滋肾清热利湿化瘀方治疗多囊卵巢综合征的网络药理学作用机制及实验研究

目的采用网络药理学探讨滋肾清热利湿化瘀方(Zishen Qingre Lishi Huayu Prescription,ZQLHP)治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的作用机制,并进行实验验证。方法基于网络药理学预测滋肾方的核心成分、靶基因和主要通路,对其中PCOS相关成分、靶基因、通路进行筛选;采用来曲唑(letrozole,LET)诱导PCOS小鼠模型,观察滋肾方对PCOS小鼠的作用,并对网络药理学结果进行机制验证。结果网络药理学结果表明,滋肾方456个成分中含有361个相关靶点,PCOS相关靶点1397个,交集靶点125个;获得槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇等主要活性成分与丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、蛋白激酶1(AKT serine/threonine kinase 1,AKT1)和信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)等核心靶点;GO分析得到BP 663条目,CC 64条目,MF 119条目,其中富集基因数量较多的条目为negative regulation of apoptotic process,plasma membrane,protein binding;KEGG分析显示潜在作用靶点主要富集在癌症信号通路、PI3K-AKT和TNF等信号通路;PPI网络分析结果显示,MAPK3、AKT1和STAT3可能是滋肾方治疗PCOS的关键靶点。动物实验结果表明,与模型组比较,滋肾方组的小鼠的体重降低(P<0.05),且能有效改善PCOS模型小鼠的组织病理学表现,囊性卵泡数量降低(P<0.05),黄体数量增加(P<0.01)。降低卵巢组织中IL-10水平(P<0.01),升高IL-6、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01)。Western blot和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果显示,PCOS小鼠卵巢组织p-AKT蛋白表达量下降(P<0.05,P<0.01),p-p38MAPK和p-STAT3蛋白表达较正常组升高(P<0.05,P<0.01),而经滋肾方治疗后p-AKT蛋白表达上升(P<0.05),p-p38MAPK和p-STAT3蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论滋肾方可能通过调控AKT/p38MAPK/STAT3信号改善来曲唑诱导的PCOS小鼠的炎性损伤。

滋肾清热利湿化瘀方对PCOS大鼠的干预作用实验研究

目的:探讨滋肾清热利湿化瘀方(ZQLHF)对多囊卵巢综合征(PCOS)模型鼠的干预作用及ZQLHF最佳浓度剂量。方法:将40只SD雌性6周龄大鼠给予来曲唑混悬液灌胃(1 mg/kg,连续21 d)建立PCOS模型。将造模成功的大鼠分为模型组和ZQLHF低、中、高剂量组,每组10只。同时取10只正常雌性大鼠设为正常组。于造模成功后各组大鼠禁食12 h,次日眼眶采血,随即给予相应药物连续干预14 d。于末次给药24 h后麻醉处死大鼠取血,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和雄激素(T)的表达水平;分离卵巢组织,观察大鼠卵巢组织病理形态学变化。结果:与正常组大鼠比较,模型组性激素T水平显著增加,FSH浓度显著降低(P<0.01),同时LH水平与LH/FSH比值明显升高(P<0.05),镜下可见卵巢组织内有大量囊状样卵泡扩张;与模型组对比,ZQLHF低、中剂量组大鼠T、LH水平降低(P<0.05),ZQLHF中剂量组LH/FSH比值明显减小(P<0.05);ZQLHF高剂量组大鼠除性激素T水平明显降低(P<0.05),卵巢组织病变均存在不同程度的改善。结论:ZQLHF通过调节PCOS模型大鼠性激素分泌水平,改善卵巢功能从而发挥有效干预作用,且ZQLHF中剂量治疗效果最优。

滋肾清热利湿化瘀方对来曲唑诱导的PCOS小鼠性激素水平及C/EBPβ蛋白的影响

目的:探讨滋肾清热利湿化瘀方(ZQLHP)对来曲唑(letrozole,LET)诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠性激素水平以及转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)信号的影响。方法:将40只4周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为正常组(Normal)、模型组(LET)、滋肾清热利湿化瘀方组(LET+ZQLHF)、枸橼酸氯米芬(clomiphene citrate,CC)组(LET+CC),各10只。除正常组外,其余各组采用来曲唑诱导PCOS小鼠模型,造模成功后,连续给药14 d后,称重后麻醉处死小鼠取血,分离卵巢组织,观察小鼠体质量、卵巢质量、计算卵巢质量指数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和雄激素(T)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中C/EBPβ的表达。结果:经滋肾清热利湿化瘀方治疗后,小鼠体质量、卵巢质量和卵巢质量指数降低(P<0.05或P<0.01);血清中LH及T水平显著降低,FSH水平显著升高(P<0.05,P<0.01或P<0.001);C/EBPβ蛋白表达水平增加(P<0.05)。结论:滋肾清热利湿化瘀方能够平衡性激素水平有效治疗PCOS小鼠,可能与促进C/EBPβ信号有关。

滋肾清热利湿化瘀方对多囊卵巢综合征小鼠C/EBPβ-STAT3信号通路的调节作用

目的:探讨滋肾清热利湿化瘀方(简称滋肾方)治疗多囊卵巢综合征(PCOS)可能机制。方法:将40只C57BL/6J小鼠随机分为4组:正常组、模型组、滋肾方组及枸橼酸氯米芬组,每组10只。除正常组外,其余各组来曲唑(LET)诱导PCOS模型,滋肾方组给予11.8 g·kg^(-1)·d^(-1)滋肾方,枸橼酸氯米芬组给予1 mg·kg^(-1)·d^(-1)枸橼酸氯米芬,正常组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,持续14 d。观察记录小鼠阴道动情周期及体质量;测量卵巢质量,计算卵巢质量指数;HE染色法进行卵巢组织病理学观察,并对黄体及囊性卵泡数量进行统计;ELISA法检测小鼠血清中促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、白细胞介素(IL)-6、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western Blot法检测转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、信号转导和转录活化因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果:与模型组比较,经滋肾方干预后小鼠体质量增长率、卵巢质量、卵巢质量指数和囊性卵泡数量有不同程度下降(P<0.05,P<0.01),黄体数量显著升高(P<0.01);LH、LH/FSH、T、IL-6及TNF-α水平显著下降(P<0.01),FSH和IL-10水平显著上升(P<0.01);C/EBPβ蛋白表达量显著上调(P<0.01),p-STAT3/STAT3蛋白表达量显著下调(P<0.01)。结论:滋肾方能有效改善LET诱导的PCOS小鼠炎症损伤,可能是通过C/EBPβ-STAT3信号通路实现的。

滋肾清热利湿化瘀方对肾阴虚型多囊卵巢综合征患者自主排卵月经的影响

目的评估滋肾清热利湿化瘀方对多囊卵巢综合征(PCOS)女性患者的自主排卵月经的影响。方法将50例PCOS患者按随机数表法分为中药组和安慰组,每组各25例。中药组服用滋肾清热利湿化瘀方颗粒剂,安慰组服用安慰颗粒剂。观察两组患者治疗3个月后自主排卵、毛发及痤疮评分、血清性激素及糖脂代谢指标变化。结果经过3个月治疗后,共有48例患者(中药组25例,安慰组23例)完成了试验。中药组发生月自主排卵率[44.00%(33/75)]显著高于安慰组[17.39%(12/69),X^(2)=29.50,P<0.01]。与本组治疗前比较,中药组治疗后痤疮评分及血清睾酮(T)水平均有降低(P<0.01),且中药组降幅大于安慰组(P<0.05)。两组毛发评分(FG)、血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、LH/FSH及空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、餐后2 h血糖(2 hPG)、餐后2 h胰岛素(2 hINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论滋肾清热利湿化瘀方能有效提高PCOS患者自主排卵率及有排卵月经的发生率,并能改善痤疮及降低血清睾酮水平。