尿激酶型纤溶酶原激活因子调控人头颈部鳞状细胞癌转移的功能与机制研究

目的 探究尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-type plasminogen activator,PLAU)在头颈部鳞状细胞癌中的表达以及转移中的作用,并对其相关分子机制进行研究。方法 实验室培养人咽鳞癌细胞株FaDu细胞与人喉癌细胞株TU686细胞;使用siRNA靶向敲减/过表达PLAU基因后,利用qRT-PCR和Western Blot实验验证转染效率;Transwell与细胞划痕实验检测肿瘤细胞的侵袭、迁移能力变化情况;检测N-钙黏蛋白、锌指转录蛋白、波形蛋白在HNSCC细胞中表达的情况,分析其表达与PLAU对肿瘤远处转移的相关性。结果 PLAU在HNSCC中高表达,组间差异有统计学意义(P<0.05),且晚期或复发转移性HNSCC中的PLAU明显高表达于早期或原位癌。过表达PLAU有促进喉癌细胞转移的能力,PLAU可能调控N-钙黏蛋白、锌指转录蛋白、波形蛋白等诱导头颈部肿瘤的转移组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PLAU可能是通过细胞-间充质转化过程促进HNSCC的迁移和侵袭。

尿激酶型纤溶酶原激活因子及其受体与阿尔茨海默病

尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-plasminogen activator,uPA)是一种多效细胞因子,参与多种病理生理过程;uPA系统可通过调节纤溶酶的活性降解β淀粉样蛋白(amyloidβprotein,Aβ)及降低其神经毒性。目前研究认为Aβ神经毒作用是多种因素导致阿尔茨海默病发病的共同通路。该文就uPA及其特异受体(uro-kinase-plasminogen activator receptor,uPAR)的结构、功能、基因多态性以及与阿尔茨海默病的关系作一综述。

血浆尿激酶型纤溶酶原激活因子系统与肿瘤标记物检测老年非小细胞肺癌的相关性

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)系统与肿瘤标记物检测老年非小细胞肺癌诊断、治疗及预后判断的临床价值及相关性。方法采用酶联免疫法(ELISA)检测经病理确诊的老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者48例及健康体检者30例血浆uPA及其受体(uPAR)、抑制因子(PAI-1)水平及血清癌胚抗原(CEA)、鳞癌相关抗原(SCCAg)含量。结果老年非小细胞肺癌患者血浆uPA、uPAR和PAI-1水平均较对照组显著升高;血清CEA、SCCAg的水平亦均显著升高,其中CEA在腺癌患者中明显增高,SCCAg在鳞癌患者中明显增高。血浆uPA、uPAR、PA I-1水平与TNM分期相关,与病理类型及分化程度无关;而血清CEA、SCCAg的水平与病理类型、分化程度及TNM分期均相关。血浆uPA、uPAR、PA I-1之间及uPAR与CEA、SCCAg之间均呈直线相关。结论血浆uPA、uPAR和PA I-1可作为肿瘤标记物用于老年NSCLC的疾病诊断、病情观察及预后判断;血清CEA、SCCAg含量的检测对老年NSCLC的诊断及病理类型有重要临床意义。

小鼠生殖周期中纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达

目的 研究小鼠生后不同发育阶段生殖腺上皮中纤溶酶原激活系统的表达情况。方法 出生后第 9天至 6 0天小鼠72只 ,雌雄各半 ,按出生后第 9、1 5、2 0、2 5、32、4 0、4 5、50、6 0天分为 9组 ,每组 8只小鼠 ,雌雄各半 ,取小鼠的卵巢和睾丸 ,应用免疫组织化学方法 ,对卵巢和睾丸石蜡切片上纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达进行了检测和半定量分析。结果 出生后第 9～ 30天的小鼠卵巢和睾丸中没有检测出纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达 ,而在第 30～ 6 0天的小鼠卵巢中检测出uPA、uPAR表达 ,在第 30～ 6 0天的小鼠睾丸中检测出tPA的表达 ,并且表达量较强。结论 小鼠生殖周期中纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达与大鼠生殖腺中的规律有一定差异。

纤溶酶原对星形胶质细胞纤溶酶原激活因子及其抑制剂的调节作用

目的 探讨纤溶酶原 (PGn)对大鼠脑星形胶质细胞纤溶酶原激活因子 (PAI)及其抑制剂 (PA)的调节作用。方法 利用大鼠血纤溶酶原对体外培养的星形胶质细胞进行诱导刺激 ,采用酶谱分析法、反射酶谱分析法、免疫印迹法对所产生的 PAs和 PAIs进行分析测定。结果 实验所用 PGn上调 u PA和 PAI- 1 ,下调 t PA活性 ,并且诱导产生一个 2 8k Da的低分子量的 u PA活性分子。结论 在体外 ,纤溶酶原有调节星形胶质细胞的功能。

慢性前列腺炎对纤溶酶原激活因子系统影响的初步研究

目的 :分析慢性前列腺炎对纤溶酶原激活因子 (PA)系统表达和活性的影响。 方法 :选取正常男性 2 3例 ,慢性前列腺炎患者 80例 (不育组和可生育组各 4 0例 )。采用纤维蛋白 琼脂糖PA指示胶打孔法和SDS PAGE电泳后指示胶铺盖法 ,测定精浆中总PA及组织型纤溶酶原激活因子 (tPA)和尿激酶型纤溶酶原激活因子 (uPA)的表达和活性。结果 :在正常人精浆中有高表达的总PA活性 ;而且同时表达tPA和uPA。慢性前列腺炎患者的精浆中总PA活性降低 ,tPA活性明显减低 ,uPA活性减低。慢性前列腺炎的可生育组和不育组精浆中总PA活性均降低 ,但两组间无明显差别。 结论 :患慢性前列腺炎时前列腺分泌功能降低 ,合成分泌PA减低。

猕猴精浆纤溶酶原激活因子的来源及在精子获能中的作用

我们的前期工作表明 ,不育症人精液中纤溶酶原激活因子 (plasminogenactivator;PA)活性明显升高 ;给成年男子和猕猴注射长效睾酮诱发无精过程中 ,精液PA含量也伴随上升。为进一步查明PA的来源和对精子的作用 ,用原位杂交检测组织型PA (tPA) ,尿激酶型PA (uPA)及PA抑制因子 1(PAI 1)的mRNAs在成年健康猕猴附睾、前列腺和精囊中的表达。体外培养猕猴精子 ,培液中加入uPA、tPA及其底物纤溶酶原 (plasminogen) ,测试PA对精子活力、顶体反应及激活卵子的影响。结果表明 ,猕猴附睾、前列腺和精囊均表达tPA、uPA和PAI 1mR NAs。加入uPA能维持精子的活力 ,使精子产生超激活运动 ,诱导顶体反应的发生 ,并使精子获得激活卵子的能力。这说明猕猴精浆PA除来源于睾丸外 ,可能主要来源于附睾及附性腺 ;在体外 ,uPA ,而不是tPA 。

尿激酶型纤溶酶原激活因子对雄性大鼠生育力影响的实验研究

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）对于奥硝唑所致的雄性不育大鼠生育力的影响。方法：10～12周龄成年雄性SD大鼠50只，随机分成5组，每组10只：奥硝唑模型组、uPA高剂量组、中剂量组、低剂量组和空白对照组。奥硝唑模型组和uPA各剂量组给予奥硝唑400mg／（kg·d）灌胃，同时uPA高剂量组、中剂量组、低剂量组分别腹腔注射uPA3000IU／（kg·d）、1000IU／（kg·d）、334IU／（kg·d）。空白对照组给予等体积0．5％羧甲基纤维素钠灌胃，同时腹腔注射等量生理盐水。各组动物连续处理20d后，观察动物的精液常规、睾丸和附睾功能以及与雌鼠交配情况。结果：①与空白对照组相比，奥硝唑模型组精子活动力和平均胚胎数显著降低（P〈0．01）。②与模型组相比，uPA高剂量组精子活动力和平均胚胎数显著增加（P〈0．01），而uPA中、低剂量组虽有所改善但无统计学意义。③uPA高剂量组精子日产量与模型组及空白对照组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论：uPA对奥硝唑引起的雄性大鼠不育起到改善作用。

尿激酶型纤溶酶原激活因子对小鼠获能精子线粒体膜电位的影响

目的:检测尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)体外对小鼠获能精子线粒体膜电位的影响。方法:采用线粒体膜电位荧光染料JC-1,利用流式细胞仪和荧光显微镜检测分别与uPA(实验组)和BWW液(对照组)共孵育0、5、15、30、60min的小鼠获能精子线粒体膜电位状态。结果:①在uPA作用第5、15min时,精子体内平均荧光强度较作用前显著增加,高膜电位的精子数量百分率相应增加(P<0.05)。②与对照组相比,实验组在uPA作用5、15min时的高膜电位精子数量百分率,以及作用15、30、60min时的精子线粒体膜电位平均荧光强度显著增加(P<0.05)。结论:uPA在体外可以增加小鼠获能精子的线粒体膜电位,并使高膜电位状态维持一段时间,为获能精子提供充足的能量供应。

纤溶酶原激活因子与猕猴精子运动力的关系及其在附睾和附性腺中的表达调节

用 11酸睾酮诱导猕猴少精子症和弱精子症及单侧隐睾手术诱导单侧少精子症和弱精子症模型 ,观察对附睾头、附睾体、附睾尾、前列腺和精囊组织型PA (tPA)、尿激酶型PA (uPA)及抑制因子 - 1(PAI 1)mRNA表达的影响。原位杂交的结果表明 11酸睾酮诱导少精子症和弱精子症 ,tPAmRNA的表达在附睾头、精囊及前列腺减少 ,而在附睾体升高 ,附睾尾表达基本无变化 ;uPAmRNA的表达在附睾头、附睾体、前列腺减少 ,而在精囊升高 ,附睾尾表达基本无变化 ;PAI 1mRNA的表达在附睾头、附睾体、精囊下降 ,而在前列腺升高 ,附睾尾表达无显著变化。单侧隐睾手术不影响tPA、uPA和PAI 1mRNA的表达。这些结果提示附睾头和附睾体分泌的uPA可能与精子前向运动能力的获得相关。tPA、uPA和PAI 1mRNA在猕猴附睾头部和体部、前列腺和精囊中的表达可能受睾酮的调节 ,但不受睾丸分泌因子及温度的影响 ,且在不同部位睾酮的调节具不同的特征 ,而附睾尾tPA、uPA和PAI

尿激酶型纤溶酶原激活因子在精子趋化运动中的作用

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)是否能诱导精子产生趋化性运动,从而探讨uPA在治疗男性不育中的可能作用机制。方法:采用精子聚集毛细管内的方法来检测精子趋化性。根据毛细管内自下而上uPA浓度梯度的方向将实验分为递增浓度A组、递减浓度B组和对照C组。A组毛细管内的趋化液以及精子培养皿内的处理液分别是不同浓度的uPA和Ham'sF-10;B组相反,分别为Ham'sF-10和uPA;C组毛细管和精子培养皿内的液体均为Ham'sF-10。然后检测在不同时间点不同组毛细管内聚集的精子密度。结果:①精子顺递增的uPA浓度梯度进行趋化运动。A组毛细管内液体对精子的聚集作用明显大于B组和C组(P<0.05)。②20IU/ml的uPA对精子趋化作用最强。③3组中的精子密度随着时间的延长趋于增加,但在20、30min2个时间点,3组的精子密度之间差异有显著性(P<0.05)。④uPA除了对精子有趋化作用外,还能增加精子活力,促进精子运动。结论:uPA在体外既能诱导精子产生趋化性运动,又能增加精子的活力,推测此为uPA治疗男性不育的作用机制之一。

尿激酶型纤溶酶原激活因子在小鼠精-卵接触前通讯和体外受精中作用初探

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)在雄性促生育中的作用机制。方法:通过检测精子在毛细管内聚集数量的变化来测试小鼠精子体外对uPA和卵细胞的趋化性,以及将卵细胞分别经uPA、uPA抑制剂(PAI-1)以及抗-uPAR抗体预处理后,检测其趋化诱导精子的能力,来反应uPA在精-卵接触前通讯中的作用。其次观察精子经uPA预处理后其受精能力的变化。结果:精子在递减uPA浓度梯度中的聚集数量明显低于等浓度内的(P<0.05);经uPA预处理的卵细胞其聚集精子的能力显著强于未经处理的卵细胞(P<0.05),而用PAI-1预处理卵细胞后,卵细胞聚集精子的能力显著下降(P<0.05);用抗-uPAR抗体预处理卵细胞并不影响卵细胞对精子的聚集作用;uPA处理后的精子与卵细胞共孵育后其受精卵数目多于未经处理的(P<0.05)。结论:精子在体外对uPA和卵细胞均有趋化性;uPA能增加卵细胞对精子的趋化作用,增进精-卵接触前通讯,促进受精。本实验在一定程度上探讨了uPA促男性生育的机制,并为其在临床上的应用提供一定的理论依据。

苦参碱对卵巢癌细胞生长及其尿型纤溶酶原激活因子和抑制因子表达的影响

目的:探讨苦参碱对卵巢癌细胞生长及其尿型纤溶酶原激活因子(uPA)和1型抑制因子(PAI-1)表达的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色法测定不同浓度苦参碱对卵巢上皮癌SKOV3细胞的抑制作用,采用HE染色法及免疫细胞化学法观察在不同浓度苦参碱作用前后SKOV3细胞形态学改变及其uPA、PAI-1的表达情况。采用细胞计数法观察在不同浓度苦参碱作用下SKOV3细胞的生长曲线变化,采用软琼脂集落观察在不同浓度苦参碱作用下对SKOV3细胞集落形成的影响。结果:①苦参碱对卵巢癌SKOV3细胞有明显的抑制作用。随苦参碱浓度升高,其抑制作用增强,两者呈正相关关系(r=0.965,P<0.05);②苦参碱对SKOV3细胞的uPA、PAI-1表达有下调作用;③苦参碱对卵巢癌SKOV3细胞的生长曲线及集落形成均有明显的抑制作用。结论:苦参碱对体外培养的卵巢癌SKOV3细胞具有较强抑制作用并具有杀伤肿瘤干细胞的能力,苦参碱的抗肿瘤机制可能通过细胞毒作用、诱导细胞凋亡等多种机制参与,并可能与下调uPA、PAI-1蛋白的表达有关。

健脾活血方含药血清对肝癌细胞肝细胞生长因子/c-Met通路、尿激酶型纤溶酶原激活因子分泌及缺氧状态下细胞活性及增殖的影响

目的探讨健脾活血方含药血清对肝癌细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路、尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)分泌及缺氧状态下细胞活性及增殖的影响。方法将20只大鼠随机均分为实验组及对照组,分别给予健脾活血方及生理盐水连续灌胃7d后,取血制备含药血清。取对数生长期肝癌细胞株SMMC-7721分为对照组、实验组,加入相应含药血清,并加入氯化钴模拟缺氧状态,培养72h后检测各组细胞的活力与增殖能力、侵袭能力。另取SMMC-7721细胞分为对照组、实验组分别加入相应含药血清培养72h后,检测细胞培养液上清uPA浓度、HGF及其细胞中mRNA表达水平、c-Met蛋白及mRNA表达水平。结果实验组SMMC-7721细胞的A值、细胞增殖率、迁移到下室的细胞数量均低于或少于对照组(均P<0.05)。实验组细胞培养液上清uPA浓度、HGF以及细胞中HGFmRNA表达水平、c-Met蛋白及其mRNA表达水平均低于对照组(均P<0.05)。结论健脾活血方含药血清可抑制缺氧状态下肝癌细胞的活力及增殖能力,其或通过抑制HGF/c-Met通路及uPA的分泌,阻止肝癌的复发和转移。

尿激酶型纤溶酶原激活因子基因P141L多态性与迟发性阿尔茨海默病的关系

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子基因(PLAU)P141L多态性与中国汉族人群迟发性阿尔茨海默病(Late-onset Alzheimer’sdisease,LOAD)的关系。方法采用DSM-Ⅳ诊断标准和NINCDS-ADRDA诊断标准中"很可能AD"的标准,选择67例LOAD患者,与71例年龄、性别与AD组匹配的健康对照者进行病例对照研究;采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测PLAU基因P141L多态性并进行关联分析。结果LOAD组与对照组基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg定律;两组基因型分布差异无统计学意义(χ2=0.3278,P=0.8488);两组等位基因分布差异无统计学意义(χ2=0.2238,P=0.6361)。结论PLAU基因P141L多态性与中国汉族人群LOAD未发现存在关联。

弱精子症动物模型中尿纤溶酶原激活因子的含量及表达情况研究

目的:利用奥硝唑所致弱精子症动物模型,采用免疫组化方法和RT-PCR技术,了解尿纤溶酶原激活因子(uPA)在弱精子症动物模型中的含量及表达情况,初步探讨奥硝唑所致弱精子症动物模型的机制及uPA作为预防或治疗弱精子症药物的可能性。方法:48只雄性SD大鼠随机分为1d用药组,5d用药组,10d用药组,15d用药组,20d用药组和对照组,每组8只,用药组每天给予奥硝唑200mg/kg,对照组给予0.5%羧甲基维素钠连续灌胃,用药组分别在给药第1、5、10、15、20d后24h内,麻醉处死动物取附睾和睾丸。低渗肿胀试验检测精子细胞膜完整性,免疫组化方法动态观察睾丸与附睾组织中uPA蛋白表达情况,RT-PCR检测睾丸组织中uPAmRNA含量。结果:奥硝唑持续给药构建弱精子症时,精子膜完整性下降发生在给药的第10d,并一直维持低值。与建立弱精子症模型同步的uPA在睾丸和附睾组织蛋白表达及mRNA含量下降在用药15d,下降趋势上是平行的,而显效性稍滞后。用药15d组与用药20d组uPA蛋白表达、mRNA水平分别与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:精子细胞膜受损、运动能力下降与uPA表达及含量下降平行,奥硝唑所致弱精子症模型形成可能是由于uPA含量及表达下降所致。弱精子症形成原因较复杂,uPA含量及表达的下降可认为是弱精子症形成因素之一,检测uPA含量可能有助于弱精子症的诊断和预防。

组织型纤溶酶原激活因子基因真核表达质粒的构建及其体外表达研究

目的构建人组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)基因的新型真核表达载体pcDNA3.1-Myc-His B(-)/t-PA,并观察其在人脐静脉内皮细胞株(hUVEC)中的表达情况。方法将t-PA基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1-Myc-His B(-)中,经脂质体介导将pcDNA3.1-Myc-His B(-)/t-PA导入hUVEC,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测t-PA基因在转染细胞内的转录水平,免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞t-PA蛋白表达,底物发色法检测转染细胞t-PA活性。结果经双酶切鉴定和测序证实已将t-PA基因DNA片段正确插入到真核表达载体中,转基因组、空载体组、转绿色荧光蛋白组和空白对照组hUVEC t-PA mRNA相对含量分别(0.92±0.22)(、0.32±0.17)(、0.35±0.17)和(0.27±0.17),转t-PA基因组明显高于对照各组,其细胞培养上清t-PA活性分别为(48.90±8.06)、(5.44±1.09)(、5.17±0.95)和(5.01±1.03)U/106细胞.24h,转t-PA基因组t-PA活性明显高于各对照组(均P<0.01)。用抗Myc标签抗体可检测到转t-PA基因组外源性蛋白质表达,对照组则为阴性。结论成功构建pcDNA3.1-Myc-His B(-)/t-PA基因新型真核表达载体,并能在hUVEC中表达,从而为血栓性疾病的基因治疗研究奠定了基础。

尿型纤溶酶原激活因子及其1型抑制因子mRNA表达与卵巢癌临床病理及预后的关系

目的 研究卵巢组织中尿型纤溶酶原激活因子（uPA）及其1型抑制因子（PAI-1）的表达，探讨其表达与卵巢肿瘤恶性程度的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测uPA、PAI-1在40例卵巢恶性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤及20例正常卵巢组织中的表达。结果 uPA、PAI-1在卵巢恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常组织，Ⅲ～Ⅳ期卵巢恶性肿瘤患者其卵巢肿瘤组织中uPA、PAI-1阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期，uPA、PAI-1在低分化、淋巴结转移、残存灶〉2cm的表达率均明显高于高、中分化、无淋巴结转移、残存灶〈2cm者，uPA在有大网膜转移患者的表达率高于大网膜正常者，预后差者uPA表达明显高于预后好者，P值均〈0．05。结论 uPA、PAI-1表达与卵巢恶性肿瘤的侵袭、转移关系密切，有望在临床上成为判断侵袭、转移和预后指标之一。

新疆维吾尔族、汉族载脂蛋白E基因及尿激酶型纤溶酶原激活因子基因多态性与Alzhemier病的关系

目的探讨新疆维吾尔族(维族)、汉族载脂蛋白E(ApoE)基因及尿激酶型纤溶酶原激活因子(PLAU)基因多态性与Alzheimer's病(AD)的关系。方法应用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法,检测209例很可能AD患者(AD组,汉族98例,维族111例)及220名正常对照者(NC组,汉族103人,维族117人)的ApoE基因及PLAU基因第6号外显子r2227564s基因型及等位基因频率。结果 AD组中,维族、汉族ApoEε3/4基因型及ε4等位基因频率明显高于NC组;其与PLAU基因C/T基因型组合的频率明显高于NC组(均P<0.05);具有ApoEε3/3基因型的维族T/T基因型频率明显高于NC组(P<0.05)。结论 ApoE基因多态性可能与AD相关;PLAU C/T基因型可能增加具有ApoEε3/4基因型及ε4等位基因者AD的发病风险;PLAU T/T基因型可能增加具有ApoEε3/3基因型、ε3等位基因的维族AD的发病风险。