miR-9-5p和溶质载体家族26硫酸盐转运蛋白成员2在哮喘患儿血清中的表达及与疾病严重程度的相关性

目的探讨miR-9-5p和溶质载体家族26硫酸盐转运蛋白成员2(SLC26A2)在哮喘患儿血清中的表达情况及与疾病严重程度的相关性。方法选取2019年7月—2021年6月在杭州市富阳区第一人民医院就诊并确诊为哮喘的患儿168例为研究对象,根据疾病严重程度分为重度组(52例)、中度组(56例)及轻度组(60例),另选取同期在该院体检且与患儿一般资料匹配的健康儿童50例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组血清中miR-9-5p、SLC26A2 mRNA表达水平;检测各组血清炎症细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及C-反应蛋白(CPR)]水平;采用肺功能检测仪检测所有研究对象的肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)];采用Pearson法分析miR-9-5p与SLC26A2表达水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-9-5p、SLC26A2水平预测重度哮喘患儿的价值。结果哮喘患儿血清中miR-9-5p、SLC26A2表达水平均低于对照组,且miR-9-5p、SLC26A2表达水平随着哮喘严重程度的增加而不断降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与健康儿童相比,哮喘患儿血清中TNF-α、CRP、IL-6表达均上升,FEV1、FEV1/FVC水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。哮喘患儿血清中miR-9-5p、SLC26A2水平与TNF-α、CRP及IL-6均呈负相关关系(r_(miR-9-5p)=-0.506、-0.657、-0.411,rSLC26A2=-0.301、-0.399、-0.279,均P<0.05),与FEV1、FEV1/FVC均呈正相关关系(r_(miR-9-5p)=0.376、0.46,rSLC26A2=0.262、0.254,均P<0.05)。miR-9-5p与SLC26A2表达呈正相关关系(r=0.477,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清miR-9-5p、SLC26A2水平预测重度哮喘患儿的曲线下面积(AUC)分别为0.934(95%CI:0.885~0.967)、0.884(95%CI:0.826~0.928),对应的灵敏度分别为98.15%、77.78%,特异度分别为82.46%、83.33%,血清miR-9-5p、SLC26A2水平联合预测重度哮喘患儿的AUC为0.974(95%CI:0.936~0.992),灵敏度为98.14%,特异度为85.96%。结论miR-9-5p和SLC26A2在哮喘患儿血清中低表达,二者呈正相关关系,且联合检测对评估重度哮喘患儿的临床价值高于单一指标,具有一定价值,可作为临床诊断重度哮喘患儿的潜在标志物。

溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1 HaeⅢ基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1 HaeⅢ(SLC2A1 HaeⅢ,g20882C>T)基因多态性与DN的关系。方法将380例T2DM患者分为DN组与T2DM组,采用PCRRLFP检测SLC2A1 HaeⅢ(g20882C>T)基因分型,探讨不同基因型患者与DN发病及相关指标的关系。结果 T2DM组与DN组CC、TT基因型比较,差异有统计学意义(P<0.05),C、T等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。TT基因型患者胱抑素C(Cys-C)、Hcy、UAER低于CT、CC基因型患者(P<0.05),而eGFR高于CC、CT型患者(P<0.05)。CT基因型患者Cys-C、Hcy低于CC型患者(U=5.67、4.22,P<0.05),而eGFR高于CC型患者(U=4.31,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,CC基因型(OR=2.105,95%CI:1.928~8.117,P<0.05)及C等位基因频率(OR=1.832,95%CI:1.003~5.462,P<0.05)为DN的危险因素。结论 SLC2A1 HaeⅢ(g20882C>T)为DN易感基因,导致Hcy、Cys-C过表达,引起DN的发生发展。

茯苓酸通过Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路调控铁死亡改善阿尔茨海默病大鼠认知障碍的研究

背景阿尔茨海默病(AD)是一种常见且不可逆转的神经退行性脑疾病,严重影响患者的生活品质和生存质量,目前仍缺乏有效的治疗方法延缓或阻止疾病进展。中药及其活性成分在防治AD方面具有重要潜力。目的探讨茯苓酸(PA)对AD大鼠认知障碍及核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7A11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响。方法2022年1—9月将75只6~8周龄雄性SPF级SD大鼠依据随机数字表法分为对照组(Control组)、AD模型组(Model组)、PA治疗组(PA组),PA+Nrf2抑制剂组(PA+ML385组),除Control组外制备AD大鼠模型。造模成功后,PA组腹腔注射50 mg/kg PA,PA+ML385组腹腔注射50 mg/kg PA+30 mg/kg Nrf2抑制剂ML385,Control组与Model组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。末次给药24 h后进行Morris水迷宫实验,第2、4、6天进行定位航行实验,记录大鼠到达平台的时间(逃避潜伏期),第7天移走平台,记录大鼠在120 s内滞留平台时间和穿越平台次数。Nissl染色后观察各组大鼠海马神经元病理变化,普鲁士蓝染色检测海马组织铁沉积,免疫荧光染色检测海马神经元GPX4表达,检测海马组织谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+含量,蛋白质印迹法(Western blotting)检测大鼠海马组织Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达。结果末次给药第2、4、6天Model组逃避潜伏期高于Control组、PA组,PA+ML385组高于PA组,差异有统计学意义(P<0.05);Model组平台停留时间、穿越平台次数低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05)。Nissl染色结果示Model组神经元坏死严重,细胞核皱缩,尼氏体数目减少;PA组神经元坏死减少,排列紧密且尼氏体增多;PA+ML385组神经元损伤明显加重,尼氏体数目减少。普鲁士蓝染色结果示Model组铁沉积较Control组增加,与Model组比较,PA组铁沉积减少,PA+ML385组较PA组铁沉积增多。免疫荧光染色结果示Model组绿色荧光减弱,GPX4阳性细胞减少,PA组细胞绿色荧光较Model组增强,GPX4阳性细胞增多,PA+ML385组较PA组GPX4阳性细胞减少。Model组GSH低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05);Model组MDA、Fe2+高于Control组、PA组,PA+ML385组高于PA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Model组Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白相对表达量低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PA可改善AD大鼠认知障碍,其机制可能与通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制铁死亡有关。

茯苓酸通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究茯苓酸通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路抑制氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的心肌细胞铁死亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,诱导建立细胞OGD/R模型后以0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L茯苓酸处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各处理组细胞活力后筛选出合适的茯苓酸作用浓度。将H9c2细胞随机分为对照组、模型组、茯苓酸组、ML385组(Nrf2抑制剂组)、茯苓酸+ML385组,除对照组外其余各组建立细胞OGD/R模型后以茯苓酸、ML385分组处理,采用CCK-8法与流式细胞实验分别检测各组H9c2细胞活力、凋亡率;采用试剂盒检测各组H9c2细胞培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、促炎因子[前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、抗炎因子白细胞介素(IL)-10水平及细胞抗氧化因子[过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)]、铁死亡相关指标[铁含量、丙二醛(MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组H9c2细胞凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,茯苓酸组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05);ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与茯苓酸组比较,茯苓酸+ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。结论:茯苓酸可通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号而抑制OGD/R诱导的心肌细胞炎症、脂质过氧化与铁死亡,增强其抗氧化活性及细胞活力,最终减轻其细胞凋亡损伤。

高表达SLC2A1介导非小细胞肺癌顺铂耐药

目的探讨溶质载体家族2成员1(solute carrier family 2,member 1,SLC2A1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)化疗耐药性中的作用。方法通过oncomine、GEPIA、HPA、GEO等数据库或在线分析工具分析SLC 2A1在NSCLC及顺铂耐药性NSCLC细胞系的表达;通过String结合DAVID 6.8分析SLC 2A1互作基因的通路富集;运用Coremine工具进行文本挖掘分析SLC 2A1介导NSCLC化疗耐药性的生物过程;通过Kaplan Meier-plotter分析SLC 2A1表达量与NSCLC患者总生存期(overall survival,OS)的相关性,以及SLC 2A1表达量与NSCLC化疗患者生存期的相关性;通过RT-PCR及Western blot法检测SLC2A1在顺铂敏感或耐药性NSCLC细胞系中的表达;MTT法结合caspase 3活性检测分析顺铂耐药NSCLC细胞系的凋亡情况。结果SLC2A1在NSCLC患者及顺铂耐药性的NSCLC细胞系中的显著升高,而且与患者的总生存期显著相关;顺铂耐药NSCLC细胞系高表达SLC2A1抑制了顺铂诱导的癌细胞凋亡,HIF-1信号通路、癌症中心碳代谢途径在SLC2A1互作基因中具有显著性富集。结论高表达SLC2A1通过抑制凋亡介导NSCLC顺铂耐药性。

溶质载体家族3成员2表达与双硫死亡、铁死亡及肿瘤关系的研究进展

铁死亡和双硫死亡与多种疾病相关。铁死亡的特征是铁离子和脂质活性氧的异常累积,而双硫死亡则是二硫化物的异常累积。溶质载体家族3成员2(SLC3A2)作为溶质载体家族的一员,不仅参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,还参与细胞铁死亡和双硫死亡,在肿瘤的发生发展中起关键作用。本文阐述了SLC3A2与双硫死亡、铁死亡和肿瘤关系的研究进展,旨在为癌症靶向治疗提供理论基础。

hsa_circ_0000520通过调控miR-556-5p/SLC38A2促进乳腺癌的发生和转移

目的:探究hsa_circ_0000520促进乳腺癌发生和转移的作用机制。方法:双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证miR-556-5p与hsa_circ_0000520、溶质载体家族38成员2(SLC38A2)的靶向关系。MCF7细胞分为sh-NC组、sh-hsa_circ_0000520组、sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组、sh-hsa_circ_0000520+anti-miR-556-5p组,qRT-PCR或Western blot检测细胞中hsa_circ_0000520、miR-556-5p、SLC38A2表达水平;MTT检测、平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;划痕愈合实验、Transwell实验评估细胞迁移、侵袭能力。通过裸鼠成瘤实验评估hsa_circ_0000520对miR-556-5p/SLC38A2的调控作用及对移植瘤生长的影响。结果:经验证,MCF7细胞中miR-556-5p与hsa_circ_0000520、SLC38A2均存在靶向关系。与sh-NC组比较,sh-hsa_circ_0000520组可降低MCF7细胞中hsa_circ_0000520、SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数目、划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数(P<0.05),升高miR-556-5p表达水平(P<0.05);与sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组比较,sh-hsa_circ_0000520+anti-miR-556-5p组可降低MCF7细胞中miR-556-5p表达水平(P<0.05),升高SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数目、划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数(P<0.05),而对hsa_circ_0000520表达无显著影响(P>0.05)。裸鼠成瘤实验结果表明,敲低移植瘤中hsa_circ_0000520的表达可升高miR-556-5p表达水平并降低SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平,同时降低肿瘤体积和肿瘤重量(P<0.05)。结论:hsa_circ_0000520可能通过靶向调控miR-556-5p/SLC38A2促进乳腺癌的发生和转移。

鸦胆子苦醇调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对皮肤鳞癌细胞铁死亡的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对皮肤鳞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)细胞铁死亡的影响。方法:CCK-8法检测0、100、250、500、700、900 nmol/L鸦胆子苦醇处理后人cSCC细胞系A431细胞增殖率,筛选出合适的鸦胆子苦醇作用浓度。体外培养的A431细胞随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ;Nrf2激活剂)组、鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组,以鸦胆子苦醇和TBHQ分组处理后,采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法检测各组A431细胞增殖与凋亡;采用试剂盒检测各组A431细胞抗氧化因子[谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)]水平及铁死亡指标[铁含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组A431细胞增殖、凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,鸦胆子苦醇低、高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达均升高(P<0.05);鸦胆子苦醇高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达相比鸦胆子苦醇低剂量组进一步降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达进一步升高(P<0.05);TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与鸦胆子苦醇高剂量组相比,鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇通过下调Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路而促进铁死亡,诱导cSCC细胞凋亡,并抑制其增殖。

溶质载体家族3成员2在肝细胞癌中的作用及机制研究进展

目的总结溶质载体家族3成员2(solute carrier family 3 member A2,SLC3A2)基因在肝细胞癌发生和发展过程中的作用及相关机制,归纳并寻找该基因在肝细胞癌患者诊断、治疗、预后等方面的临床运用前景和价值。方法收集并整理近年来国内外SLC3A2基因及它与肝细胞癌相关研究的文献并进行综述与总结。结果SLC3A2在肝细胞癌中的表达明显高于正常肝组织,它主要通过调节细胞内外氨基酸的转运、抑制细胞发生铁死亡、激活雷帕霉素的机制靶点蛋白复合体信号途径及整合素信号途径而影响肝细胞癌的进展,并在患者的诊断、治疗及预后方面发挥重要作用。结论从本综述收集的文献总结结果提示,SLC3A2与肝细胞癌的迁移、侵袭、增殖和细胞凋亡密切相关,有望作为评判肝细胞癌患者生存期和预后的指标,并有可能成为未来肝细胞癌有效治疗的靶点之一。

新候选肿瘤抑制基因溶质载体8号家族中的2号成员基因对胶质瘤细胞株U87的侵袭迁移能力和裸鼠致瘤性的影响

目的 探讨溶质载体8号家族中的2号成员基因（SLC8A2）对胶质瘤细胞U87的迁移侵袭能力和裸鼠移植瘤生长的影响及其机制.方法 构建稳定表达SLC8A2基因的U87-SLC8A2细胞株（实验组）和稳定表达GFP的U87-NC细胞株（阴性对照组）.Transwell小室及预铺50μl Matrigel基质胶的Transwell小室检测SLC8A2对U87细胞侵袭和迁移能力的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染该基因后肿瘤细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9及MT1-MMP转录水平的变化,明胶酶谱法检测分泌至细胞培养基中MMP-2酶活性的变化；裸鼠皮下移植瘤实验（5只/组）检测SLC8A2对U87细胞致瘤性的影响.结果 U87-NC和U87-SLC8A2穿过Transwell小室基膜的细胞数分别为（279.70±17.50）个及（4.30±0.58）个,而穿过预铺Matrigel基质胶的Transwell小室基膜的细胞数分别为（274.0±21.3）个和（12.7±1.2）个,差异有统计学意义（P＜0.01）；与U87-NC比较,U87-SLC8A2细胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MTl-MMP的转录水平分别下降了（55.4±3.2）％、（78.7±5.3）％、（79.7±4.6）％、（53.9±3.2）％及（70.9±4.4）％（P＜0.01）,且U87-SLC8A2细胞分泌的MMP-2酶活性较U87-NC下降了（93.2±5.1）％（P＜0.01）；接种U87-SLC8A2细胞的裸鼠全都不致瘤,而接种对照组细胞的裸鼠全部致瘤成功.结论 SLC8A2可下调MMP的活性而抑制胶质瘤细胞U87的侵袭迁移能力,并能显著抑制U87细胞在裸鼠体内的生长及增殖.

基于生物信息学分析SLC2A1在胰腺癌中的表达及临床意义

目的探讨胰腺癌中溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1(Solute carrier family 2 facilitated glucose transporter member 1,SLC2A1)的表达及临床意义。方法检索CEPIA数据库中SLC2A1表达量,分析胰腺癌和正常对照组SLC2A1的差异。从TCGA数据库中下载胰腺癌SLC2A1 RNA数据及临床病理资料,利用R和SPSS软件分析SLC2A1表达与临床病理特征及预后的关系。Kaplan-Meier plotter和CEPIA数据库分析SLC2A1表达与生存时间的关系。结果CEPIA数据库显示胰腺癌组织中SLC2A1的表达量明显高于正常对照组(P<0.05)。SLC2A1高表达与胰腺癌浸润深度显著相关(P=0.002),而与年龄、性别、病理分级、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期的相关性均无统计学意义(P均>0.05)。Kaplan-Meier plotter结果显示SLC2A1低表达组的总生存期和无复发生存期均较高表达组明显延长(P均<0.05)。CEPIA显示SLC2A1低表达组的总生存期和无病生存期均较高表达组明显延长(P均<0.05)。COX多因素回归分析提示SLC2A1是胰腺癌患者总生存期的独立危险因素。结论SLC2A1在胰腺癌组织中高表达,与胰腺癌浸润深度、总生存期、无复发生存期、无病生存期显著相关,而且是胰腺癌患者总生存期的独立危险因素。

基于生物信息学分析SLC2A1在胰腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨胰腺癌中溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1(Solute carrier family 2 facilitated glucose trans-porter member 1,SLC2A1)的表达及临床意义.方法 检索GEPIA数据库中SLC2A1表达量,分析胰腺癌和正常对照组SLC2A1的差异.从TCGA数据库中下载胰腺癌SLC2A1 RNA数据及临床病理资料,利用R和SPSS软件分析SLC2A1表达与临床病理特征及预后的关系.Kaplan-Meier plotter和GEPIA数据库分析SLC2A1表达与生存时间的关系.结果 GEPIA数据库显示胰腺癌组织中SLC2Al的表达量明显高于正常对照组(P<0.05).SLC2A1高表达与胰腺癌浸润深度显著相关(P=0.002),而与年龄、性别、病理分级、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期的相关性均无统计学意义(P均>0.05).Kaplan-Meier plotter结果显示SLC2A1低表达组的总生存期和无复发生存期均较高表达组明显延长(P均<0.05).GEPIA显示SLC2A1低表达组的总生存期和无病生存期均较高表达组明显延长(P均<0.05).COX多因素回归分析提示SLC2A1是胰腺癌患者总生存期的独立危险因素.结论 SLC2A1在胰腺癌组织中高表达,与胰腺癌浸润深度、总生存期、无复发生存期、无病生存期显著相关,而且是胰腺癌患者总生存期的独立危险因素.

淫羊藿苷调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷调节核转录E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体蛋白7家族成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响。方法:将小胶质细胞(BV2)分为对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(35 mmol·L^(-1)葡萄糖)、淫羊藿苷低(35 mmol·L^(-1)葡萄糖+0.37μmol·L^(-1)淫羊藿苷)、高(35 mmol·L^(-1)葡萄糖+1.48μmol·L^(-1)淫羊藿苷)剂量组、抑制剂组(35 mmol·L^(-1)葡萄糖+1.48μmol·L^(-1)淫羊藿苷+1μmol·L^(-1)的Nrf2抑制剂ML385)。采用CCK-8法检测细胞增殖,进行细胞形态学观察,用超氧化物阴离子荧光探针(DHE)、氟硼二吡咯(BODIPYTM)检测细胞内活性氧(ROS)、脂质过氧化(LPO)水平,特异性荧光探针检测细胞内活性铁含量,Western Blot检测细胞Nrf2、SLC7A11、GPX4、血红素加氧酶1(HO-1)、环氧合酶2(COX2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)蛋白的表达。结果:与对照组比较,高糖组的BV2细胞形态不规则,出现细胞碎片,细胞光密度(OD450)值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达明显降低(P<0.05),ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达显著升高(P<0.05);与高糖组比较,低、高剂量淫羊藿苷组的BV2细胞损伤减少,细胞OD450值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达升高(P<0.05),ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达降低(P<0.05);与高剂量淫羊藿苷组比较,抑制剂组减弱了淫羊藿苷对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的抑制作用。结论:淫羊藿苷通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路从而抑制高糖诱导的小胶质细胞铁死亡。

淫黄葛合剂对APP_(swe)/PS1_(dE9)小鼠行为及 海马胱氨酸/谷氨酸反向转运体的影响

目的观察淫黄葛合剂对APP_(swe)/PS1_(dE9)小鼠行为及海马胱氨酸/谷氨酸反向转运体的表达影响。方法6只8月龄雄性C57BL/6J小鼠为正常组,18只8月龄雄性APP_(swe)/PS1_(dE9)小鼠随机分为模型组、合剂组、地拉罗司(deferasirox,DFX)组,每组6只。正常组、模型组给予蒸馏水灌胃,合剂组灌胃淫黄葛合剂(淫羊藿苷120 mg·kg^(-1)、黄芪甲苷80 mg·kg^(-1)、葛根素80 mg·kg^(-1)),DFX组灌胃DFX(100 mg·kg^(-1)),每日1次,干预2个月。利用八臂迷宫实验检测各组小鼠空间、学习记忆能力;免疫荧光观察正常组、模型组小鼠海马CA3区溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)与溶质载体家族3成员2(solute carrier family 3 member 2,SLC3A2)的表达水平;Western blot和real time q-PCR检测各组小鼠海马SLC7A11、SLC3A2蛋白及mRNA表达水平。结果与正常组相比,模型组小鼠空间学习记忆能力下降,海马CA3区SLC7A11、SLC3A2表达下降(P<0.05),海马SLC7A11、SLC3A2蛋白及mRNA表达下降(P<0.05);与模型组相比,合剂组、DFX组空间学习记忆能力提升,海马SLC7A11、SLC3A2蛋白及mRNA表达上升(P<0.05);合剂组与DFX组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论淫黄葛合剂可以改善APP_(swe)/PS1_(dE9)小鼠的行为障碍,其机制与促进海马SLC7A11、SLC3A2的表达有关。

三七皂苷R_(1)调控Nrf2介导的铁死亡途径改善ApoE^(−/−)小鼠动脉粥样硬化

目的探究三七皂苷R_(1)对高脂诱发的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(−/−))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的治疗作用及机制。方法高脂喂养雄性ApoE^(−/−)小鼠12周建立AS模型,将其随机分为模型组及三七皂苷R_(1)低、高剂量(25、35 mg/kg)组和铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1,1 mg/kg)组。以相同周龄的雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,给予普通饲料饲养。给药5周后采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察主动脉粥样斑块程度;加强普鲁士蓝染色法评估斑块铁沉积;生化试剂盒检测主动脉超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;免疫组化法检测主动脉4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)表达;Western blotting检测主动脉核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及4-HNE蛋白表达;qRT-PCR法检测主动脉Nrf2、Gpx4、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,Ptgs2)mRNA表达。结果三七皂苷R_(1)低、高剂量组及Fer-1组不同程度地影响ApoE^(−/−)小鼠的血脂水平(P<0.05、0.01),明显减轻主动脉粥样斑块程度,抑制铁沉积(P<0.01),提高SOD、GSH抗氧化能力(P<0.05、0.01),减少脂质过氧化MDA水平和4-HNE蛋白表达(P<0.05、0.01),上调铁死亡相关核Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白及Nrf2、Gpx4 mRNA的表达(P<0.01),下调Ptgs2 mRNA的表达(P<0.01),以三七皂苷R_(1)高剂量组效果最为显著。结论三七皂苷R_(1)改善ApoE^(−/−)小鼠脂代谢紊乱,抑制动脉粥样斑块形成,具有抗AS的作用,其机制可能与减少斑块铁沉积、激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路减少脂质过氧化,抑制铁死亡有关。

补肾通蚀丸通过调控Nrf2/SLC7A11/GPX4通路介导铁死亡对酒精性股骨头坏死大鼠成骨功能障碍的影响

目的:探讨补肾通蚀丸通过抑制成骨细胞铁死亡促进酒精性股骨头坏死(AIONFH)大鼠股骨头修复的机制。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为对照组、模型组、治疗组(补肾通蚀丸1.2 g/kg),每组12只,使用Lieber-DeCarli酒精液体饲料喂养制备AIONFH大鼠模型。Micro-CT扫描测量相关骨组织学分数;肉眼观察股骨头大体形态;HE染色观察股骨头组织病理形态学;生化试剂盒检测血清与股骨头组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、总铁离子浓度水平;RT-qPCR、Western Blot分别检测核红系转录因子2(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)mRNA和蛋白表达量。结果:与模型组比较,治疗组大鼠股骨头骨质丢失情况减轻(P<0.05),股骨头组织病理学改变减轻,血清与股骨头组织中MDA、总铁离子浓度水平显著降低(P<0.05),GSH水平显著升高(P<0.05),Nrf2、SLC7A11、GPX4、ALP、OCN、Collagen-ⅠmRNA和蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。结论:补肾通蚀丸可能通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路抑制成骨细胞铁死亡,促进AIONFH大鼠股骨头成骨修复能力。

丁酸钠对高蛋白饲料诱导雏鹅痛风及肠道尿酸转运体蛋白表达的影响

该试验旨在研究丁酸钠对高蛋白饮食雏鹅尿酸代谢、肠道尿酸转运体蛋白表达及痛风发生的影响。选取1日龄扬州鹅300只,随机分成5组,每组6个重复,每个重复10只,分别为正常饲粮对照组(NDC组,粗蛋白质16.5%)、高蛋白组(HPC组,粗蛋白质24%)、低剂量丁酸钠组(LSB组,按0.025%添加于高蛋白饲粮)、中剂量丁酸钠组(MSB组,按0.05%添加于高蛋白饲粮)和高剂量丁酸钠组(HSB组,按0.1%添加于高蛋白饲粮)。试验期18 d。结果表明:(1)HSB组雏鹅采食量从10日龄起,MSB组从14日龄起,分别显著高于HPC组(P<0.05);HSB组雏鹅体重从14日龄起高于HPC组,MSB组体重在18日龄时高于HPC组(P<0.05)。(2)14日龄时,HPC组、LSB组、MSB组及HSB组血清尿酸(UA)水平均超过阈值,表现为高尿酸血症,HPC组UA水平最高,HSB组最低;试验期间,HPC组痛风发病率(38%)高于HSB组(18.3%)。(3)与HPC组比较,HSB组回肠中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因mRNA表达升高,蛋白表达降低(P<0.05),MSB组及HSB组回肠中溶质载体家族2成员9(SLC2A9)基因mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。由此可见,丁酸钠可以改善高蛋白饲粮饮食雏鹅的血清尿酸代谢,减少痛风发生,提高生产性能,其作用机制可能与调节回肠尿酸转运体蛋白ABCG2和SLC2A9表达有关。

多基因表达与结直肠癌患者病理特征对预后的风险模型构建分析

目的分析并构建多基因表达与结肠癌患者病理特征对预后的风险模型。方法选择2019年1月—2021年1月唐山市中心医院消化内科及胃肠外科行手术治疗的结直肠癌患者299例纳入研究,根据患者预后情况分为预后良好组和预后不良组,比较2组患者临床资料及Cdc2样激酶1(CLK1)、溶质载体家族2成员3(SLC2A3)、颗粒酶B(GZMB)、趋化因子配体11(CXCL11)等基因的表达水平,采用Cox回归模型确定结直肠癌患者预后的预测因子并建立列线图风险预测模型,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估列线图预测模型的预测能力。结果预后不良组患者TNM分期Ⅳ期、低分化比例及CLK1、SLC2A3 mRNA表达水平明显高于预后良好组[χ~2(t)/P=11.583/0.009、16.103/<0.001、4.161/<0.001、4.949/<0.001],而GZMB、CXCL11 mRNA表达水平明显低于预后良好组(t/P=4.877/<0.001、5.267/<0.001);多因素COX回归分析显示,CLK1、SLC2A3 mRNA高表达是结直肠癌患者预后的独立危险因素[HR(95%CI)=7.344(3.302~16.334)、7.594(3.043~18.952)],而GZMB、CXCL11 mRNA高表达是其保护因素[HR(95%CI)=0.001(0.000~0.019)、0.005(0.001~0.043)];ROC曲线显示,CLK1、SLC2A3、GZMB、CXCL11基因及四项联合预测结直肠癌不良预后的曲线下面积(AUC)分别为0.570、0.635、0.679、0.582及0.758,联合检测明显优于各项指标单独检测(Z=4.751、4.129、4.483、5.003,均P<0.01)。结论多基因表达风险模型能够有效预测行手术治疗的结直肠癌患者预后。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并高血压患者全基因组甲基化及葡萄糖转运蛋白4基因的DNA甲基化与并发糖尿病的关系

目的收集睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)合并高血压和原发性高血压(EH)患者进行全基因组甲基化测序寻找差异甲基化位点。在高血压人群,进一步探讨OSAS合并糖尿病与葡萄糖转运蛋白4基因[溶质载体家族2A4(SLC2A4)基因]DNA甲基化的关系。方法全基因组甲基化阶段:从2010年1月至3月,连续招募年龄30~60岁、肾功能和肝功能正常的高血压患者,完善多导睡眠监测,中重度OSAS合并高血压患者作为试验组(12例),年龄、体重指数匹配的非OSAS EH患者作为对照组(12例),通过Microarray高通量基因表达检测外周血甲基化情况。单基因验证阶段:全基因组甲基化检测和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集通路发现2型糖尿病通路有四个差异基因,选取其中的SLC2A4基因,进一步扩大样本量在高血压人群收集OSAS合并糖尿病(40例)、OSAS非糖尿病(66例)、非OSAS非糖尿病(39例)三组患者,验证单基因甲基化差异位点。结果全基因组研究中,OSAS合并高血压相比较EH共鉴定出516个差异甲基化位点(低甲基化361个,高甲基化155个),所有选择的差异甲基化位点均存在显著性差异(P<0.05和∣Beta值差异∣>0.14)。通过基因本体(GO)、KEGG富集进行功能学基因富集分析。与非OSAS非糖尿病组相比,OSAS非糖尿病组中SLC2A4基因存在高甲基化位点:CpG2-11、CpG2-13、CpG2_15、CpG1_18、CpG2_21.22、CpG2_23.24和CpG22_27;OSAS合并糖尿病组高低甲基化位点并存,低甲基化位点为CpG1_2、CpG1_5、CpG2_6、CPG17、CPG110.11、CPG117、CPG118.19、CPG214、CPG218、CPG225、CPG227,高甲基化位点为CpG2-13、CpG2_15和CpG2_20。结论OSAS合并高血压较EH,存在差异甲基化位点,为后续甲基化研究提供差异甲基化基因数据库。选取2型糖尿病通路中的SLC2A4基因进行单基因验证,证实该基因甲基化差异参与OSAS糖尿病共病。

山柰酚调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对高糖诱导的滋养层细胞铁死亡的影响

目的探讨山柰酚调节核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-2 related factor,Nrf)2/溶质载体家族7成员(solute carrier family 7 member,SLC7A)11/谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)4信号通路对高糖诱导滋养层细胞铁死亡的影响。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分为对照组、模型组(25 mmol/L葡萄糖)、山柰酚组、ML385组(Nrf2抑制剂)、山柰酚+ML385组。采用细胞计数kit-8法检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验法检测细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-18以及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;生化法检测细胞中抗氧化因子超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、铁含量以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)相对水平;蛋白质印迹法检测各组HTR-8/SVneo细胞中Nrf2/SLC7A11/GPX4信号相关蛋白表达。结果山柰酚可升高细胞存活率、SOD、CAT、GSH水平和Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达,降低LDH释放量、细胞凋亡率、IL-6、IL-18、TNF-α、MDA、ROS水平及铁含量,抑制高糖诱导的滋养层细胞铁死亡;ML385可增强高糖诱导的滋养层细胞铁死亡,且ML385可减弱山柰酚对高糖诱导的滋养层细胞铁死亡的抑制作用。结论山柰酚可能通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路,抑制高糖诱导的滋养层细胞炎症与脂质过氧化,减轻铁死亡。