溶酶体跨膜蛋白5在卵巢癌细胞上皮-间质转化中的作用

目的 检测溶酶体跨膜蛋白5 (LAPTM5)在人卵巢腺癌细胞(OVCAR3)中的表达,观察LAPTM5对OVCAR3细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨LAPTM5在上皮-间质转化(EMT)过程中的作用。方法 采用Western blotting检测OVCAR3中LAPTM5的表达情况;将OVCAR3细胞随机分为2组,分别转染空载质粒和LAPTM5沉默质粒,实时定量PCR检测转染效率和EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达水平。结果 LAPTM5在OVCAR3细胞中表达上调(P <0.01);与对照组相比,转染LAPTM5沉默质粒的OVCAR3细胞株迁移、侵袭能力明显下降(P <0.05),EMT上皮标志物E-cadherin mRNA表达水平显著上调(P <0.05),间质标志物N-cadherin mRNA和Vimentin mRNA表达下调(P <0.05)。结论 LAPTM5在人卵巢腺癌细胞OVCAR3中表达上调,LAPTM5可能通过EMT影响OVCAR3细胞迁移和侵袭的能力。

Laptm5 3'UTR对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过建立稳定过表达溶酶体相关穿膜蛋白5(lysosomal associated protein transmembrane 5,Laptm5)3'不翻译区(3'UTR)的B细胞淋巴瘤38B9细胞株,探讨Laptm5 3'UTR对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞株增殖、凋亡的影响。方法:荧光定量PCR及Western blotting检测小鼠B细胞及38B9细胞中Laptm5 miRNA及其蛋白质的表达水平;将小鼠Laptm5 3'UTR及其含有的microRNA结合位点突变的突变型基因片段构建入逆转录病毒表达载体p MSCV-PIG,包装成逆转录病毒,感染小鼠B细胞淋巴瘤细胞38B9,流式细胞术检测逆转录病毒感染率,细胞计数法及流式细胞术观察Laptm5 3'UTR或其突变型过表达后389B9细胞的增殖、凋亡情况。结果:相比小鼠B细胞,B细胞淋巴瘤细胞中Laptm5的miRNA及蛋白均显著降低(P<0.01)。成功获得稳定过表达Laptm5 3'UTR(突变型)的38B9细胞株。Laptm5 3'UTR细胞株比Laptm5 3'UTR突变型过表达细胞株的增殖能力显著减慢,凋亡率显著增加[(7.87±1.08)%vs(0.45±0.07)%,P<0.01]。结论:小鼠Laptm53'UTR具有抑制B细胞淋巴瘤增殖、促进其凋亡的作用,该作用可能与其影响相关microRNA的调控有关。