滋肾通络方功效单元对CIA小鼠CD4^+T细胞miRNAs表达的差异调控作用

目的:分析滋肾通络方(ZTF)不同功效单元调控CIA小鼠CD4^+细胞中miRNAs表达的差异。方法:建立小鼠胶原性关节炎(CIA)模型,随机分为模型组、阳性药组、滋肾养阴组、祛风除湿组、化痰祛瘀组和全方组,另取4只小鼠作正常对照组。连续给药4周,末次给药1 h后,分选脾脏CD4^+T细胞,检测miRNAs表达。结果:CIA小鼠CD4^+T细胞中出现部分miRNAs表达的上调或下调。滋肾养阴单元主要上调Let-7g-5p,下调miR-27b-3p、miR-155-5p;祛风除湿单元主要上调miR-26b-5p和miR-143-3p;化痰祛瘀单元主要上调miR-26b-5p,下调miR-27b-3p;全方组的调控作用最明显。结论:ZTF各功效单元可以靶向CD4^+T细胞中不同miRNAs,产生协同/增强/叠加效应,从而在类风湿关节炎中发挥整体调节作用。

滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β_1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。

滋肾通络方对局灶性脑缺血大鼠脑组织脑源性神经营养因子蛋白含量的影响

目的观察滋肾通络方对MCAO大鼠脑组织脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor,BDNF)蛋白含量的变化,以探讨BDNF在脑缺血中的意义及滋肾通络方对缺血周围区神经细胞损伤修复的作用。方法制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组。灌胃20天后,取大鼠脑组织,用免疫组织化学法检测各组BDNF的蛋白表达。结果假手术组海马区几乎见不到BDNF阳性细胞表达;模型组切片染色增强,阳性细胞略有表达;西药组、中药低剂量组及高剂量组均见到切片染色强,BDNF阳性细胞强表达,尤以中药高剂量组阳性细胞表达最强。结论 BDNF与损伤后神经元的修复作用有关。滋肾通络方可通过调节BDNF的合成,促进神经细胞的存活和损伤修复,从而减轻缺血性脑损伤。

滋肾通络方对MCAO大鼠脑组织氨基酸递质含量的影响

目的:观察滋肾通络方对大脑中动脉闭塞MCAO大鼠脑组织氨基酸递质含量的影响。方法:制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组。灌胃20天后,取大鼠脑组织,匀浆,取上清液,用氨基酸分析仪检测各组Asp、Glu、Gly的含量。结果:模型组Asp、Glu、Gly的含量均升高,用药组的Asp、Glu、Gly的含量均降低,且中药组的下降趋势优于西药组。结论:滋肾通络方可降低兴奋性氨基酸的含量,从而对脑缺血损伤具有保护作用。

滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的:从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制。方法:体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-[4,5-dimethylthylthiazol-2-yl]-2,5diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况。结果:与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖。结论:高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。

滋肾通络方对MCAO大鼠代谢性谷氨酸受体1α基因表达的影响

目的:观察滋肾络通络方对MCAO大鼠脑组织代谢性谷氨酸受体1α(mGluR1α)基因表达的变化,以探讨mGluR1α在脑缺血中的意义及滋肾通络方对其影响。方法:制作ΜCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组。灌胃20天后,取大鼠脑组织,用免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和HE染色检测各组mGluR1α的蛋白表达、mRNA转录水平及坏死神经元的计数。结果:各缺血组mGluR1α表达均高于假手术组,药物治疗组mGluR1α的mRNA转录均低于模型组,且中药高剂量组mGluR1α蛋白表达低于西药组。结论:脑缺血可引起mGluR1α表达上调,提示mGluR1α参与介导了局灶性脑缺血损伤。滋肾通络方可降低mGluR1α的蛋白表达,从而对脑缺血损伤具有保护作用。

滋肾通络方对MCAO大鼠神经行为及颅脑CT的影响

目的：观察滋’肾通络方对MCAO大鼠颅脑CT的影响。方法：制作MCAO大鼠模型，随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组。灌胃前后，分别行颅脑CT扫描并观察大鼠神经行为评分的变化，比较药物对其影响。结果：中药高、低剂量组、西药组大鼠颅脑CT缺血程度及神经行为评分均好于模型组；中药高、低剂量组缺血程度及神经行为评分好于西药组。结论：滋肾通络方可改善MCAO大鼠脑缺血程度及神经行为评分，从而对脑缺血损伤具有保护作用。

滋肾通络方对MCAO大鼠血清(血浆)NO/ET-1含量的影响

目的:观察滋肾通络方对MCAO大鼠血清(血浆)NO/ET-1含量的影响。方法:制作MCAO大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组。灌胃20天后,大鼠腹主静脉取血,分别以化学法和放射免疫法测定血清NO、血浆ET-1值,并计算NO/ET-1比值。结果:滋肾通络方可明显升高模型大鼠血清NO含量,降低大鼠血浆ET-1含量,提高NO/ET-1的比值。结论:滋肾通络方通过改善受损内皮的功能,调节血管活性物质的分泌和释放,以调节血管紧张度、增加局部血流量,恢复血管的自稳态。

滋肾通络方对胶原性关节炎小鼠Th17/Treg细胞分化及平衡的影响

目的观察滋肾通络方(ZTF)对胶原性关节炎(CIA)小鼠Th17/Treg细胞分化平衡的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法 DBA/1小鼠随机分为正常对照组、模型组和ZTF组(8.4 g生药·kg^(-1)),造模21 d后每日灌胃给药,连续4周。检测关节炎指数、关节病理改变、血浆IL-10和IL-17水平、外周血和脾脏Th17/Treg细胞比例、CD4^+T细胞IL-10、IL-17 mRNA水平。结果 CIA小鼠踝关节病变明显,血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4^+T细胞IL-17 mRNA表达明显升高;血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4^+T细胞IL-10 mRNA表达明显降低。ZTF能明显减轻CIA小鼠关节病变,降低血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4^+T细胞IL-17 mRNA表达;升高血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4^+T细胞IL-10 mRNA水平。结论 CIA小鼠存在Th17/Treg细胞失平衡,ZTF可调节Th17/Treg细胞比例,重构Th17/Treg细胞平衡,调节相关细胞因子释放,这可能是ZTF治疗类风湿关节炎的机制之一。

滋肾通络方干预小鼠Th17细胞分化和活性的作用研究

目的观察滋肾通络方(ZTF)对小鼠Th17细胞分化和活性的干预作用,探讨其抗类风湿关节炎的可能机制。方法制备ZTF冻干粉及含药血清,磁珠分选法提取C57BL/6小鼠脾细胞中的CD4^+T细胞进行体外培养,采用CCK-8法筛选ZTF冻干粉及含药血清对CD4^+T细胞活力影响的最佳浓度;另取体外培养的CD4^+T细胞,随机分为空白对照组、ZTF冻干粉0.5、1、2 mg/mL组、普通大鼠血清对照组、ZTF含药血清5%、10%、15%浓度组。ELISA法检测细胞上清IL-17含量;q-PCR检测IL-17、维甲酸相关核孤儿受体γt(ROR-γt)mRNA表达水平。结果与对照组比较,ZTF冻干粉各剂量组和含药血清10%、15%浓度组细胞上清IL-17水平降低(P<0.05),ZTF冻干粉2 mg/mL组及含药血清各浓度组IL-17 mRNA水平降低(P<0.05),同时ZTF冻干粉1、2 mg/mL组及含药血清不同浓度组细胞ROR-γt mRNA水平降低(P<0.05)。结论ZTF冻干粉及其含药血清均可抑制Th17细胞的分化和活性,提示其活性成分具有对Th17细胞的直接干预作用,这可能是其防治类风湿关节炎的机制之一。

滋阴补肾活血通络方治疗2型糖尿病周围神经病变30例临床观察

目的探讨中西医结合治疗2型糖尿病周围神经病变的疗效。方法将60例患2型糖尿病并发周围神经病变辩证为肾阴虚血瘀证的患者随机分为治疗组和观察组。在饮食控制和降糖药物治疗的基础上,治疗组采用滋阴补肾活血通络方配合弥可保进行治疗。结果治疗组总有效率86.67%,对照组总有效率63.33%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论中药配合维生素B12治疗2型糖尿病周围神经病变有较好效果。