迷迭香酸对大鼠中性粒细胞自由基生成和溶酶体酶释放的影响

目的:研究迷迭香酸对大鼠中性粒细胞自由基生成和溶酶体酶释放的影响。方法:利用紫外分光法、荧光分光法研究大鼠中性粒细胞自由基生成和溶酶体酶释放以及胞浆钙离子浓度。结果:迷迭香酸能抑制中性粒细胞超氧阴离子和过氧化氢以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的产生,还能减少溶菌酶及β葡萄糖醛酸苷酶的释放,而且,它对FMLP引起的中性粒细胞胞浆钙离子浓度的增加具有拮抗作用。

小鼠内耳3种溶酶体酶的定位及酶缺乏时的听力损害

目的：研究溶酶体神经氨酸酶（neuraminidase，Neu1）、保护蛋白／组织蛋白酶A（protective protein／cahepsinA，PPCA）和β-乳糖苷酶（β-galactosidase，β-al）在小鼠内耳的分布及相互影响，观察各自酶缺乏时的听功能改变。方法：分别使用出生后2个月的野生型（Neu1^＋/＋，PPCA^＋/＋和β-gal^＋/＋）小鼠各6只，年龄配对的酶基因缺乏（Neu1^-/-，PPCA^-/-和β-gal^-/-）小鼠作对照，每组6只。用听性脑干反应（ABR）测试短声（click）、短音8，16和32kHz听阈，经活体心脏灌注固定、听泡石蜡包埋和耳蜗连续切片，用免疫组织化学方法确定上述3种酶在内耳的分布情况。结果：Neu1，PPCA和β-gal在内耳不同部位的分布相类似。Neu1最强的染色主要在螺旋神经节细胞、螺旋韧带、螺旋缘、前庭神经节细胞及壶腹嵴、球囊和椭园囊感觉毛细胞，较弱的染色分布于血管纹和Corti器内、外毛细胞及支持细胞；PPCA和β-gal在螺旋神经节和前庭神经节细胞有较强的染色，血管纹、螺旋韧带、螺旋缘和Corti器内、外毛细胞及支持细胞呈较弱的染色反应；各自酶缺乏时内耳免疫染色消失。Neu1^-/-小鼠内耳PPCA和β-gal，以及β-gal^-/-小鼠Neu1和PPCA免疫反应各自无明显改变，而PPCA^-/-小鼠Neu1染色反应消失，β-gal仅存极弱的染色反应。Neu1^-/-，PPCA^-/-和β-gal^-/-小鼠听阈分别较其野生型提高约60～69dB，40～48dB和7～10dB。结论：Neu1，PPCA及β-gal分布于内耳不同组织和细胞，3种酶也以1种多酶复合物的形式存在于内耳；各自酶基因缺乏可致不同程度的听力损害。

高血压大鼠视网膜溶酶体酶组织化学研究

目的:探讨溶酶体酶在高血压视网膜病变发生过程中的作用.方法:应用光镜定量酶组织化学方法WKY大鼠和自发性高血压大鼠视网膜的酸性磷酸酶的分布和活性变化进行定量观察.结果:视网膜各层酸性磷酸酶活性由强到弱依次是(F检验,P<0.05):(1)色素上皮层;(2)视纤维层内节和外网层(两层间活性无显著性差异):(3)内网层;(4)节细胞层和神经纤维层;(5)外核层和内核层(两层间活性无显著性差异).杆锥层外节酸性磷酸酶活性呈阴性.在高血压视网膜组织中,各层溶酶体酶活性改变表现为酸性磷酸酶活性随血压周龄的增大、血压的增高而增强(t检验,P<0.05),特别是色素上皮、纤锥层内节和节细胞神经纤维层.结论:高血压发生后,溶酶体酶在高血压视网膜病变发生过程中具有致伤作用.

高雪氏病的葡萄糖脑苷脂酶位点──一种溶酶体酶的分子研究

高雪氏病的葡萄糖脑苷脂酶基因及假基因定位于人染色体１ｑ２１，结构基因为１１个外显子，长度为７．６ｋｂ，假基因位于下游１１ｋｂ。葡萄糖脑苷脂酶基因突变包括：错义突变，拼接位点突变、核苷酸插入、缺失、结构基因与假基因之间的交换。对于高雪氏病人应进行综合的分子分析，以确定其基因突变的类型。

肽链的翻译后加工4．溶酶体酶的加工、分拣和投送

肽链的翻译后加工４．溶酶体酶的加工、分拣和投送王克夷（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词翻译后加工，溶酶体酶溶酶体是细胞内大分子降解的主要场所，有两个主要特征：一是它腔内的酸性ｐＨ；二是含有多达５０种的可溶性水解酶，包括蛋白水解酶...

结肠上皮细胞和结肠癌细胞内溶酶体酶免疫电镜定位比较研究

采用后包埋免疫金技术，在透射电镜下识别确定Ｗｈｉｔｅ树脂包埋的结肠上皮细胞和结肠癌细胞内β－葡萄糖醛酸酶超微结构定位，和两者之间比较。结果发现，此酶金标颗粒定位于结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的内质网、高尔基复合体和溶酶体中。癌细胞中β－葡萄糖醛酸酶的数量高于正常结肠上皮细胞。提示β－葡萄糖醛酸酶的增多可能与癌细胞旺盛的机能活动和异常的形态结构有关。

猪高速投射伤后血液溶酶体酶及蛋白酶抑制物变化的意义

对猪高速投射伤后血液溶酶体酶及蛋白酶抑制物的变化进行观察，并与对照组进行比较。结果显示：致伤组伤后动脉血浆组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）逐渐升高，８ｈ达高峰；血清酸性磷酸酶（ＡＰ）伤后升高较缓，１２ｈ达高峰；血清弹性蛋白酶（Ｅｌａｓｔａｓｅ）与伤前相比无显著改变；血清蛋白酶抑制物α＿１－抗胰蛋白酶（α＿１－ＡＴ）伤后先下降，１２ｈ后回升，并高于伤前水平。对照组各指标未见显著变化。结果表明：虽然创伤后溶酶体酶增加较晚，但它们的抑制物却下降较早，使二者间的平衡较早就发生破坏，而这种改变可能是导致全身反应和组织破坏的一个重要原因。

龈沟液中性多形核白细胞及其溶酶体酶的诊断学意义

宿主中性多形核白细胞(PMNs)过度的炎症反应与牙周病的进展密切相关,PMNs释放的溶酶体酶具有潜在的诊断价值。本文就龈沟液(GCF)中PMNs及其3种特异的溶酶体酶(β-葡萄糖苷酸酶、弹性蛋白酶、髓过氧化物酶)作一综述,建议将GCF多种生化指标及PMNs计数结合起来进行研究。

溶酶体酶抑制剂对神经细胞内Nicastrin表达水平的影响

目的探讨溶酶体酶抑制剂对阿尔茨海默病(AD)相关蛋白Nicastrin(NCT)表达的影响,以期明确NCT的蛋白降解是否与溶酶体途径有关。方法在用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用溶酶体酶抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western印迹、亚细胞器的分级分离、免疫荧光双标等技术,检测溶酶体酶抑制剂处理后神经细胞内NCT的表达变化。结果亚细胞器分级分离实验显示,正常情况下神经细胞内的NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,少量NCT分布于溶酶体。Western印迹结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性成熟NCT(mNCT)的表达显著增强,且溶酶体酶抑制剂氯喹对mNCT蛋白表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性,但溶酶体抑制剂对非成熟NCT(imNCT)的表达无影响;免疫荧光双标结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,细胞内NCT的表达增强,且增多的NCT主要聚集在溶酶体内。结论神经细胞内mNCT的降解与溶酶体途径有关。

高渗氯化钠和维生素C治疗模拟高原失血性休克山羊血浆溶酶体酶活性的观察

将模拟在４０００ｍ高原停留２４小时的山羊２６只随机分为生理盐水对照组（ＮＳ）、高渗盐水治疗组（ＨＳ）和维生素Ｃ治疗组（ＶＣ）。在模拟高原环境下经股动脉放血至血压为５．３３±０．６７ｋＰａ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ），并维持６０分钟。分别经静脉注入０．９％ＮａＣｌ、７．５％ＮａＣｌ和维生素Ｃ，３０分钟后，回输血液行容量复苏。结果：①ＨＳ组和ＶＣ组动物再灌注后的存活时间显著延长，１２小时存活率显著提高。②ＮＳ组失血后出现明显酸中毒并逐渐加重，由代偿转为失代偿，ＨＳ组和ＶＣ组再灌注后２小时酸中毒得到改善，ｐＨ恢复至平原正常范围。③ＮＳ组在休克期及再灌注后血浆溶酶体酸性磷酸酶（ＡＰ）、β葡萄糖醛酸苷酶（βＧ）活性显著升高，并随时间呈上升趋势，而ＨＳ组和ＶＣ组再灌注后２小时血浆ＡＰ和βＧ活性趋于稳定，且ＨＳ组ＡＰ、βＧ活性及其增量ΔＡＰ、ΔβＧ和ＶＣ组ＡＰ、ΔＡＰ和ΔβＧ均显著低于ＮＳ组。相关分析显示，ＡＰ与βＧ活性及ΔＡＰ与ΔβＧ均呈显著正相关。实验结果提示：溶酶体膜稳定性增强、水解酶释放减少是７．５％ＮａＣｌ、大剂量维生素Ｃ治疗高原失血性休克的细胞学基础。

溶酶体酶的甘露糖6磷酸化调控B细胞功能

细胞对于抗原加工和呈递以及细胞内大分子的降解都依赖于溶酶体酶的活性。新合成的溶酶体水解酶会通过6磷酸甘露糖（M6P）残基来修饰其N端-连接的寡糖,修饰后的溶酶体酶能被高尔基体的M6P特异性受体识别,从而转运至内吞体或溶酶体,而不是经过分泌途径排出细胞外。临床中患有II型粘多糖症（MLII）的病人缺失磷酸转移酶的活性,这类病人自身不能进行M6P的修饰,病人体内多种溶酶体酶发生错误的转运以及过度分泌,导致溶酶体发生功能性紊乱。为了研究在缺失磷酸转移酶时,免疫系统中溶酶体酶靶向效率是否存在不同,本文的研究人员建立了MLII小鼠,来模拟临床中II型粘多糖症这种疾病。

晚发型糖原贮积症Ⅱ型患儿1例的溶酶体酶活性分析及遗传学分析

目的探讨1例晚发型糖原贮积症Ⅱ型(LOPD)型患儿的临床特征、GAA基因变异特点及溶酶体酶α-葡萄糖苷酶(GAA)活性改变情况。方法收集2020年8月在四川大学华西第二医院临床确诊的1例GSDⅡ患儿的病历资料,采集患儿及其父母的外周血样,分别用于外周血白细胞、淋巴细胞分离及基因组DNA提取,检测2种细胞中加入GAA同工酶抑制剂阿卡波糖和不加抑制剂时溶酶体酶GAA的活性。同时收集20例健康受试者的外周血样,混合后分别分离白细胞与淋巴细胞,与患儿家系同批次进行GAA活性测定,作为正常参考值。基因组DNA用于神经肌肉病基因panel检测,并对候选变异进行Sanger测序验证和保守性分析。结果患儿为9岁女性,2岁11个月时发现语言运动发育落后,就诊时走路不稳、上台阶困难及明显脊柱侧弯,患儿血清肌酸激酶显著升高、肌电图异常,心脏彩色多普勒超声未见异常。基因检测发现其携带GAA基因c.1996dupG(p.A666Gfs*71)和c.701C>T(p.T234M)复合杂合变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关指南,分别评级为致病变异(PVS1+PM2_Supporting+PM3)和可能致病变异(PM1+PM2_Supporting+PM3+PM5+PP3)。患儿、患儿父亲、母亲白细胞中GAA活性在不加抑制剂时分别为同批次正常值的76.1%、91.3%、95.6%,加入抑制剂时分别为同批次正常值的70.8%、112.9%、128.2%,白细胞中GAA活性在加入抑制剂后降低约6~9倍;患儿、患儿父亲、母亲淋巴细胞中GAA活性在不加抑制剂时分别为同批次正常值的68.3%、59.0%、59.5%,在加抑制剂时分别为同批次正常值的41.0%、89.5%、57.7%,淋巴细胞中GAA活性在加入抑制剂后降低约2~5倍。结论患儿被诊断为LOPD,其GAA基因的c.1996dupG和c.701C>T复合杂合变异可能是其遗传学病因。LOPD患儿GAA残余酶活性范围较宽,酶活性改变不典型,在诊断时不能仅依据酶活性检测,而需要结合临床表现、基因检测和酶活性检测进行综合诊断。

心脉灵液对内毒素休克大鼠血浆和肺溶酶体酶含量的影响

在内毒素休克大白鼠模型上观察到肺系数明显增高，支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬ）中的分子量４０Ｓ萤不素右旋酿酥（ＦＤ—４０Ｓ）含量明显上升，同时血浆及肺组织酸性磷酸酶（ＡＣＰ）增高，与正常对照组相比有明显差异（Ｐ＜０．０１）；用心脉灵液进行治疗，肺系数及ＢＡＬ中ＦＤ—４０Ｓ含量均下降，血浆及肺组织ＡＣＰ也降低，因此说明内毒素引起的肺血管通透性增加与溶酶体酶的释放有密切的关系，而心脉灵液可通过抑制溶酶体的释放而减轻溶酶体酶对肺组织的损伤，从而起到保护肺组织的作用。

新生期反复惊厥大鼠神经行为改变及溶酶体酶抑制剂的干预作用

目的探讨溶酶体酶抑制剂（CBI）在三氟乙醚致新生期大鼠反复惊厥性脑损伤中的干预作用及其信号通路。方法90只生后6d（P6）的健康SD大鼠随机分为3组（n=30）：对照（CONT）组、反复惊厥（RS）组及CBI组，RS组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次，每次间隔30min，连续9d；CONT组同样操作但不吸入三氟乙醚；CBI组惊厥前腹腔注射CBI（总量2μl），同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥，方法同RS组。分别于生后不同时间段检测体格、神经发育以及认知情感能力，并于末次惊厥后1．5h、3h、6h、24h及第35天五个时间点（n=6）取大脑皮层组织，采用免疫印迹技术检测自噬相关蛋白cathepsin B的表达。结果P14时Rs组体质量（27．28±1．60）k，低于CONT组（33．45±1．57）kg，差异具有显著性（P〈0．0001）。神经发育指标显示悬崖回避时间，日龄P12时RS组历时（2．10±1．45）s，延长于CBI组（1．05±0．32）s，差异有显著性（P〈0．05）。旷场行为测试：RS组水平运动（20．00±13．08）次，少于CONT组（57．83±33．22）次，差异有显著性护〈0．05）；RS组垂直运动（2．50±2．43）次，少于CONT组和CBI组[分别为（22．17±10．74）次，（9．33±5．39）次]，差异有显著性（P〈0．01）。Western blot法检测，RS组在1．5h、3h、6h、24h各时间点CathepsinB的表达明显高于CONT组（P〈0．05）；CBI组于1．5h、3h、6h、24h各时间点cathepsin B的表达明显低于RS组妒〈0．05）。P35时间点3组之间差异无显著性（P〉0．05）。结论CBI能够通过自噬信号途径抑制发育期惊厥所致神经行为损伤。

泪液中三种溶酶体酶活性测定方法

遗传性鞘脂代谢缺陷为1组比较常见的遗传性疾病,临床表现类似,故必须进行酶学测定确诊。过去对这类疾病缺陷酶测定都是采用血清,白细胞及尿液等样品,采集和前处理均比较复杂,因此,作者采用人工合成的4-甲基伞形酮(4-mu)衍生物为底物。

溶酶体贮积症

溶酶体是一种细胞器,它是细胞的处理与回收系统。组成细胞的各种生物大分子都处于一种动态平衡之中,不断被分解又不断被再合成。通过内吞作用,从细胞外摄入的生物大分子,也需要分解成不同的组份后才能被利用。来自细胞内及细胞外的大分子的分解都在溶酶体中进行。溶酶体是由单层膜包裹的囊泡,内含有60多种酸性水解酶,可降解各种生物大分子,如核酸、蛋白质。

溶酶体的酶细胞化学和初级溶酶体

1949年de Duvet及其同事们用差速离心法分离大鼠肝匀浆中的各种亚细胞成分时,发现了一种含有多种酸性水解酶,介于线粒体和微粒体之间的亚细胞颗粒。Duve(1955)根据这种颗粒含大量水解酶和具有与其它已知细胞器不同沉降系数的特点,称其为溶酶体。继之,许多学者用酶细胞化学方法在电镜下证实了溶酶体的存在。随着对溶酶体研究的不断深入,对内吞体(eadosome)的形成和作用以及包裹溶酶体 (wrapping lysoso-

大鼠溶酶体及微粒体β—葡萄糖苷酸酶性质的研究

本文采用高速离心等方法从鼠肝中分别获得溶酶体及微粒体,然后对溶酶体及微粒体β—葡萄糖苷酸酶的性质进行了研究。结果表明,此二种细胞器中该酶的最适PH、Km及分子量基本相同,而热稳定性、pH稳定性及等电点不同。

黏脂贮积症Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β家系的溶酶体酶学分析

目的分析总结黏脂贮积症(mucolipidosis,ML)Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β溶酶体酶酶学检测的特点,为选择酶学检测指标提供依据。方法检测两例确诊为MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β患者及10例健康个体血浆及白细胞中的多种溶酶体酶活性,比较患者与健康个体的差异;分别以"mucolipidosis"及"黏脂贮积症"为关键词,检索PubMed、CNKI、万方数据库,分析总结已报道的MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β的酶学检测结果。结果两例患儿血浆中多种溶酶体酶活性与健康个体相比均明显增高,程度由高至低分别为:芳基硫酸酯酶A(arylsulphatase A,ASA)和α-L-艾杜糖醛酸酶(α-iduronidase,IDUA)(20倍以上)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUSB)(10倍以上)、β-D半乳糖苷酶(β-galactosidase-1,GLB1)和α-半乳糖苷酶(α-galactosidase A,GLA)(5倍以上)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(α-N-acetylglucosaminidase,NAGLU)(2倍),葡萄糖脑苷酯酶(glucocerebrosidase,GBA)(无明显变化)。两例患儿白细胞中多种溶酶体酶的活性与健康个体相比无差异,均在正常范围。筛选出22篇文献,共报道了15个溶酶体酶学指标,血浆中升高最明显的是总己糖胺酶(hexosaminidase A and B,Hex A+B)(平均升高24.4倍)和α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-man)(24.7倍),其次是ASA(22.4倍),GUSB为18.8倍;选用较多的指标分别是Hex A+B(12篇)、α-man(11篇)和GUSB(10篇)。结论溶酶体酶学分析是MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β不可或缺的辅助诊断手段,通过对两例患儿的血浆酶学的分析和文献复习,推荐选用ASA、GUSB、Hex A+B和α-man为二者的血浆溶酶体酶学分析指标。