胆绿素还原酶A rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1 rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症易感性相关性研究

目的:分析胆绿素还原酶A(BLVRA)rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1(SLCO1B1)rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症(HB)易感性的相关性。方法:选取不明原因HB新生儿90例为HB组,另选取同期健康新生儿90例为对照组。比较两组临床资料以及BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布和等位基因频率。比较不同BLVRA rs699512、BLVRA rs699512基因型患儿血清胆红素水平。分析BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因多态性与HB易感性的关系。结果:HB组患儿总胆红素和结合胆红素水平明显高于对照组(均P<0.05)。两组BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布比较差异有统计学意义(均P<0.05)。HB组患儿BLVRA rs699512位点GG基因型分布高于对照组,AA基因型分布低于对照组,G等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。HB组患儿SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型分布高于对照组,GG基因型分布低于对照组,A等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。BLVRA rs699512中GG基因型总胆红素和结合胆红素水平高于AA基因型(均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015中AA基因型总胆红素和结合胆红素水平均高于GG基因型(均P<0.05)。BLVRA rs699512位点GG基因型与HB发生呈正相关,AA基因型与HB发生呈负相关(r=0.671、-0.608,均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型与HB发生呈正相关,GG基因型与HB发生呈负相关(r=0.695、-0.633,均P<0.05)。结论:不明原因HB新生儿BLVRA rs699512位点GG基因型与SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型会增加易感性,临床可建立早期防治体系以改善患儿预后。

溶质载体家族30成员8基因rs13266634C/T多态性与甘肃东乡族、汉族2型糖尿病的关系

目的探讨溶质载体家族30成员8(SLC30A8)基因rs13266634C/T单核苷酸多态性在甘肃东乡族、汉族人群中的分布及其与2型糖尿病(T_2DM)的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测甘肃东乡族、汉族T_2DM患者组(T_2DM组)和体检对照者组(对照组)SLC30A8基因rs13266634C/T多态性。结果 rs13266634C/T的CC基因型频率、C等位甚因的频率在东乡族和汉族T_2DM组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。东乡族C等位基因携带者患T_2DM的风险是T等位基因的1.62倍;汉族C等位基因携带者患T_2DM的风险是T等位基因的1.54倍。结论甘肃东乡族和汉族人群均存在SLC30A8基因rs13266634C/T位点变异,C等位基因是其风险等位基因,SLC30A8基因可能是甘肃东乡族和汉族人群T_2DM的易感基因。

甘肃汉族人群溶质载体家族30成员8基因多态性与2型糖尿病的相关性

目的探讨甘肃汉族人群溶质载体家族30成员8(SLC30A8)基因多态性与2型糖尿病的相关性。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析法,随机选取甘肃116例2型糖尿病患者(2型糖尿病组)及80例体检者(对照组)进行SLC30A8基因rs13266634C/T单核苷酸多态性检测,比较两组间基因型频率和等位基因频率及相关性;以稳态模型胰岛B细胞分泌功能指数评估胰岛B细胞功能,胰岛素抵抗指数评估胰岛素抵抗。结果 2型糖尿病组CC基因型频率明显高于对照组,而TT基因型频率低于对照组。2型糖尿病组CC基因型频率与TT基因型频率比较,有显著性差异(P<0.01);C风险等位基因患2型糖尿病的风险是T等位基因者的2.40倍,有显著性差异(P<0.01);CC基因型的胰岛B细胞分泌功能指数、空腹胰岛素显著低于TT基因型,差异有统计学意义P<0.05)。CC、CT、TT3种基因型的胰岛素抵抗指数,差异无统计学意义。结论甘肃汉族人群存在SLC30A8基因rs13266634多态性,rs13266634多态性与甘肃汉族2型糖尿病的发生相关;SLC30A8基因rs13266634的C等位基因可能是2型糖尿病的风险等位基因。SLC30A8基因增加2型糖尿病的易感性可能与胰岛B细胞功能下降有关,与胰岛素抵抗无明显相关性。

汉族与壮族新生儿耳聋基因SLC26A4突变对比

目的比较汉族与壮族新生儿耳聋基因溶质载体家族26成员4(SLC26A4)的突变情况。方法选取汉族新生儿2784例(汉族组)、壮族新生儿1305例(壮族组)。分娩时留取新生儿脐带血制作干血片,提取DNA行耳聋基因芯片检测SLC26A4基因突变位点,包括IVS7-2A>G、1229C>T、1174A>T、IVS15+5G>A、2168A>G、1226G>A、1975G>C、2027T>A。比较两组突变基因SLC26A4及突变位点的基因频率。结果壮族组检出SLC26A4基因突变3例,其中IVS7-2A>G杂合子2例、1229C>T杂合子1例;汉族组检出SLC26A4基因突变26例,其中IVS7-2A>G杂合子19例、1229C>T杂合子1例、2168A>G杂合子4例、1174A>T杂合子1例、IVS15+5G>A杂合子1例。均未检出纯合子、复合杂合突变及1226G>A、1975G>C、2027T>A突变。壮族组突变基因SLC26A4以及突变位点IVS7-2A>G的基因频率均低于汉族组(均P<0.05),但两组突变位点2168A>G、1229C>T、1174A>T、IVS15+5G>A的基因频率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论壮族新生儿的耳聋基因SLC26A4突变热点为IVS7-2A>G、1229C>T,而汉族新生儿突变热点为IVS7-2A>G、2168A>G,且壮族新生儿突变基因SLC26A4及突变位点IVS7-2A>G的基因频率均低于汉族新生儿。

鼻咽癌组织中GPX4和SLC7A11的表达及临床意义

目的探讨鼻咽癌(NPC)组织中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达及临床意义。方法将2016年3月至2017年3月于本院诊治的98例NPC患者纳入研究作为NPC组,同期因鼻中隔偏曲接受手术治疗的患者作为对照组。采用免疫组化检测NPC组织和正常鼻黏膜组织中GPX4、SLC7A11的表达情况。采用Spearman秩相关分析癌组织中GPX4、SLC7A11表达的相关性。比较不同NPC临床参数患者之间GPX4、SLC7A11表达阳性率。采用Kaplan-Meier法分析GPX4、SLC7A11表达对NPC患者生存预后的影响。采用单因素及多因素Cox回归分析NPC患者生存预后的影响因素。结果NPC组织中GPX4、SLC7A11表达阳性率分别为75.51%(74/98)、73.47%(72/98),分别高于正常鼻黏膜组织中的11.67%(7/60)、13.33%(8/60),差异均有统计学意义(P<0.001)。NPC组织中GPX4与SLC7A11表达呈正相关(r=0.724,P<0.001)。不同临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及放疗敏感性NPC患者癌组织中GPX4、SLC7A11表达阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。GPX4阳性及阴性表达组的5年总体生存率分别为66.22%(49/74)、91.67%(22/24);GPX4阳性表达组累积生存明显低于阴性表达组(Log-rankχ^(2)=5.822,P<0.001)。SLC7A11阳性及阴性表达组5年总体生存率分别为66.67%(48/72)、88.46%(23/26);SLC7A11阳性表达组累积生存明显低于阴性表达组(Log-rankχ^(2)=5.041,P=0.012)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=1.608,95%CI:1.225~2.112)、淋巴结转移(HR=1.917,95%CI:1.319~2.799)、GPX4阳性(HR=1.839,95%CI:1.228~2.753)、SLC7A11阳性(HR=1.738,95%CI:1.246~2.426)是影响NPC患者生存预后的独立危险因素。结论NPC中GPX4、SLC7A11表达水平升高,两者与不良临床病理特征有关,是NPC患者预后评估的潜在标志物。

茯苓酸通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究茯苓酸通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路抑制氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的心肌细胞铁死亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,诱导建立细胞OGD/R模型后以0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L茯苓酸处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各处理组细胞活力后筛选出合适的茯苓酸作用浓度。将H9c2细胞随机分为对照组、模型组、茯苓酸组、ML385组(Nrf2抑制剂组)、茯苓酸+ML385组,除对照组外其余各组建立细胞OGD/R模型后以茯苓酸、ML385分组处理,采用CCK-8法与流式细胞实验分别检测各组H9c2细胞活力、凋亡率;采用试剂盒检测各组H9c2细胞培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、促炎因子[前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、抗炎因子白细胞介素(IL)-10水平及细胞抗氧化因子[过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)]、铁死亡相关指标[铁含量、丙二醛(MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组H9c2细胞凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,茯苓酸组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05);ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与茯苓酸组比较,茯苓酸+ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。结论:茯苓酸可通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号而抑制OGD/R诱导的心肌细胞炎症、脂质过氧化与铁死亡,增强其抗氧化活性及细胞活力,最终减轻其细胞凋亡损伤。

淫羊藿苷通过上调SLC7A11/GPX4轴减轻铁死亡改善心力衰竭

目的 基于脂质过氧化研究淫羊藿苷抗异丙肾上腺素所致小鼠心力衰竭的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为空白组、异丙肾上腺素模型组(ISO,15 mg/kg)、氯沙坦阳性药组(Los, 9 mg/kg),以及淫羊藿苷低剂量组(ICA-L组,15 mg/kg)、淫羊藿苷高剂量组(ICA-H组,60 mg/kg)。采用小动物超声检测仪检测小鼠心功能(EF%、FS%)的变化,计算小鼠心脏指数。采用HE染色观察小鼠左心室组织病理变化,采用布鲁士蓝染色观察小鼠左心室组织铁离子的积累。采用Western blot检测小鼠左心室组织中铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4、4-HNE、ACSL4、LPCAT3、TFR1、DMT1的表达。结果 ICA和Los可以改善ISO引起的小鼠左心室射血分数和短轴缩短率的降低,减轻ISO所致的左心室组织病理损伤以及铁离子过度积累,抑制ISO所致左心室组织中SLC7A11、GPX4蛋白的下调,4-HNE、ACSL4、LPCAT3、TFR1、DMT1蛋白的上调(P<0.05)。结论 ICA可能通过上调SLC7A11/GPX4轴抗脂质过氧化,减轻铁死亡,改善ISO所诱导的小鼠心力衰竭。

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响

目的比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测溶质载体家族4阴离子交换体成员(Slc4a1mRNA)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法差异表达基因的筛选;荧光定量RT-PCR的检测。结果糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因Slc4a1mRNA表达下调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因Slc4a1mRNA表达上调。结论Slc4a1mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达下调,而中药复方糖心康可使其上调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。

miR-9-5p和溶质载体家族26硫酸盐转运蛋白成员2在哮喘患儿血清中的表达及与疾病严重程度的相关性

目的探讨miR-9-5p和溶质载体家族26硫酸盐转运蛋白成员2(SLC26A2)在哮喘患儿血清中的表达情况及与疾病严重程度的相关性。方法选取2019年7月—2021年6月在杭州市富阳区第一人民医院就诊并确诊为哮喘的患儿168例为研究对象,根据疾病严重程度分为重度组(52例)、中度组(56例)及轻度组(60例),另选取同期在该院体检且与患儿一般资料匹配的健康儿童50例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组血清中miR-9-5p、SLC26A2 mRNA表达水平;检测各组血清炎症细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及C-反应蛋白(CPR)]水平;采用肺功能检测仪检测所有研究对象的肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)];采用Pearson法分析miR-9-5p与SLC26A2表达水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-9-5p、SLC26A2水平预测重度哮喘患儿的价值。结果哮喘患儿血清中miR-9-5p、SLC26A2表达水平均低于对照组,且miR-9-5p、SLC26A2表达水平随着哮喘严重程度的增加而不断降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与健康儿童相比,哮喘患儿血清中TNF-α、CRP、IL-6表达均上升,FEV1、FEV1/FVC水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。哮喘患儿血清中miR-9-5p、SLC26A2水平与TNF-α、CRP及IL-6均呈负相关关系(r_(miR-9-5p)=-0.506、-0.657、-0.411,rSLC26A2=-0.301、-0.399、-0.279,均P<0.05),与FEV1、FEV1/FVC均呈正相关关系(r_(miR-9-5p)=0.376、0.46,rSLC26A2=0.262、0.254,均P<0.05)。miR-9-5p与SLC26A2表达呈正相关关系(r=0.477,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清miR-9-5p、SLC26A2水平预测重度哮喘患儿的曲线下面积(AUC)分别为0.934(95%CI:0.885~0.967)、0.884(95%CI:0.826~0.928),对应的灵敏度分别为98.15%、77.78%,特异度分别为82.46%、83.33%,血清miR-9-5p、SLC26A2水平联合预测重度哮喘患儿的AUC为0.974(95%CI:0.936~0.992),灵敏度为98.14%,特异度为85.96%。结论miR-9-5p和SLC26A2在哮喘患儿血清中低表达,二者呈正相关关系,且联合检测对评估重度哮喘患儿的临床价值高于单一指标,具有一定价值,可作为临床诊断重度哮喘患儿的潜在标志物。

利心冲剂对心力衰竭大鼠铁代谢SLC7A11/GXP4信号通路的调控作用

目的 基于心肌铁代谢探讨利心冲剂对心力衰竭大鼠的心肌保护作用。方法 取32只SD大鼠,随机选择8只SD大鼠作为正常组,其余大鼠采用腹主动脉缩窄法制备心力衰竭模型。将造模成功后大鼠随机分为模型组、利心冲剂高剂量组及利心冲剂低剂量组,每组8只。利心冲剂高、低剂量组分别予以利心冲剂20.79 g/(kg·d)和5.20 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,均1次/d。连续灌胃8周后,比色法检测血清铁水平,ELISA法测定血清铁蛋白水平,HE染色观察心肌组织病理形态,ELISA法测定心肌组织中活性氧(ROS)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法和RT-PCR法分别检测心肌组织中转铁蛋白受体(TfR1)、膜铁转运蛋白(FPN1)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白及mRNA表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清铁和铁蛋白水平、心肌组织中SOD活性和FPN1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),心肌组织中ROS水平和TfR1蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),心肌细胞肥大,组织间可见部分炎性细胞浸润;与模型组比较,利心冲剂高剂量组血清铁和铁蛋白水平及利心冲剂高、低剂量组心肌组织中SOD活性和FPN1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),心肌组织中ROS水平和TfR1蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),心肌损伤明显减轻。结论 利心冲剂可通过调节铁代谢SALC7A11/GXP4信号通路抑制铁死亡,减轻心肌氧化应激,缓解心力衰竭大鼠心肌损伤。

鸦胆子苦醇调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对皮肤鳞癌细胞铁死亡的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对皮肤鳞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)细胞铁死亡的影响。方法:CCK-8法检测0、100、250、500、700、900 nmol/L鸦胆子苦醇处理后人cSCC细胞系A431细胞增殖率,筛选出合适的鸦胆子苦醇作用浓度。体外培养的A431细胞随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ;Nrf2激活剂)组、鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组,以鸦胆子苦醇和TBHQ分组处理后,采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法检测各组A431细胞增殖与凋亡;采用试剂盒检测各组A431细胞抗氧化因子[谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)]水平及铁死亡指标[铁含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组A431细胞增殖、凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,鸦胆子苦醇低、高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达均升高(P<0.05);鸦胆子苦醇高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达相比鸦胆子苦醇低剂量组进一步降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达进一步升高(P<0.05);TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与鸦胆子苦醇高剂量组相比,鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇通过下调Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路而促进铁死亡,诱导cSCC细胞凋亡,并抑制其增殖。

电针对脑卒中肢体痉挛大鼠大脑皮质SLC7A11和GPX4表达的影响

目的:观察电针对脑卒中肢体痉挛(PSS)大鼠大脑皮质溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的影响,探讨电针治疗PSS中铁死亡的机制。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组及电针组。采用改良Zea-Longa线栓+内囊注射NMDA法制作PSS大鼠模型。电针组针刺患侧“阳陵泉”、“曲池”穴,1次/d, 30 min/次,连续7 d;假手术组及模型组同期仅固定不干预。采用Zea-Longa神经功能评分检测大鼠神经功能,电生理描记法检测大鼠股四头肌肌张力,Western Blot检测大脑皮质SLC7A11和GPX4蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大脑皮质GSH含量,real time RT-PCR检测大脑皮质SLC7A11和GPX4 mRNA表达。结果:造模后的大鼠神经功能评分升高,股四头肌肌张力增高,大脑皮质中GSH含量降低,SLC7A11和GPX4蛋白表达及SLC7A11和GPX4 mRNA表达显著下调。电针治疗使得大鼠神经功能评分降低,股四头肌肌张力降低,增加了大鼠皮质中GSH含量,显著上调了SLC7A11和GPX4蛋白表达及SLC7A11和GPX4 mRNA表达。结论:电针“阳陵泉”、“曲池”可改善PSS大鼠肢体痉挛状态,促进神经功能恢复,其作用机制可能与电针调控SLC7A11和GPX4表达抑制大脑皮质细胞铁死亡有关。

新候选肿瘤抑制基因溶质载体8号家族中的2号成员基因对胶质瘤细胞株U87的侵袭迁移能力和裸鼠致瘤性的影响

目的 探讨溶质载体8号家族中的2号成员基因（SLC8A2）对胶质瘤细胞U87的迁移侵袭能力和裸鼠移植瘤生长的影响及其机制.方法 构建稳定表达SLC8A2基因的U87-SLC8A2细胞株（实验组）和稳定表达GFP的U87-NC细胞株（阴性对照组）.Transwell小室及预铺50μl Matrigel基质胶的Transwell小室检测SLC8A2对U87细胞侵袭和迁移能力的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染该基因后肿瘤细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9及MT1-MMP转录水平的变化,明胶酶谱法检测分泌至细胞培养基中MMP-2酶活性的变化；裸鼠皮下移植瘤实验（5只/组）检测SLC8A2对U87细胞致瘤性的影响.结果 U87-NC和U87-SLC8A2穿过Transwell小室基膜的细胞数分别为（279.70±17.50）个及（4.30±0.58）个,而穿过预铺Matrigel基质胶的Transwell小室基膜的细胞数分别为（274.0±21.3）个和（12.7±1.2）个,差异有统计学意义（P＜0.01）；与U87-NC比较,U87-SLC8A2细胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MTl-MMP的转录水平分别下降了（55.4±3.2）％、（78.7±5.3）％、（79.7±4.6）％、（53.9±3.2）％及（70.9±4.4）％（P＜0.01）,且U87-SLC8A2细胞分泌的MMP-2酶活性较U87-NC下降了（93.2±5.1）％（P＜0.01）；接种U87-SLC8A2细胞的裸鼠全都不致瘤,而接种对照组细胞的裸鼠全部致瘤成功.结论 SLC8A2可下调MMP的活性而抑制胶质瘤细胞U87的侵袭迁移能力,并能显著抑制U87细胞在裸鼠体内的生长及增殖.

溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1 HaeⅢ基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1 HaeⅢ(SLC2A1 HaeⅢ,g20882C>T)基因多态性与DN的关系。方法将380例T2DM患者分为DN组与T2DM组,采用PCRRLFP检测SLC2A1 HaeⅢ(g20882C>T)基因分型,探讨不同基因型患者与DN发病及相关指标的关系。结果 T2DM组与DN组CC、TT基因型比较,差异有统计学意义(P<0.05),C、T等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。TT基因型患者胱抑素C(Cys-C)、Hcy、UAER低于CT、CC基因型患者(P<0.05),而eGFR高于CC、CT型患者(P<0.05)。CT基因型患者Cys-C、Hcy低于CC型患者(U=5.67、4.22,P<0.05),而eGFR高于CC型患者(U=4.31,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,CC基因型(OR=2.105,95%CI:1.928~8.117,P<0.05)及C等位基因频率(OR=1.832,95%CI:1.003~5.462,P<0.05)为DN的危险因素。结论 SLC2A1 HaeⅢ(g20882C>T)为DN易感基因,导致Hcy、Cys-C过表达,引起DN的发生发展。

溶质载体家族7成员11基因SLC7A11与肝癌临床特征相关性

目的明确溶质载体家族7成员11基因(SLC7A11)在肝癌及癌旁组织中的表达水平,了解SLC7A11基因与肝癌患者临床特征的关系。方法收集102例肝癌患者肝癌组织及其癌旁组织,通过半定量PCR、Real-time PCR测定SLC7A11基因在组织中的表达水平,分析该基因与肝癌患者年龄、性别、肿瘤大小、HBV感染、淋巴结转移、生存期及组织学分级的关系。结果随机挑选20对肝癌和癌旁组织进行半定量PCR,SLC7A11基因在85.0%(17/20)的肝癌组织较癌旁组织中mRNA的表达水平明显上调。Real-time PCR检测102例肝癌和癌旁组织中SLC7A11 mRNA表达水平,72.5%(74/102)肝癌组织中SLC7A11基因表达水平明显上调(P<0.01)。在64例肝癌患者中SLC7A11 mRNA高表达组的平均生存期为16个月,低表达组的平均生存期为22个月,SLC7A11 mRNA高表达组生存期较短(P<0.01)。SLC7A11基因表达水平与肿瘤大小成正相关,肿瘤大于3 cm的肝癌患者SLC7A11基因的表达水平明显上调(P<0.05)。SLC7A11基因表达水平与患者的年龄、性别、HBV感染、淋巴结转移与否及组织学分级无关(P>0.05)。结论 SLC7A11基因在肝癌组织中表达上调,影响着肿瘤的增生及患者的生存期,提示SLC7A11基因在肝细胞癌发生发展中起着重要的作用。

溶质载体家族15成员4在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及其临床意义

目的探讨肽/组氨酸转运蛋白溶质载体家族15成员4(SLC15A)在SLE患者的PBMCs中的表达及其临床意义。方法选取55例SLE患者,根据SLEDAI评分标准,分为活动期SLE组和稳定期SLE组,以13例健康志愿者作为健康对照组,采用蛋白质印迹法检测各组外周血PBMCs中SLC15A4的表达情况,并记录SLE患者的临床资料及实验室指标。3组间SLC15A4的表达量的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),SLC15A4表达水平与临床指标的相关性分析采用Pearson相关分析。结果活动期SLE组、稳定期SLE组、健康对照组中SLC15A4的表达水平分别为(0.96±0.19)、(0.88±0.14)、(0.78±0.24),活动期SLE组中SLC15A4的表达水平高于健康对照组(F=4.47,P=0.015);SLE患者PBMCs中SLC15A4表达水平与抗dsDNA抗体定量(r=0.29,P=0.031)、ESR(r=0.36,P=0.007)、SLEDAI评分(r=0.32,P=0.017)呈正相关,与尿蛋白定量(24 h)(r=0.45,P=0.127)和C3(r=0.20,P=0.133)无相关性。结论SLC15A4参与了SLE的发病,其在SLE患者PBMCs中的表达情况可作为临床评估SLE患者疾病活动程度的指标。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并高血压患者全基因组甲基化及葡萄糖转运蛋白4基因的DNA甲基化与并发糖尿病的关系

目的收集睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)合并高血压和原发性高血压(EH)患者进行全基因组甲基化测序寻找差异甲基化位点。在高血压人群,进一步探讨OSAS合并糖尿病与葡萄糖转运蛋白4基因[溶质载体家族2A4(SLC2A4)基因]DNA甲基化的关系。方法全基因组甲基化阶段:从2010年1月至3月,连续招募年龄30~60岁、肾功能和肝功能正常的高血压患者,完善多导睡眠监测,中重度OSAS合并高血压患者作为试验组(12例),年龄、体重指数匹配的非OSAS EH患者作为对照组(12例),通过Microarray高通量基因表达检测外周血甲基化情况。单基因验证阶段:全基因组甲基化检测和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集通路发现2型糖尿病通路有四个差异基因,选取其中的SLC2A4基因,进一步扩大样本量在高血压人群收集OSAS合并糖尿病(40例)、OSAS非糖尿病(66例)、非OSAS非糖尿病(39例)三组患者,验证单基因甲基化差异位点。结果全基因组研究中,OSAS合并高血压相比较EH共鉴定出516个差异甲基化位点(低甲基化361个,高甲基化155个),所有选择的差异甲基化位点均存在显著性差异(P<0.05和∣Beta值差异∣>0.14)。通过基因本体(GO)、KEGG富集进行功能学基因富集分析。与非OSAS非糖尿病组相比,OSAS非糖尿病组中SLC2A4基因存在高甲基化位点:CpG2-11、CpG2-13、CpG2_15、CpG1_18、CpG2_21.22、CpG2_23.24和CpG22_27;OSAS合并糖尿病组高低甲基化位点并存,低甲基化位点为CpG1_2、CpG1_5、CpG2_6、CPG17、CPG110.11、CPG117、CPG118.19、CPG214、CPG218、CPG225、CPG227,高甲基化位点为CpG2-13、CpG2_15和CpG2_20。结论OSAS合并高血压较EH,存在差异甲基化位点,为后续甲基化研究提供差异甲基化基因数据库。选取2型糖尿病通路中的SLC2A4基因进行单基因验证,证实该基因甲基化差异参与OSAS糖尿病共病。

新肿瘤抑制基因溶质载体家族5成员8在结直肠癌组织中的表达及甲基化研究

溶质载体家族5成员8（SLC5A8）是一种新的候选肿瘤抑制基因,2002年由Rodriguez等发现,并且从人肾cDNA文库中克隆鉴定的编码610个氨基酸,认为是溶质载体家族5（SLC5）的第8个成员,被命名为SLC5A8,该基因位于人类染色体的12q13-23,编码蛋白属于钠离子/葡萄糖共转运蛋白家族成员[1].本研究旨在探讨SLC5A8基因在结直肠癌患者肿瘤组织中的表达及甲基化水平.

外周血白细胞SLC45A4和AHSP基因甲基化与乳腺癌关系的病例对照研究

目的探究外周血白细胞溶质载体家族45成员4(solute carrier family 45 member 4,SLC45A4)和α血红蛋白稳定蛋白(αhemoglobin stabilizing protein,AHSP)基因甲基化与乳腺癌发病的关系。方法通过差异甲基化分析等方法在GSE51032、GSE104942和GSE89093数据集中筛选与乳腺癌发病潜在相关的基因。采用病例对照研究,纳入545例乳腺癌患者和524例非乳腺癌对照作为研究对象。使用MethylTarget靶向测序检测目标基因甲基化并分析其与乳腺癌的关系。结果本研究共筛选出4个基因,控制混杂因素后,SLC45A4和AHSP高甲基化与乳腺癌关系的ORadj分别为0.218(95%CI:0.158~0.299)和0.535(95%CI:0.384~0.741)。在不同亚组中SLC45A4高甲基化与乳腺癌的关联仍有统计学意义,ORadj最高为0.427(95%CI:0.270~0.679),最低为0.153(95%CI:0.085~0.274),而AHSP高甲基化仅在管腔A型(Luminal A)、管腔B型(Luminal B)、雌激素受体阳性(estrogen receptor+,ER+)和≤60岁年龄组中与乳腺癌的关联有统计学意义。异质核糖核酸蛋白C(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins C,HNRNPC)甲基化与乳腺癌的关系与公共数据结果相反,ORadj为0.747(95%CI:0.569~0.980),锌指蛋白425(zinc finger protein 425,ZNF425)甲基化与乳腺癌的关联无统计学意义(P=0.158)。结论外周血白细胞SLC45A4和AHSP基因高甲基化可能是乳腺癌发病的保护因素。

硒对环磷酰胺致生精功能损伤小鼠精子发生的改善作用及机制

目的:基于溶质载体家族7成员11-谷胱甘肽过氧化酶4(SLC7A11-GPx4)信号通路探讨硒对环磷酰胺(CTX)致生精功能损伤(SI)模型小鼠精子发生的改善作用及机制。方法:将36只KM小鼠随机分为6组,每组6只,分别为SI模型对照组、缺硒模型(-Se SI)组、加硒模型(+Se SI)组,所有模型组均腹腔注射100 mg/kg CTX,正常对照组、-Se对照组、+Se对照组,对照组均注射生理盐水,注射周期为每周1次,连续6周。采用HE染色法观察各组小鼠睾丸组织形态学及病理学变化,并对附睾中精子进行计数,Western印迹试验检测GPx4和SLC7A11蛋白表达,RT-qPCR检测铁死亡相关基因变化。将GC2-spd细胞随机分为正常对照组,Ferrostatin(Fer-1)组,Erastin组,-Se组,亚硒酸钠(SeS)0.5、5.0μmol/L组,硒代蛋氨酸(SeM)5.0、50μmol/L组,SeS+Erastin组,SeS+Fer-1组,SeM+Erastin组,SeM+Fer-1组,观察GC2-spd细胞铁死亡相关蛋白和基因水平的变化。结果:CTX诱导的SI模型组小鼠睾丸和前列腺脏器指数明显低于正常对照组,生精细胞内层次减少,空洞增加,血清铁蛋白浓度下降(P<0.05),转铁蛋白浓度上升(P<0.05);+Se SI模型组、+Se对照组分别较-Se SI模型组、-Se对照组的脏器系数升高(P<0.05,P<0.01),且+Se组睾丸组织病理变化明显改善。SI模型对照组较正常对照组小鼠睾丸GPx4和SLC7A11基因表达量降低(P<0.01),而+Se SI模型组、+Se对照组分别较-Se SI模型组、-Se对照组小鼠睾丸GPx4和SLC7A11基因显著上升(P<0.01,P<0.05),但两种蛋白表达量却无明显差异。体外GC2-spd细胞实验结果显示,-Se组较正常对照组GPx4基因和GPx4蛋白水平均显著降低(P<0.05),SLC7A11基因水平下降(P<0.01);不同剂量的SeS和SeM均显著提高-Se组GPx4蛋白表达,低剂量SeM促进GPx4基因水平显著上升,高剂量SeS使SLC7A11基因和SLC7A11蛋白表达量增加(P<0.05,P<0.01)。-Se组较正常对照组,acsl4和ptgs2基因水平明显下降,SeM促进acsl4表达,SeS促进ptgs2和fth1的表达(P<0.01,P<0.05)。GC2-spd干预结果显示Erastin组较正常对照组ptgs2降低,SeS+Erastin、SeM+Erastin组较Erastin组ptgs2基因表达均增加,但Fer-1较正常对照组ptgs2表达降低,SeS+Fer-1、SeM+Fer-1组较Fer-1组ptgs2基因水平降低(P<0.05);SeM+Erastin、SeM+Fer-1组分别较Erastin、Fer-1组均GPx4的基因量增加(P<0.01,P<0.05);SeM+Erastin、SeS+Erastin较Erastin组和SeM+Fer-1、SeS+Fer-1组较Fer-1组SLC7A11均降低,且伴随着acsl4和fth1的升高(P<0.01)。结论:硒缺乏导致小鼠睾丸和精母细胞SLC7A11和GPx4基因水平降低,铁死亡相关基因表达异常,GPx4蛋白表达下降。硒促进GPx4基因和GPx4蛋白表达,提高SLC7A11基因表达量,改善生精功能损伤小鼠睾丸的精子发生,且有机硒SeM和无机硒SeS对铁死亡通路相关基因的调控存在差异。