囊胚滋养外胚层活检对妊娠母体血清β-hCG及妊娠结局的影响

目的囊胚滋养外胚层(TE)细胞活检目前是胚胎植入前遗传学检测(PGT)最常用的活检技术,本研究旨在探究TE活检是否影响早期妊娠母体血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)水平及妊娠结局。方法回顾性分析2018年4月至2021年6月在安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心行体外受精-胚胎移植且移植后14天内尿妊娠试验阳性的363对夫妻的366个单囊胚冷冻移植周期。根据是否行TE活检后PGT,将所有患者分为两组,即PGT组(180对夫妻的183个周期)及非PGT组(183对夫妻的183个周期),所有患者在移植后14天检测血清β-hCG水平,比较PGT组和非PGT组临床结局和血清β-hCG值。利用受试者工作特征曲线分析血清β-hCG预测各组患者妊娠结局的截断值。结果PGT组患者流产率低于非PGT组(P=0.001)。两组患者移植后14天血清β-hCG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PGT组和非PGT组血清β-hCG预测患者临床妊娠的截断值分别为817.8 mIU/mL、549.8 mIU/mL,预测活产/持续妊娠的截断值分别为1310 mIU/mL、1629 mIU/mL。两组患者分娩孕周和方式、早产率、新生儿体质量和身长比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论基于TE活检的PGT可降低流产率,且对妊娠结局无不良影响。TE活检对早期妊娠母体血清β-hCG水平无影响,用血清β-hCG预测妊娠结局时可能无需设置特别临界值。

滋养外胚层细胞活检对冻胚移植新生儿出生体质量的影响

目的:探讨胚胎植入前遗传学检测(PGT)中滋养外胚层细胞活检对新生儿出生体质量及围产期结局的影响。方法:回顾分析2017年1月至2021年12月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心行冻胚移植(FET)并获得单胎活产患者的临床资料。纳入行胚胎植入前行遗传学检测的患者221例(PGT组)和同期行卵胞质内单精子注射(ICSI)的患者756例(ICSI组),利用倾向性评分匹配(PSM)进行1:2匹配后得到PGT组191例和ICSI组363例,比较匹配前后两组患者基线数据及新生儿出生体质量等围产期及新生儿结局的差异,采用多因素线性回归分析单胎活产新生儿出生体质量的影响因素。结果:匹配前两组患者的孕产次、不孕年限及移植日内膜厚度比较,差异有统计学意义(P<0.05),匹配后两组患者基线数据差异均无统计学意义(P均>0.05)。匹配前后,两组的妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、胎膜早破、前置胎盘、剖宫产率、分娩孕周、新生儿出生体质量及新生儿身长比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。多因素线性回归分析结果显示,滋养外胚层细胞活检与新生儿出生体质量无关,女方BMI、移植日子宫内膜厚度、分娩孕周和新生儿性别显著影响新生儿出生体质量(P均<0.05)。结论:PGT中滋养外胚层活检可能不会影响新生儿出生体质量,也不增加母婴不良并发症发生风险。

哺乳动物早期胚胎滋养外胚层发育的研究进展

囊胚形成过程中,胚胎卵裂球分化为滋养外胚层和内细胞团细胞。囊胚孵出后,滋养外胚层又分化为极滋养层和壁滋养层。滋养外胚层的分化对哺乳动物早期胚胎发育至关重要。研究表明,影响滋养外胚层发育的关键基因主要为Tead4、Cdx2和Eomes,敲除或突变这些基因将导致滋养外胚层细胞分化错误,而滋养外胚层的完整性、渗透性和液体转运功能受损也将导致囊胚形成失败。本文主要综述了哺乳动物滋养外胚层的发育、滋养外胚层发育需要的关键基因、调控滋养外胚层完整性和功能相关的蛋白,以及这些蛋白与滋养外胚层发育关键基因之间可能存在的关系,为进一步研究哺乳动物早期胚胎滋养外胚层的调控机制提供参考。

内细胞团及滋养外胚层对体外受精单囊胚移植结局的影响

目的通过对非选择性单囊胚移植研究,探讨选择性单囊胚移植的临床价值以及内细胞团(ICM)、滋养外胚层(TE)在囊胚发育潜能中的作用。方法选择该中心非选择性单囊胚移植276周期,比较优质单囊胚与非优质单囊胚妊娠率、早期流产率;比较不同ICM和TE妊娠率、早期流产率。结果优质单囊胚移植临床妊娠率较非优质单囊胚临床妊娠率显著增高(P<0.05);ICM A组的临床妊娠率较ICM C组的妊娠率显著增高(P<0.05);TE A组的临床妊娠率较TE B组及TE C组显著增高(P<0.05);各组早期流产率差异无统计学意义;多胎妊娠率为1.16%。结论单囊胚移植多胎率极低;优质单囊胚移植比非优质单囊胚移植可以获得较高临床妊娠率;CC级的囊胚仍有一定的妊娠率,在无其他可移植胚胎的情况下,经充分知情同意,可考虑移植CC级囊胚。

小鼠囊胚滋养外胚层的形成与雌激素受体α

滋养外胚层由具有上皮细胞特性的桑葚胚外层细胞发育而来,为腔化以及囊胚顺利着床奠定重要基础。滋养外胚层的形成受一系列复杂的分子网络调控,包括上皮细胞特性建立和定向分化。雌激素受体α(ERα)是一种配体依赖型转录因子,广泛存在于许多细胞和组织中,参与调节生理代谢。有研究报道ERα与调控滋养外胚层形成的分子存在关联。本文旨在对小鼠滋养外胚层形成的分子调控机制进行概述。

滋养外胚层细胞活检对冻胚移植后妊娠早期血清β-hCG水平及围产期结局的影响:一项倾向评分匹配研究

目的探讨胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing, PGT)中滋养外胚层细胞活检对冻融胚胎移植后妊娠早期血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin, β-hCG)水平及围产期结局的影响。方法回顾性队列研究分析2017年1月至2021年12月期间于郑州大学第三附属医院生殖中心行冻融胚胎移植患者的临床资料, 根据患者助孕方式分为两组:PGT组308例和卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)组802例。经1∶2倾向评分匹配后, 得到PGT组300例和ICSI组571例。比较匹配前后两组患者一般资料、胚胎移植后第14天血清β-hCG水平及围产期结局, 采用多因素线性回归校正混杂因素后, 分析滋养外胚层细胞活检对冻胚移植后妊娠早期血清β-hCG水平及围产期结局的影响。结果匹配前PGT组女方年龄[(31.2±4.1)岁]明显高于ICSI组[(30.4±4.3)岁, P=0.007], PGT组抗苗勒管激素水平[(4.38±3.62)μg/L]及移植日内膜厚度[(9.1±1.6)mm]明显小于ICSI组[(4.87±3.78)μg/L, P=0.049;(9.6±1.6)mm, P<0.001];匹配后两组患者一般资料差异均无统计学意义(均P>0.05)。匹配前后两组患者临床妊娠患者、早期流产患者及活产患者的胚胎移植后第14天血清β-hCG水平差异均无统计学意义(均P>0.05);匹配前后两组生化妊娠率、临床妊娠率、早期流产率及活产率差异均无统计学意义(均P>0.05)。经多因素线性回归分析显示, 是否行PGT对血清β-hCG水平没有影响(P=0.494), 女方体质量指数及移植囊胚类型对β-hCG水平有影响(均P<0.001)。两组妊娠期高血压疾病发生率、妊娠期糖尿病发生率、妊娠期甲状腺功能减退发生率、胎膜早破发生率、前置胎盘发生率、剖宫产率、早产率、低出生体质量儿率、巨大儿率、性别比、新生儿出生体质量、新生儿身长与新生儿出生缺陷率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论冻融胚胎移植前行滋养外胚层细胞活检不影响妊娠早期血清β-hCG水平, PGT不增加母婴不良并发症发生风险。

囊胚内细胞团和滋养外胚层基因表达研究

目的研究人胚胎植入前囊胚内细胞团和滋养外胚层细胞基因的表达。方法收集辅助生殖来源人受精后6 d Gardner评分5AA囊胚,显微镜下微吸管机械分离内细胞团和滋养外胚层细胞,单细胞测序检测,选取筛选的差异表达基因并进行无监督层次聚类分析和Gene Ontology(GO)功能分类分析。结果对3枚受精后6 d的5AA囊胚内细胞团14个单细胞和滋养外胚层19个单细胞测序,结果显示内细胞团1 283个基因表达上调,其G O生物学功能主要是参与DNA依赖的转录、生物种间相互作用、抗原加工和表达、免疫反应、信号转导、氧化还原、细胞分化、抗凋亡、神经系统发育、细胞黏附等,参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路、肌动蛋白细胞骨架、黏附、轴引导、Jak-STAT、Wnt信号通路。滋养外胚层1 073个基因表达上调,其GO生物学功能主要是参与转录、DNA依赖的转录、细胞周期、蛋白分解代谢、蛋白氨基酸磷酸化、蛋白质运输、细胞分裂、有丝分裂、泛素依赖性蛋白分解、细胞内蛋白质转运等;参与泛素介导蛋白水解、鞘脂代谢、缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸降解、果糖和甘露糖代谢、氨基磷酸酯代谢、类固醇的生物合成、抗原处理和表达等信号通路。结论从空间维度揭示囊胚内细胞团和滋养外胚层的基因表达,显示两者相互协调,精细调节囊胚发育和胚胎植入过程,进一步数据分析有望寻找到调控胚胎植入的内源性关键特异分子。

胚胎植入前行滋养外胚层细胞活检遗传学检测对冻融胚胎移植后妊娠早期血清β-人绒毛膜促性腺激素及母婴结局的影响

目的探讨冻融胚胎移植患者胚胎植入前行遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)对妊娠早期血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin,β-hCG)水平及母婴结局的影响。方法行冻融胚胎移植患者970例,移植前行滋养外胚层细胞活检且囊胚可利用者211例为PGT组,未行滋养外胚层细胞活检者759例为对照组。比较2组年龄、体质量指数、不孕时间、不孕类型、内膜准备方案、转化内膜日子宫内膜厚度及基础血清卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、抗苗勒管激素水平;比较2组移植后14 d血清β-hCG水平及胚胎种植率、优质囊胚率、自然流产率、早期流产率、晚期流产率、活产率;比较2组分娩方式、足月产率、分娩孕周及新生儿身长、新生儿体质量、先天性畸形发生率。结果PGT组基础血清黄体生成素[(5.21±2.99)u/L]、移植后14 d血清β-hCG水平[(1379.15±655.59)u/L]均低于对照组[(6.34±3.67)、(1810.39±1031.79)u/L](t=3.111,P=0.034;t=2.436,P=0.027),年龄、体质量指数、不孕时间、不孕类型、激素替代周期比率、转化内膜日子宫内膜厚度及基础血清卵泡刺激素、雌二醇、抗苗勒管激素水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组胚胎种植率、优质囊胚率、早期流产率、晚期流产率、活产率、自然流产率、分娩方式、足月产率、分娩孕周、新生儿身长、新生儿体质量及先天性畸形发生率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论冻融胚胎移植前行PGT可降低妊娠早期血清β-hCG水平,不增加不良妊娠结局、母婴不良并发症发生风险。

细胞因子在猪胚胎附植期的作用及机制

猪胚胎的附植是通过广泛的细胞运动和重塑发生。胚胎的成功附植主要取决于胚胎延伸和滋养外胚层与子宫内膜上皮紧密连接的成功,这种紧密连接保证了孕体摄取其存活所必需的子宫腺上皮分泌物质。这些过程需要子宫和胚胎来源的细胞因子完成子宫内膜和滋养外胚层之间的细胞重塑,营造胚胎附植时的促炎微环境,维持附植阶段免疫系统的平衡,协调子宫和胚胎之间的相互作用等。本文主要综述了猪胚胎附植时期,由子宫和胚胎来源的细胞因子包括白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素(IFN)、成纤维细胞生长因子(FGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)发挥的作用及其作用机理,以期为胚胎附植及发育调控相关研究提供参考。

牛和小鼠早期胚胎发育过程中细胞谱系发育调控的比较

高产奶牛繁殖效率低是世界性难题,其中早期胚胎死亡率高是主要原因之一。当前对牛早期胚胎发育的研究有限,而对于小鼠这种模式动物的早期胚胎发育研究已相当深入。因此,本文从胚胎形态、转录因子以及信号通路3方面对牛和小鼠早期胚胎发育过程进行比较,以加深对牛早期胚胎发育的认识。经比较发现,受精后,牛和小鼠早期胚胎在不同时期发生母源因子降解、合子基因组激活、细胞极性建立和不对称分裂,最终使得胚胎形态发生变化,形成具有3个胚层(滋养外胚层、上胚层和原始内胚层)的囊胚。此外,牛和小鼠早期胚胎发育过程中,多个转录因子及信号通路形成复杂网络调控细胞谱系分化。综上所述,在牛和小鼠早期胚胎发育过程中,相似的生物学事件陆续发生,但是细胞谱系分化的调控呈现差异性,提示我们将小鼠早期胚胎作为研究模型的局限性,该领域的研究对提高奶牛繁殖效率以及促进牛遗传改良工作具有重要意义。

复苏周期单囊胚移植的影响因素分析

目的研究玻璃化复苏囊胚移植后的妊娠结局与冷冻前囊胚质量、发育速度的相关性,探讨单囊胚移植的可能性。方法回顾分析105例复苏周期单囊胚移植患者的临床资料,观察发育速度、囊胚质量、内细胞团(ICM)/滋养外胚层(TE)评分对妊娠结局的影响。结果第5、6天囊胚间复苏后存活率、移植后妊娠率的差异均无统计学意义(98.0%,54.5%vs 97.0%,52.5%)。优质囊胚移植后妊娠率(44/70,62.9%)显著高于非优质囊胚(12/35,34.3%)。ICM评分为A、B级的囊胚移植后妊娠率差异无统计学意义(70.6%vs 58.0%),但均显著高于C级胚胎(21.1%)。TE评分越低,妊娠率有下降趋势但差异无统计学意义。结论复苏周期单囊胚移植妊娠率与囊胚质量有关,与囊胚发育速度无关。ICM评分而非TE评分与妊娠结果显著相关。复苏周期单个优质囊胚移植后妊娠率高,提示单囊胚移植可行。

早期自然流产绒毛发育影响因素的研究进展

在早期妊娠阶段,对滋养层细胞向子宫蜕膜发生增殖、侵袭过程的调控,是妊娠成功的关键[1]。滋养层细胞来自滋养外胚层,是人类胚胎中最先分化、发育的细胞类型之一,是母-胎界面唯一与母体免疫系统直接接触的胎儿细胞,在胚胎植入、母-胎免疫耐受过程中发挥重要作用[1]。滋养层细胞的增殖、分化、凋亡及侵袭性行为,是胎盘形成、胚胎发育及妊娠顺利完成的基本要素[2]。滋养层细胞的侵袭过程与肿瘤的侵袭相似,受许多因素调控。

哺乳动物胚胎发育极性的研究进展

哺乳动物胚胎的早期发育,可依据环境变化进行自我调控。胚胎是何时具有自我调控能力的,一直有两种说法:其一,胚胎刚形成时,细胞质成分空间分布均衡,胚胎具有发育全能性,经几次卵裂后,卵裂球间开始分化发育,另外一种观点认为,胚胎形成时就具有极性,具备了分化发育的特异性,随着不断卵裂、细胞质的分离,这种发育差异表现得更加明显。近年的研究多倾向于第二种观点,认为卵裂的顺序及方位,对着床前胚胎的极性发育有影响。

拮抗剂方案新鲜单囊胚移植患者妊娠失败的独立危险因素分析

【目的】探索本中心使用促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案促排后新鲜单囊胚移植患者妊娠失败的独立危险因素。【方法】回顾性分析2017年1月至2020年4月在中山大学附属第三医院生殖医学中心行助孕治疗的325个治疗周期的资料。根据妊娠结局分为临床妊娠组(172例)和未妊娠组(153例),比较两组患者间的基础资料,临床促排卵情况,胚胎发育情况,移植囊胚的分期、内细胞团(ICM)和滋养外胚层(TE)评分,将P<0.1的变量纳入回归方程进行多因素Logistic回归分析,找出临床妊娠失败的独立危险因素。【结果】两组患者间的基础资料差异无统计学意义,促性腺激素(Gn)使用天数(8.9±1.3 vs.8.6±1.2)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)注射日的卵泡刺激素(FSH)水平(12.1±3.7 vs.13.0±4.0)U/L、受精方式及移植囊胚的ICM和TE评分在临床妊娠组和未妊娠组的差异有统计学意义。将P<0.1的变量即不孕类型、受精方式、Gn使用天数、HCG注射日FSH水平、HCG注射日黄体生成素(LH)水平和移植囊胚的ICM和TE评分纳入回归模型,采用逐步法分析后发现临床妊娠失败的独立危险因素是移植囊胚的TE评分[P=0.001,OR=2.173,95%CI:(1.359,3.476)]、Gn使用时间[P=0.015,OR=0.794,95%CI:(0.659,0.955)]和受精方式[P=0.024,OR=2.065,95%CI:(1.098,3.882)]。【结论】本中心的数据提示≤40岁预后良好的患者使用拮抗剂促排并行新鲜单囊胚移植时,较差的滋养外胚层评分,较短的Gn使用时间和使用ICSI受精方式是临床妊娠失败的独立危险因素。

体外受精与体外培养对小鼠囊胚发育潜能的影响

目的评估体外受精和体外培养对囊胚期胚胎细胞数及发育潜能的影响。方法 (1)雌性ICR小鼠,自然交配获取囊胚为In vivo组,体内受精-体外培养获取囊胚为IVC组,体外受精获取囊胚为IVF组;(2)对三组囊胚行免疫杀伤法检测并在荧光显微镜下计数总细胞数、内细胞团细胞数、内细胞团与总细胞数的比值;(3)提取三组小鼠囊胚mRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测Pou5f1等细胞因子的mRNA表达水平;(4)三组囊胚移植入D3.5假孕鼠,取D10.5胚胎进行形态学检测,计算胚胎植入率、成活率、流产率。结果 (1)IVF组和IVC组囊胚与In vivo组相比,细胞总数、滋养外胚层(TE)细胞数、内细胞团(ICM)细胞数均显著降低(P<0.01),TE/ICM细胞数的比值三组之间无显著差异(P>0.05);(2)IVF组和IVC组囊胚与In vivo组相比,多潜能基因OCT4、Nanog、Sox2表达水平相对上调,而早期细胞命运分化相关基因Fgf4、Gata4、Sox17、Eomes、Elf5、Lif表达水平下调,差异有统计学意义(P<0.05);(3)三组间胚胎植入率无显著性差异(P>0.05),而IVC组、IVF组活产率显著低于In vivo组,流产率显著高于In vivo组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外受精会导致囊胚质量下降,并影响胚胎植入后的进一步发育,导致胚胎成活率降低。

非整倍体筛查中囊胚形成时间与检测结果及妊娠结局的相关性研究

目的探究囊胚发育速度与整倍体性及妊娠结局的相关性。方法选取2018年6月至2019年1月在西北妇女儿童医院生殖中心行胚胎植入前遗传学检测-非整倍体筛查(PGT-A)的患者为研究对象,对其PGT-A数据进行回顾性分析。根据囊胚在体外发育至活检的时间不同分为2组:D5囊胚组和D6囊胚组,比较两组整倍体检测结果及妊娠结局。结果对123例患者的123个PGT-A周期的共450枚囊胚进行了活检及非整倍体检测,其中D5囊胚组囊胚363枚,包括优质囊胚114枚(31.4%);D6囊胚组囊胚87枚,无优质囊胚,两组优质囊胚占比有显著差异(P<0.05)。D5囊胚组检测为整倍体囊胚共194枚(53.4%),D6囊胚组44枚(50.6%),两组间整倍体率无显著差异(P>0.05)。D5囊胚组的冻融单囊胚移植(FET)共68个周期,其中临床妊娠周期44个(64.7%),自然流产周期9个(20.5%);D6囊胚组FET 16个周期,其中临床妊娠周期10个(62.5%),无自然流产。两组临床妊娠率和流产率均无统计学差异(P>0.05)。结论囊胚倍性及整倍体囊胚FET后早期妊娠结局与囊胚体外发育时间均无相关性,这一点在选择移植胚胎时具有参考意义。

小鼠二分胚发育的观察

本试验用含5％灭活羊血清的PBS为冲卵液,冲出小鼠胚胎,选择质量好的晚期桑椹胚和早期囊胚,保存在含20％天活羊血清的PBS中,然后在立体显微镜下分割胚胎。共分割174枚小鼠胚胎,分割成功率为87.4(258/294),将218枚小胚二分胚体外培养20小时,发育到优秀囊胚率为65.5％(143/218),出现假囊胚率为18,3％(40/218),出现滋养外胚层囊及非整合型的胚胎率为16,1％(35/218)。

无创胚胎植入前遗传学检测方法

人类辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)发展至今已经成为治疗不孕不育症的重要方式,体外受精(in vitro fertilization,IVF)∕卵母细胞胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)-胚胎移植(embryo transfer,ET)是目前最有效的治疗手段。植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)是在IVF的基础上,对植入前胚胎进行遗传学分析,选择一定遗传学特征的胚胎植入母体的技术。

哺乳动物囊胚孵化调控机制的研究进展

哺乳动物囊胚在植入前,需从透明带中孵化出来才具有侵入子宫内膜的能力。囊胚孵化失败将引起女性不孕。囊胚孵化是一个受多因素精确调控的复杂过程,目前已发现的参与囊胚孵化的调控分子和信号通路,包括蛋白酶、环氧合酶-2、p38丝裂原活化蛋白激酶、激活素A和Wnt信号通路等。该文综述了有关因素对囊胚孵化的调控机制以及目前常用的囊胚辅助孵化的方法,为进一步阐明囊胚的孵化机制,为临床上对由于囊胚孵化失败引起女性不孕的治疗提供理论基础。