%（350/1 132）和15.55%（88/566）、51.77%（293/566）比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）。回肠末段型CD患者rs2108225突变等位基因G的频率为47.89%（91/190），突变基因型AG＋GG的频率为65.26%（62/95），分别低于结肠型的61.62%（122/198）和85.86%（85/99），差异均有统计学意义（P均〈0.012 5）。rs7810937、rs7785539、rs2108225彼此紧密连锁。CD组单倍型AGG和ACA的频率分别为53.96%（286/530）和4.34%（23/530），分别低于对照组的60.07%（680/1 132）和7.51%（85/1 132），差异均有统计学意义（χ^2＝5.534，P＝0.019；χ^2＝5.967，P＝0.015）；CD组单倍型AGA的频率为8.30%（44/530），高于对照组的1.15%（13/1 132），差异有统计学意义（χ^2＝7.793，P〈0.01）。8例结肠型CD患者结肠组织SLC26A3蛋白质的表达水平为0.19±0.07，低于良性结肠息肉患者的0.26±0.03，差异有统计学意义（t＝2.55，P＝0.023）。携带rs2108225基因型GG和AG的患者结肠组织SLC26A3蛋白质的表达水平分别为0.19±0.03和0.10±0.01，均低于基因型AA携带者的0.26±0.02，差异均有统计学意义（t＝3.19，P＝0.033; t＝9.06，P＝0.003）。结论SLC26A3 rs2108225、rs7785539和rs6951457基因多态性及其构建的单倍型与CD易感性相关。rs2108225基因多态性能影响结肠组织中SLC26A3的蛋白质表达水平。

SLC26A3与NHERF4在溃疡性结肠炎小鼠肠道组织中的动态表达研究

目的观察分析钠氢转运体调节因子4(NHERF4)和溶质载体26A3(SLC26A3)在小鼠结肠炎模型炎症发展过程中的动态表达,为后期研究溃疡性结肠炎(UC)发病机制提供实验基础。方法以C57BL/6J小鼠为研究对象,采用恶唑酮(OXZ)诱导法制造UC模型,分别在第6、8、10、14天处死小鼠,运用疾病活动指数(DAI)评价小鼠结肠炎严重程度;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测小鼠肠道中SLC26A3及NHERF4的mRNA和蛋白水平变化。结果与同期对照组相比,实验组第8天小鼠肠黏膜中SLC26A3的mRNA量降低(P <0. 05),而NHERF4的mRNA量增高(P <0. 05),结肠炎活动恢复过程中SLC26A3的蛋白表达呈先降低后增高的趋势,与NHERF4的蛋白表达及DAI评分呈负相关性,NHERF4的蛋白表达呈先增高后降低的趋势,与DAI评分变化趋势同步。结论在小鼠结肠炎的进展过程中,SLC26A3变化趋势与NHERF4的变化趋势相反,提示在UC发生发展过程中NHERF4可能参与调节SLC26A3的表达改变,但该结论需要进一步的干预实验进行验证。

LPA对人结肠腺癌Caco2细胞SLC26A3表达的影响

为探讨溶血磷脂酸(LPA)对溶质载体26 A3(solute carrier 26 A3′SLC26A3或DRA)在Caco2细胞中细胞内定位及蛋白表达的影响。采用构建pIRES2-ZsGreen1-SLC26A3质粒,转染Caco2细胞,G418筛选获稳转pIRES2-ZsGreen1-SLC26A3 Caco2细胞。设立未处理的Caco2细胞组(Caco2组)、转染空质粒的Caco2组(NP-Caco2组)、转染SLC26A3质粒的Caco2组(SLC26A3-Caco2组)、LPA处理的转染空质粒的Caco2组(LPA+NP-Caco2组)和LPA处理的转染SLC26A3质粒的Caco2组(LPA+SLC26A3-Caco2组),以LPA与Caco2细胞共孵育12 h为观察时间点(LPA浓度为100μmoL/L),利用细胞免疫荧光实验观察Caco2细胞中SLC26A3的定位分布,Western blot法检测Caco2细胞中SLC26A3蛋白的表达。结果显示,细胞免疫荧光实验观察结果显示LPA+SLC26A3-Caco2组SLC26A3细胞膜定位较SLC26A3-Caco2组的略有增加;Western blot检测结果显示LPA+NP-Caco2组的糖基化SLC26A3蛋白表达量较Caco2组与NP-Caco2组的均增加,有统计学意义(相对β-actin的表达量,LPA+NP-Caco2组vs.Caco2组:0.83±0.446 vs.0.14±0.050,P=0.018;LPA+NP-Caco2组vs.Np-Caco2组:0.83±0.446 vs.0.29±0.032,P=-0.044)。由此可知,LPA可促进SLC26A3在Caco2细胞的细胞膜定位和蛋白表达,从而为LPA作为治疗结肠炎相关性腹泻的候选药物提供更多理论依据。

SLC26A3在结直肠癌中的表达、功能及影响机制探讨

目的为分析SLC26A3在结肠癌中的表达、功能和PI3K/AKT信号通路对SLC26A3表达的影响。方法通过对数据库信息挖掘,探索SLC26A3在肿瘤疾病尤其是结直肠腺癌中的表达情况,分析其在结直肠癌中可能发挥的功能。利用细胞学实验,观察分析PI3K/AKT信号通路对SLC26A3表达的影响。结果SLC26A3在肿瘤组织中的表达相较正常组织呈现低水平表达。虽未发现SLC26A3对于结直肠腺癌的肿瘤分期和预后有显著影响,但高表达SLC26A3的病人长期生存的发生率较高。在Caco-2细胞中,激活PI3K/AKT信号通路低激活状态对SLC26A3的表达起促进作用,但持续过度激活对SLC26A3的表达起抑制作用(P<0.05)。结论SLC26A3在结直肠癌中低表达,SLC26A3高表达有利于患者的长期生存,PI3K/AKT信号通路对SLC26A3的表达可能发挥着双向调节的作用。

Hsa_circ_0087354通过hsa-miR-199-3p/SLC7A11调节MG-63细胞增殖及氧化还原状态

环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类新型非编码RNA。已有研究表明,其在细胞氧化还原反应中发挥重要作用。在本文前期研究中,发现通过real-time PCR检测,hsa_circ_0087354与细胞的氧化还原状态密切相关。过表达hsa_circ_0087354后,活性氧1(reactive oxygen species1,ROS1)基因表达显著下降(P<0.01),超氧化物歧化酶1(surperoxide dismutase1,SOD1)表达显著升高(P<0.05);细胞内SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)活性以及谷胱甘肽(glutathione,GSH)浓度显著升高(P<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.05)。生物信息学分析预测,hsa-miR-199-3p与hsa_circ_0087354和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)存在结合位点,可能存在靶向调控关系。双荧光素酶报告基因结果证实了hsa-miR-199-3p与hsa_circ_0087354和SLC7A11之间的靶向调控关系。构建过表达hsa_circ_0087354质粒和ctrl质粒,合成hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-199b-3p和hsa-miR-NC mimics。通过Real-time PCR分析发现,转染hsa_circ_0087354后,hsa-miR-199-3p表达显著降低(P<0.01),SLC7A11表达显著升高(P<0.05)。转染hsa-miR-199-3p后,SLC7A11基因表达显著下降(P<0.001),细胞内SOD和GPx活性以及GSH浓度显著降低(P<0.01),细胞增殖能力下降(P<0.05)。研究结果表明,hsa_circ_0087354通过吸附hsa-miR-199-3p,增强SLC7A11表达,促进氧化应激MG-63细胞增殖,降低氧化应激水平。

先天性失氯性腹泻1例报告并文献复习

目的探讨先天性失氯性腹泻(CLD)的临床特点、诊疗及预后。方法报告1例CLD患儿,复习相关文献,分析CLD患儿的临床特点、诊断、鉴别诊断、基因诊断特点、治疗和预后。结果患儿生后1周内发病,即出现顽固水样腹泻,伴生长发育缓慢,且出现,存在早产、产前羊水过多、生后持续性水样腹泻、生长缓慢、难以纠正的水电解质酸碱平衡紊乱(重度脱水、低钾血症、低钠血症、低氯血症、代谢性碱中毒)的特点。因早期尿氯增高而误诊为Bartter综合征,予口服氯化钾治疗后病情反复。7岁5个月时基因检测显示SLC26A3基因第15外显子(c.1631T>A[p.I544N])纯合致病性突变,父母为同一位点杂合突变携带者,确诊为CLD后予完善粪便电解质检查提示高氯。早期给予补充氯化钠、氯化钾及纠正脱水等处理,长期给予10%氯化钾溶液替代治疗,患儿水样腹泻减轻,监测电解质和血气趋近正常,目前生长与发育较好。结论对于持续水样腹泻及相关临床表现的患儿,需警惕CLD的可能,注意与Batter综合征鉴别,早期可进行血、尿和大便电解质检测等协助诊断,SLC26A3基因分析有助于早期诊断。