胃癌中LAMP5表达及预后意义分析

目的:探究溶酶体相关膜蛋白5(LAMP5)在胃癌中的表达及预后意义。方法:选择胃癌组织130例及其邻近正常胃组织标本40例,采用组织芯片免疫组化检测LAMP5蛋白表达,分析LAMP5表达与患者临床病理特征及预后的关系。通过TCGA数据库验证胃癌与正常胃组织中LAMP5表达差异,LAMP5表达与患者临床病理特征及总体生存期(overall survival,OS)的关系。采用基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)研究LAMP5可能的作用机制。结果:组织芯片免疫组化表明,与正常胃组织相比,胃癌组织LAMP5表达增高,LAMP5表达与胃癌分期(P=0.045)、肿瘤大小(P=0.006)相关。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,LAMP5表达与胃癌患者OS呈负相关(P=0.035)。TCGA数据分析显示,与正常胃组织相比,胃癌组织中LAMP5表达增高(P=0.016);Kruskal检验表明LAMP5表达与肿瘤分级G3/G1(P=0.024)及G3/G2(P<0.001),分期SⅡ/Ⅰ(P<0.001)、SⅢ/Ⅰ(P<0.001)及SⅣ/Ⅰ(P<0.001),肿瘤大小T2/T1(P=0.002)、T3/T1(P<0.001)、T4/T1(P<0.001)、T3/T2(P=0.026)及T4/T2(P=0.005)相关。Kaplan-Meier生存曲线分析显示LAMP5表达越高,胃癌患者OS越短(P=0.007)。单因素COX回归分析表明,年龄(P=0.006)、分期(P<0.001)、肿瘤大小(P=0.032)、淋巴结转移(P=0.006)、远处转移(P=0.024)和LAMP5表达(P=0.004)可作为胃癌患者的预后指标;多因素COX回归分析表明,年龄(P<0.001)、性别(P=0.047)和LAMP5表达(P<0.001)可作为胃癌患者预后的独立指标。Gene Ontology(GO)富集分析显示,LAMP5可能参与促进胶原结合、细胞外基质结构成分、糖胺聚糖结合、生长因子结合、整合素结合等通路,抑制呼吸作用、线粒体呼吸链复合物组件、呼吸电子传输链、NADH脱氢酶复合物组件、核糖体结构成分等通路。Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)富集分析表明,LAMP5可能促进ECM受体相互作用、焦点粘附、TGF-β信号通路、Hedgehog信号通路、癌症途径等通路,抑制阿尔茨海默病、氧化磷酸化、亨廷顿病、帕金森病、核糖体等通路。结论:LAMP5在胃癌组织中高表达,LAMP5表达越高,患者总体生存期越差,LAMP5可作为胃癌患者预后的独立影响因素。

Laptm5 3'UTR对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过建立稳定过表达溶酶体相关穿膜蛋白5(lysosomal associated protein transmembrane 5,Laptm5)3'不翻译区(3'UTR)的B细胞淋巴瘤38B9细胞株,探讨Laptm5 3'UTR对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞株增殖、凋亡的影响。方法:荧光定量PCR及Western blotting检测小鼠B细胞及38B9细胞中Laptm5 miRNA及其蛋白质的表达水平;将小鼠Laptm5 3'UTR及其含有的microRNA结合位点突变的突变型基因片段构建入逆转录病毒表达载体p MSCV-PIG,包装成逆转录病毒,感染小鼠B细胞淋巴瘤细胞38B9,流式细胞术检测逆转录病毒感染率,细胞计数法及流式细胞术观察Laptm5 3'UTR或其突变型过表达后389B9细胞的增殖、凋亡情况。结果:相比小鼠B细胞,B细胞淋巴瘤细胞中Laptm5的miRNA及蛋白均显著降低(P<0.01)。成功获得稳定过表达Laptm5 3'UTR(突变型)的38B9细胞株。Laptm5 3'UTR细胞株比Laptm5 3'UTR突变型过表达细胞株的增殖能力显著减慢,凋亡率显著增加[(7.87±1.08)%vs(0.45±0.07)%,P<0.01]。结论:小鼠Laptm53'UTR具有抑制B细胞淋巴瘤增殖、促进其凋亡的作用,该作用可能与其影响相关microRNA的调控有关。