溶酶体膜蛋白-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成的实验研究

目的研究溶酶体膜蛋白-2抗体(LAMP-2-antibody)诱导中性粒细胞胞外捕网形成(NETosis)的作用,为进一步探讨这种新型细胞死亡模式在系统性小血管炎中的作用及机制奠定基础。方法采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,抗LAMP-2抗体刺激中性粒细胞,以及通过NADPH氧化酶抑制剂二甲苯基碘(DPI)阻断活性氧簇的产生,电镜、免疫荧光观测胞外捕网的形成,激光共聚焦检测自身抗原LAMP-2、PR3、MPO的表达。结果 LAMP-2抗体促进中性粒细胞胞外捕网NETs形成,自身抗原MPO、PR3及LAMP-2包含在NETs内,抑制NADPH氧化酶的活性可以阻断NETs形成。结论 LAMP-2抗体可能通过诱导中性粒细胞异常死亡,释放内源性危险信号,激活自身免疫反应等来维持血管炎的恶性持续状态。

原发性胆汁性肝硬化肝脏病理分期与溶酶体膜蛋白-2表达及血清学指标关系

目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者肝脏病理分期与溶酶体膜蛋白-2(lysosomal granule membrane protein,LAMP2)表达及血清学指标三者间的关系.方法:收集2003-06/2012-12于我院确诊为PBC的45例患者肝穿肝脏病理分期及其同期生化、血凝、免疫球蛋白及自身免疫性抗体滴度,免疫组织化学方法观察LAMP2在PBC患者肝组织的表达,分析三者间的相关性.结果:随着PBC患者肝脏组织病变程度的加重,LAMP2在肝组织的表达呈增加趋势(χ2=20.534,P=0.002),二者相关系数(r)为0.555(P<0.05);血清谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、直接胆红素、白蛋白与肝脏病理分期相关系数r分别为0.318、0.305、0.410和-0.295(P值分别为0.033,0.041,0.005和0.049),与LAMP2相关系数r分别为0.578、0.522、0.479和-0.335(P值分别为0.000,0.000,0.001和0.024);其中直接胆红素在不同病理分期中位值差异具有统计学意义[3.9(2.3-69.4)vs22.8(1.8-191.5)vs 18.4(4.1-275.3),P=0.013];谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、直接胆红素、白蛋白在不同LAMP2表达强度下中位值差异均具有统计学意义[137.0(21.0-233.0)vs 233.5(5.0-657.0)vs 411.0(180.0-1351.0),P=0.001]、[130.0(42.0-196.0)vs 205.5(74.0-801.0)vs 320.0(89.0-2114.0),P=0.001]、[4.1(1.8-12.6)vs 14.3(2.3-186.0)vs 33.2(3.4-275.3),P=0.006]、[41.3(37.3-45.6)vs 36.6(28.5-47.3)vs36.9(27.0-48.2),P=0.021].凝血酶原时间、纤维蛋白原、免疫球蛋白IgG、免疫球蛋白IgM、抗核抗体滴度、抗线粒体抗体滴度、抗线粒体抗体M2亚型滴度与肝脏病理分期及LAMP2蛋白间均无显著相关性.结论:LAMP2在肝组织异常表达可能与PBC发病机制有关;血清生化指标在一定程度上有助于PBC肝组织病变程度的判断.

血小板溶酶体膜蛋白 血小板颗粒膜蛋白对进展性脑梗死早期诊断的作用

本研究旨在通过流式细胞仪对血小板溶酶体膜蛋白（CD62P）、血小板颗粒膜蛋白（CD63）的测定为临床提供一个进展性脑梗死的早期诊断的客观参考值。1资料和方法1.1临床资料：选择2006年3月至12月本院神经内科30-80岁脑梗死患者103例。

溶酶体膜蛋白Sidt2对血糖代谢的影响

目的:通过模式动物研究溶酶体膜蛋白Sidt2与糖代谢的关系。方法:利用Lox P-Flox-Lox P系统,通过基因重组及打靶技术获得Sidt2剔除小鼠模型。检测成年小鼠的空腹血糖及葡萄糖耐量,评估Sidt2基因剔除对小鼠糖代谢的影响。同时通过HE染色观察Sidt2-/-小鼠胰岛形态结构改变。结果:通过对Sidt2剔除模型小鼠的Sidt2 mRNA及蛋白水平鉴定,确定Sidt2基因剔除小鼠模型成功构建。对小鼠末梢血糖检测发现,Sidt2-/-成年小鼠表现出空腹血糖增高及糖耐量受损的糖尿病表现。对Sidt2-/-小鼠胰岛形态检测发现,其胰岛出现结构紊乱,胰岛空泡变性及部分细胞出现肥大等病理改变。结论:溶酶体膜蛋白Sidt2与糖代谢密切相关。

儿童严重脓毒症溶酶体膜蛋白分子变化及意义

目的探讨儿童严重脓毒症溶酶体膜蛋白分子水平的变化及其临床意义。方法选取河北省儿童医院自2015年3月至2016年3月收治的小儿脓毒症患儿90例,按照病情严重程度分为一般脓毒症组和严重脓毒症组,每组各45例,另选择健康体检儿童40例作为对照组。采用流式细胞术对小儿外周血溶酶体膜蛋白分子水平进行检测,采用全自动血球分析仪对血小板(PLT)的参数进行测量,并对结果进行分析。结果一般脓毒症组、严重脓毒症组与对照组比较外周血CD63水平和PLT水平差异均具有统计学意义(F值分别为7.021、5.362,均P<0.05)。严重脓毒症组患儿入院后第7天、入院后第1天、入院治疗前相比CD63较低,PLT较高,差异均具有统计学意义(F值分别为7.783、5.214,均P<0.05)。结论溶酶体膜蛋白分子在儿童严重脓毒症中具有较高的水平,促进了PLT参数水平的降低,可能加重了脓毒症的病情。

急性髓系白血病细胞中溶酶体膜蛋白LAMP1、TPC1、TPC2的表达及其临床意义

目的:研究溶酶体膜蛋白LAMP1、TPC1、TPC2在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞中的表达变化与其临床指征之间的关系,初步探讨3种膜蛋白在AML发生发展中的可能作用及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测AML细胞系(HL-60、NB4)、57例AML(其中初治患者44例,难治复发患者13例)LAMP1、TPC1、TPC2的mRNA的表达水平,并分析其与临床指标相关性和患者化疗后缓解情况的关系。结果:与CD34^+造血干细胞(HSC)相比,AML细胞系HL-60、NB4中LAMP1、TPC1的表达水平明显升高,而TPC2的表达水平未见明显差别。AML患者骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cell,BMMNC)中LAMP1、TPC1、TPC2的表达水平高于正常人BMMNC(P<0.05),CD34^+原代AML细胞(患者骨髓内CD34^+原始细胞>90%)中LAMP1、TPC1、TPC2的表达水平也高于CD34^+HSC;AML初治患者以及复发难治患者间LAMP1、TPC1、TPC2表达无明显差异(P>0.05)。未发现患者年龄、性别以及基因型与各膜蛋白表达水平的相关性(P>0.05)。LAMP1、TPC1的表达水平与患者外周血白细胞数呈正相关(P<0.01)。分析发现,LAMP1和TPC2与初治病人1个疗程化疗后的缓解情况存在相关性;骨髓内高表达LAMP1的初治患者1个疗程化疗后不易缓解,骨髓内高表达TPC2的患者1个疗程化疗后更易缓解。结论:3种膜蛋白的mRNA在AML患者细胞中高表达,其中LAMP1、TPC1是AML疾病进展的危险因素,TPC2的高表达则有利于初治AML患者的化疗。

溶酶体相关膜蛋白3通过VEGF/AKT通路抑制PC-3细胞增殖、转移及血管生成

目的探索LAMP3对PC-3细胞增殖、迁移及血管生成的影响。方法Western blot(WB)及RT-PCR检测LAMP3在正常前列腺上皮细胞及前列腺癌骨转移细胞中的表达。构建稳定沉默LAMP3的PC-3细胞,分别使用CCK8、划痕试验、Transwell试验检测LAMP3对PC-3细胞增殖、迁移与侵袭的影响。通过ELISA及血管生成试验检测血管内皮生长因子VEGF、基质金属酶MMP9的表达及HUVEC细胞的血管生成,最后使用WB及RT-PCR检测VEGF、AKT/p-AKT的表达。结果LAMP3在前列腺癌细胞中的表达较正常前列腺上皮细胞明显升高,以PC-3细胞最明显(P<0.05)。沉默LAMP3能抑制PC-3细胞的增殖、迁移与侵袭能力,同时能抑制VEGF、MMP9的表达及PC-3细胞诱导的血管生成,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,LAMP3能下调PC-3细胞中VEGF、AKT/p-AKT的表达。结论LAMP3能通过调控VEGF/AKT通路影响PC-3细胞的增殖、转移和血管生成,LAMP3可能是前列腺癌骨转移的潜在治疗靶点之一。

葛根素对不稳定型心绞痛患者血小板颗粒膜蛋白、溶酶体膜蛋白及血浆纤溶酶原激活物抑制物和C-反应蛋白的影响

观察葛根素对不稳定型心绞痛患者血小板颗粒膜蛋白(CD63)、溶酶体膜蛋白(CD62P)、血浆纤溶酶原激活物抑制物(plasma plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和C-反应蛋白(C-Reactive Protein,CRP)的影响。方法:将60例不稳定型心绞痛患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,治疗组采用葛根素治疗,对照组采用力抗栓治疗,经过4周连续治疗后,统计两组患者血小板CD63、CD62P、血浆PAI-1、C-RP的水平,并行统计学分析。结果:连续治疗4周后,两组患者观察指标均有显著改善,但治疗组患者各指标的改善幅度明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在不稳定型心绞痛发生及发展过程中,血小板的活化、纤溶的机制异常的炎症反应物起着十分重要作用,而在抗血小板活化、改善纤溶活性及减轻炎症反应方面,葛根素具有十分突出的作用。本次实验证实:草根素治疗不稳定型心绞痛疗效显著。

溶酶体相关膜蛋白2AshRNA对乳腺癌细胞株紫杉醇耐药的影响

目的制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构建pGLV-EGFP-shRNA慢病毒表达质粒,并测序鉴定。将构建的表达质粒和包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株后,Western blot法检测LAMP2A表达,验证蛋白表达抑制效果。采用1 nmol/L、10 nmol/L、100nmol/L的紫杉醇处理LAMP2A低表达乳腺癌细胞株后,用MTT法观察LAMP2A低表达组和对照组之间增殖效率的差异。结果测序结果显示重组慢病毒质粒构建正确,病毒滴度达2×108TU/mL。乳腺癌稳定细胞株中LAMP2A蛋白表达量显著降低。在10 nmol/L、100 nmol/L紫杉醇处理后,LAMP2A低表达乳腺癌细胞株对紫杉醇耐药性明显降低(P<0.05)。结论成功构建了人的LAMP2A基因shRNA慢病毒载体,获得了稳定低表达LAMP2A的乳腺癌细胞株,证实LAMP2A下调能够降低乳腺癌细胞株对紫杉醇的耐药性。

食管癌组织中溶酶体相关膜蛋白2a的表达及其临床意义

目的探讨溶酶体相关膜蛋白2a(LAMP2a)在食管癌组织中的表达及其临床意义.方法采用免疫组织化学方法检测58例患者的食管癌组织标本和30例正常食管组织中LAMP2a的表达水平,分析其与临床病理特征的相关性.结果LAMP2a在食管癌组织中呈显著高表达,与肿瘤临床分期(P<0.001)、T分期(P=0.043)及分化程度(P=0.018)密切相关,与性别(P=0.740)、年龄(P=0.590)和淋巴结转移(P=0.188)无显著相关性;LAMP2a表达水平与患者的预后呈负相关(P<0.05);Cox比例风险模型显示,肿瘤浸润深度和LAMP2a蛋白表达是食管癌患者独立影响因素(P<0.05).结论LAMP2a的表达可成为肿瘤早期诊断及预后状况评估的有效指标.

抗溶酶体相关膜蛋白2抗体在抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎肾损害中的研究进展

抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关血管炎(AAV)是继发性肾损害的重要病因之一,发病率及致死率均较高,且病情易反复,治疗困难,其发病机制目前并不清楚。深入研究AAV致病原因及发病机制是提高疗效的重要方法,而抗溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)抗体作为新发现的ANCA抗体,与AAV的关系成为目前研究的焦点之一。虽然目前研究结果并不一致,但随着细菌感染、Ⅰ型菌毛蛋白H(FimH)与LAMP-2分子模拟、动物实验及人体实验观察的深入,抗LAMP-2抗体将可能进一步揭示AAV肾损害发病机制,并可能成为AAV诊断、监测病情活动的新的标志物,为免疫抑制剂个体化治疗提供依据。本文就抗LAMP-2抗体与AAV肾损害的研究进展做一综述。

胃癌组织中溶酶体相关四次跨膜蛋白B、三叶因子家族1表达与胃癌的关系

目的探讨胃癌组织中溶酶体相关四次跨膜蛋白B(LAPTM4B)、三叶因子家族1(TFF1)蛋白表达与胃癌的关系。方法选取2015年8月至2018年6月郑州人民医院收集的80例胃癌组织及40例胃癌癌旁组织,采用免疫组织化学染色技术检测LAPTM4B、TFF1蛋白表达情况,观察不同病灶最大径、TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移情况、浸润程度及胃癌组织中LAPTM4B、TFF1蛋白的阳性表达率。结果胃癌组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率为61.25%、TFF1蛋白阳性表达率为68.75%,胃癌癌旁组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率为25.00%、TFF1蛋白阳性表达率为35.00%;胃癌组织均高于癌旁组织(P<0.05)。在TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的胃癌组织中LAPTM4B蛋白阳性表达率分别为78.79%、74.42%,高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)48.94%、未发生淋巴结转移45.95%的病人(P<0.05);在TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移、低分化的胃癌组织中TFF1蛋白阳性表达率分别为90.91%、81.40%、87.10%,高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)53.19%、未发生淋巴结转移54.05%、高分化和中分化的57.14%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌组织中LAPTM4B、TFF1表达强度明显较癌旁组织增强,可能与胃癌的发生及发展有一定的关系。

食管鳞癌组织中基质金属蛋白酶-3和溶酶体相关4次跨膜蛋白B-35的表达

目的探讨食管鳞癌组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和溶酶体相关4次跨膜蛋白B-35(LAPTM4B-35)的表达及其临床意义。方法采用免疫组化S-P法检测120例食管鳞癌和60例癌旁正常食管黏膜组织中MMP-3和LAPTM4B-35的表达。结果食管鳞癌组织中MMP-3和LAPTM4B-35的阳性率分别为75.00%(90/120)、58.33%(70/120),癌旁正常食管黏膜组织中分别为15.00%(9/60)、10.00%(6/60),差异均有统计学意义(P均<0.05)。食管鳞癌组织中MMP-3的表达与浸润纤维膜与否、TNM分期、淋巴结转移与否有关(P均<0.05)。食管鳞癌组织中LAPTM4B-35的表达与浸润纤维膜与否、TNM分期有关(P均<0.05)。食管鳞癌组织中MMP-3和LAPTM4B-35的表达呈正相关关系(r=0.488,P<0.001)。结论食管鳞癌组织中MMP-3和LAPTM4B-35具有较高的阳性表达水平,且两者可能与食管鳞癌的侵袭转移有关。

MPO-ANCA相关性血管炎中抗溶酶体相关膜蛋白-2抗体的作用初探

目的初步探讨抗溶酶体相关膜蛋白-2抗体(LAMP-2A)在髓过氧化物酶抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎(MPO-AAV)中的存在及意义。方法采用ELISA法分别检测入选者周围血的LAMP-2A、髓过氧化物酶抗中性粒细胞胞质抗体(MPO-ANCA)、溶酶体相关膜蛋白-2(LAMP-2)、髓过氧化物酶(MPO)及活化补体C5a水平,比较LAMP-2A阳性与阴性患者间临床资料及上述指标间的差别,并分析其相关性。结果MPO-AAV患者中LAMP-2A的阳性率为48.44%,阳性率在有无肾、肺损害患者中差异无统计学意义;病例组LAMP-2水平显著高于对照组(P<0.001);LAMP-2A阳性患者C5a、MPO及LAMP-2水平显著高于阴性患者(P<0.01),并且LAMP-2A分别与C5a、MPO及LAMP-2水平呈显著正相关性(rs=0.056、0.525、0.723,P<0.001),与MPO-ANCA及BVAS无明显相关性。结论MPO-AAV中自身抗体LAMP-2A常见,其独立于自身抗体MPO-ANCA,可能通过促进补体旁路激活、结合升高的自身抗原(LAMP-2)等途径影响MPO-AAV的临床损害,更确切的作用和意义有待进一步探讨。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中微管相关蛋白轻链3和溶酶体相关膜蛋白2基因表达及其临床意义

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中巨自噬标志性分子微管相关蛋白轻链3 (LC3)和分子伴侣介导的自噬(CMA)标志性分子溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)基因表达,探讨其与SLE发病的关系。方法纳入2017年11月至2018年3月在川北医学院附属医院风湿免疫科诊治的88例SLE患者(SLE),采用密度梯度离心法分离外周血单个核白细胞(PBMCs);采用实时荧光定量PCR法测定患者PBMCs中LC3和LAMP-2在mRNA水平的表达量;采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分判断疾病活动度,分析LC3和LAMP-2表达与SLE患者临床特点及病情活动度的相关性。同期纳入年龄匹配的40例健康体检者作为正常对照组。结果正常对照组受检者PBMCs中LC3 mRNA和LAMP-2 mRNA相对表达量分别为1. 021±0. 551和1. 015±0. 667,SLE组患者分别为0. 783±0. 435和2. 402±2. 233,组间比较差异均有统计学意义(P=0. 020、0. 000)。SLE患者PBMCs中LAMP-2 mRNA表达水平与SLEDAI呈明显正相关(rs=0. 312,P=0. 003),LC3mRNA表达水平与SLEDAI无明显相关性(rs=-0. 175,P=0. 103)。LAMP-2 mRNA表达量升高患者肾脏损害发生率明显高于非升高患者(40. 7%vs. 16. 3%),LC3 mRNA表达量降低患者的血液系统受累率明显高于无LC3 mRNA表达降低患者(65. 2%vs. 32. 3%),差异均有统计学意义(P=0. 013、0. 006)。不同LC3 mRNA和LAMP-2 mRNA表达水平组实验室检查指标和治疗效果的患者分布差异均无统计学意义(均P>0. 05)。结论 SLE患者LC3 mRNA表达水平下调,LAMP-2 mRNA表达水平上调,提示SLE患者存在巨自噬功能不足。SLE患者CMA功能增强,并且与肾脏和血液系统受累有关。

慢病毒介导的shRNA沉默溶酶体相关膜蛋白2A表达可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖

目的研究短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体下调多发性骨髓瘤细胞中溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)表达对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响。方法将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人MM.1S多发性骨髓瘤细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株,Western blot法验证LAMP2A蛋白表达抑制效果;MTT法观察LAMP2A对MM.1S细胞增殖的影响及其对辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)抗MM.1S细胞的影响,乳酸检测观察LAMP2A对糖酵解的影响。结果在构建人LAMP2A-shRNA重组慢病毒载体的基础上,获得稳定低表达LAMP2A的多发性骨髓瘤细胞株;下调LAMP2A表达明显抑制MM.1S细胞的增殖并增强SAHA抗骨髓瘤细胞的作用,下调LAMP2A表达抑制MM.1S细胞乳酸分泌。结论下调多发性骨髓瘤细胞LAMP2A的表达可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖。

溶酶体跨膜蛋白5在卵巢癌细胞上皮-间质转化中的作用

目的 检测溶酶体跨膜蛋白5 (LAPTM5)在人卵巢腺癌细胞(OVCAR3)中的表达,观察LAPTM5对OVCAR3细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨LAPTM5在上皮-间质转化(EMT)过程中的作用。方法 采用Western blotting检测OVCAR3中LAPTM5的表达情况;将OVCAR3细胞随机分为2组,分别转染空载质粒和LAPTM5沉默质粒,实时定量PCR检测转染效率和EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达水平。结果 LAPTM5在OVCAR3细胞中表达上调(P <0.01);与对照组相比,转染LAPTM5沉默质粒的OVCAR3细胞株迁移、侵袭能力明显下降(P <0.05),EMT上皮标志物E-cadherin mRNA表达水平显著上调(P <0.05),间质标志物N-cadherin mRNA和Vimentin mRNA表达下调(P <0.05)。结论 LAPTM5在人卵巢腺癌细胞OVCAR3中表达上调,LAPTM5可能通过EMT影响OVCAR3细胞迁移和侵袭的能力。

溶酶体相关膜蛋白3过表达促进肝细胞脂质沉积

目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(lysosome associated membrane protein 3,LAMP3)对肝细胞脂质代谢的作用。方法以肝癌细胞系Huh7为研究对象,利用qRT-PCR及Western blot法检测游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)0.4 mmol/L处理后肝细胞LAMP3表达变化;过表达LAMP3后,分别使用油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测肝细胞内脂滴及甘油三酯沉积情况;采用ATP及β-羟基丁酸检测试剂盒检测细胞内ATP及β-羟基丁酸含量变化;过表达LAMP3,使用qRT-PCR、Western blot法检测脂质合成相关基因PPARγ与SCD-1及脂质分解相关基因CPT1A与PGC-1α表达变化。结果 FFAs处理后肝细胞Huh7中LAMP3表达显著上调(P<0.05);过表达LAMP3可显著促进肝细胞内脂滴和甘油三酯的沉积(P<0.05);过表达LAMP3对肝细胞内ATP及β-羟基丁酸含量的影响差异无统计学意义(P>0.05);过表达LAMP3可促进PPARγ及SCD-1表达(P<0.05),但对CPT1A、PGC-1α表达的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LAMP3可通过调控脂肪合成促进肝细胞内脂质沉积。

苯并(a)芘通过降低突触融合蛋白17和溶酶体关联膜蛋白2表达阻抑人脐静脉内皮细胞自噬流

目的研究苯并(a)芘(BaP)影响人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬的机制。方法HUVEC经BaP(2.5、5、10μmol/L)处理24 h后,分别采用间接免疫荧光法、Western blot、吖啶橙染色和单丹磺酰尸胺染色等技术方法,检测自噬体及其内容物降解、目标蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬接头蛋白p62、Beclin-1、自噬相关蛋白5(Atg5)、Atg7、Atg12、组织蛋白酶B(CTSB)、组织蛋白酶D(CTSD)、突触融合蛋白17(STX17)、溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)表达、溶酶体数量与功能,及相关上游关键调控蛋白丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、转录因子EB(TFEB)磷酸化水平。结果BaP暴露组HUVEC内,检测结果显示:(1)LC3 puncta水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率增加,自噬起始关键蛋白(Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg12)表达升高,Akt蛋白磷酸化则明显降低;(2)p62 puncta和p62蛋白水平明显升高;(3)溶酶体数量增加,并伴随着溶酶体特征性水解酶(CTSB、CTSD)表达升高,相应地ERK、TFEB磷酸化水平增加;(4)调控自噬体与溶酶体融合的关键蛋白STX17与LAMP2降低。结论BaP通过降低STX17与LAMP2表达水平,阻抑了HUVEC正常的自噬流。

正常大鼠肾脏细胞溶酶体膜的构成蛋白

溶酶体是细胞内对其吞噬之物质溶解及消化之主要场所,同时也是细胞自噬作用的主要细胞器。为了进一步了解此细胞器的功能与结构,我们采用免疫荧光标记法,通过5种针对大鼠肝细胞溶酶体膜蛋白的特异性单克隆抗体,对大鼠正常肾脏细胞溶酶体膜蛋白进行了标记,并通过NH_4Cl溶液对溶酶体作了膜膨胀处理,结果显示:(1)细胞内溶酶体膜蛋白是由多种蛋白所构成,其各种蛋白的含量是不同的;(2)所有溶酶体膜蛋白均表达于该细胞器之表面;(3)NH_4Cl溶液能有效地使溶酶体扩张,这将有和于进一步研究溶酶体的结构。