不同囊胚活检方法用于植入前遗传学检测的临床效果

目的:比较胚胎植入前遗传学检测技术(PGT)中两种囊胚活检方案的临床效果。方法:对2019年1月—2020年6月在本院接受PGT患者的临床资料进行回顾性分析,比较第3天(D3)打孔活检法(D3打孔活检组)D5打孔孵出与D6皱缩后活检相结合的方法(新D5/D6活检组)的结局。结果:女方年龄(30.1±3.6)岁,共75个PGT周期,其中染色体病63周期,单基因病6周期,复发性流产6周期。活检囊胚348枚,检测成功339枚,活检成功率97.4%。PGT检测正常囊胚率41.9%(142/339)。45例患者共移植51个周期,临床妊娠率64.7%(33/51)。D3打孔活检组的囊胚形成率低于新D5/D6活检组(64.8%比72.0%,P=0.034),可利用囊胚形成率低于新D5/D6活检组(63.7%比73.0%,P=0.025)。两组D3优胚率、D3可用胚胎率、临床妊娠率无差异。结论:D5打孔孵出/D6皱缩后活检相结合的方法较D3打孔活检法可获得更好的囊胚形成率和可利用囊胚率。

小鼠囊胚培养液用于染色体筛查的研究

目的:利用小鼠囊胚培养液探讨无创胚胎植入前非整倍体筛查(niPGT-A)的可行性,为优化和发展无创胚胎植入前遗传学筛查技术提供理论依据和数据支持。方法:本研究共收集11枚小鼠囊胚,同一囊胚分别取少量滋养外胚层细胞(TE)作为金标准、内细胞团(ICM)细胞作为阳性对照、胚胎培养液(BCM)作为待验证样本。所有胚胎样本基于全基因组测序数据进行染色体状态分析,并比较同一胚胎不同样本间染色体倍性一致性。结果:在11枚小鼠囊胚中,BCM、TE和ICM的PGT-A检出率分别为82.8%(9/11)、72.7%(8/11)和100%(11/11)。BCM与TE、BCM与ICM及TE与ICM的染色体一致性分别为85.7%(6/7),88.9%(8/9),87.5%(7/9),任意两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在小鼠模型中,相比于同期活检的滋养外胚层细胞,利用囊胚培养液中的游离DNA行无创胚胎植入前非整倍体检测可获得更高的检出率和更为准确的染色体检测结果。

滋养层细胞活检法分析人废弃胚胎源性囊胚发育与染色体异常

目的:探讨年龄、卵裂期胚胎碎片、囊胚生长速率与形态对染色体异常的影响。方法:收集226例患者授精培养后第3日不适于移植和冷冻的正常受精来源的废弃胚胎988枚,激光辅助打孔后,依年龄和胚胎碎片比率分组序贯培养至囊胚期。待第5～7日囊胚形成且滋养外胚层细胞脱出2～9个时活检,同时评估囊胚生长速率与形态;机械法分离活检后存活囊胚的内细胞团细胞,应用13q14.2,21q22.13特异位点探针行FISH检测,分析染色体异常发生情况。结果:FISH检测99枚囊胚,其中58枚(58.6%)存在染色体异常;当患者年龄≥35岁时,其囊胚染色体异常风险增高;尤其胚胎碎片比率>25%者,形成的囊胚形态较差且染色体异常程度复杂(P<0.05)。随囊胚生长速率的延缓与形态分级的降低,染色体异常发生率增高。滋养层细胞活检后囊胚均存活,在分离内细胞团的36枚囊胚中,滋养层与内细胞团细胞的FISH荧光信号吻合率为91.7%。结论:体外受精治疗周期部分废弃胚胎可发育至囊胚,但由于受年龄、胚胎碎片等因素影响,囊胚染色体异常率较高,可能导致胚胎发育延迟且囊胚形态较差;FISH检测囊胚滋养外胚层细胞法可评估胚胎的染色体组成。

囊胚滋养层细胞活检技术的优势及操作解析

1990年Handyside团队首次对携带不同X-连锁隐性遗传病基因的两对夫妇的胚胎进行了检测,筛选合适的胚胎性别并种植后顺利妊娠[1]。如今植入前遗传学检测(PGT)技术已广泛应用于全世界的生殖中心并得到了迅速的发展。PGT技术是指在体外受精-胚胎移植技术的基础上,通过对配子或胚胎进行活检,获取部分遗传学物质进行染色体和(或)基因学检测,诊断其是否存在单基因缺陷、非整倍体或染色体拷贝数异常等,选择正常胚胎植入子宫,从而获得健康的子代[2]。PGT技术的成功实施需要依赖可靠的活检技术获取可用于检测的胚胎遗传物质,而活检的过程对胚胎而言是一项侵入性的操作。

染色体结构异常PGT周期中囊胚评估参数与其整倍体率的相关性

目的研究染色体结构异常患者胚胎植入前遗传学检测(PGT)周期中囊胚评估参数与其整倍体率的相关性。方法回顾性分析2019年1月至2020年6月在河北医科大学第二医院生殖医学科因夫妇双方或一方染色体结构异常行PGT的83例患者(97个周期)的相关资料,将所有患者按照一般情况、周期基本情况以及活检囊胚情况进行逐层分组,比较各亚组囊胚的PGT检测结果,分别采用周期特征性分析、广义评估方程GEE模型和分类决策树模型分析囊胚的整倍体率与周期特征、囊胚活检时的发育天数、囊胚扩张程度、内细胞团(ICM)级别、滋养层细胞(TE)级别的相关性。结果共活检371枚囊胚,其中整倍体囊胚154枚(41.51%),非整倍体囊胚217枚(58.49%)。(1)周期基本特征统计分析显示:女方18.5≤BMI<24 kg/m^(2)组其囊胚整倍体率(48.37%)显著高于BMI<18.5 kg/m^(2)(23.81%)组和BMI≥24 kg/m^(2)(36.14%)组(P<0.05);平衡易位患者囊胚整倍体率(31.88%)显著低于罗氏易位(52.85%)和倒位(56.10%)患者(P<0.05);Gn使用总量<2250 U组囊胚整倍体率(50.00%)显著高于2250~3000 U组(38.06%)和>3000 U组(34.15%)(P<0.05);活检第5天(D5)囊胚的整倍体率(53.53%)显著高于D6(31.96%)和D7(14.29%)(P<0.05);ICM、TE评级为A级的囊胚整倍体率(67.74%、70.00%)显著高于B级(39.02%、46.98%)和C级(39.62%、36.32%)(P<0.05)。(2)广义评估方程GEE模型分析显示:囊胚发育天数[OR=4.400,95%CI(1.553,12.465)]、囊胚扩张程度[OR=0.344,95%CI(0.128,0.928)]是整倍体率的独立影响因素;而女方年龄、男方年龄、女方体重指数、获卵数、MⅡ卵数、基础激素水平、促排卵情况、囊胚ICM/TE等级等与其整倍体率无关(P>0.05)。(3)分类决策树模型显示共生成3组节点:第1组节点为染色体结构异常类型,倒位及罗氏易位患者的整倍体率显著高于平衡易位患者(χ^(2)=19.164,P<0.001);第2组节点为活检囊胚发育天数,D5的囊胚整倍体率显著高于D6和D7囊胚(χ^(2)=10.824,P=0.003);第3组节点为染色体结构异常来源于男方/女方,倒位及罗氏易位男方核型异常患者囊胚整倍体率显著高于女方核型异常患者(χ^(2)=5.552,P=0.018),但平衡易位女方核型异常患者囊胚整倍体率显著高于男方核型异常患者(χ^(2)=5.320,P=0.021),交叉验证正确百分比64.2%。结论囊胚的整倍体率与囊胚的发育速度即活检时囊胚发育天数和扩张程度显著相关,而与ICM/TE评级无显著相关性。染色体结构异常的类型和患者性别与囊胚的整倍体率亦存在一定的相关性。

无创胚胎植入前非整倍体筛查的诊断有效性分析

【目的】探讨无创胚胎植入前非整倍体筛查(niPGT-A)的诊断有效性。【方法】收集并再次分析了2018年7月到2019年7月期间,在中山大学附属第六医院生殖医学中心因染色体相互易位,或罗氏易位经首次滋养层细胞(TE)活检(TE1)行植入前,遗传学检测被诊断为非整倍体或嵌合的患者捐献胚胎24枚。解冻捐赠胚胎行滋养层细胞活检(TE2)、内细胞团活检(ICM)并收集囊胚培养液/囊胚腔液(BCM/BF)通过高通量测序技术获得遗传信息。以ICM的结果为胚胎真实染色体结果,比较TE1、TE2及BCM/BF的核型一致性。【结果】TE1、TE2及BCM/BF与相应的ICM的核型一致性分别为66.7%,87.5%和79.2%(P>0.05),任意两组之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。【结论】利用囊胚培养液/囊胚腔液中的游离DNA行无创胚胎植入前非整倍体筛查可以获得与同期活检的TE2和ICM相似的诊断有效性。