滋阴温阳序贯方对卵巢功能减退动物模型的调节作用

目的探寻滋阴温阳序贯方对卵巢功能减退动物模型的调节作用。方法将有规律动情周期SPF级SD健康雌性大鼠按照随机数法分为正常对照组、模型组、滋阴温阳序贯方药组(中药组)和西药组,共4组,每组8只。除模型组外均予雷公藤多甙片75 mg/kg混悬液2 mL,每日1次,灌胃,连续14 d,建立卵巢功能减退动物模型。西药组给予戊酸雌二醇片按0.09 mg/kg灌胃给药,中药组给予滋阴温阳序贯方药按10 mL/kg灌胃给药,每天灌胃给药1次,连续2周。分别于给药第1天、第7天和第14天检测卵巢系数变化。采用ELISA法检测大鼠血清促卵泡成熟激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))和抗缪勒管激素(AMH)的水平;HE检测卵巢组织病理学变化;通过免疫组织化学方法和免疫印迹(Western blot)手段检测IGF-1和SCF的蛋白表达情况。结果给药第14天,大鼠卵巢病理变化,与对照组比较,模型组小鼠各级卵泡数量减少,颗粒细胞完整度破坏;与模型组比较,西药组和中药组小鼠卵巢内可见新生卵泡,颗粒细胞层数增加。卵巢系数比较,西药组和中药组较对照组低,较模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E_(2)与AMH含量比较,西药组和中药组较模型组显著升高(P<0.05)。FSH和LH浓度含量比较,西药组和中药组较模型组显著降低(P<0.05)。西药组和中药组IGF-1表达量显著高于模型组(P<0.05);SCF表达量显著低于模型组(P<0.05)。结论滋阴温阳序贯方可以通过增加卵巢系数、卵泡数量和质量、改善激素分泌和细胞因子表达,进而改善卵巢功能。

通络益肾方及其拆方对高糖诱导足细胞自噬及凋亡的干预研究

目的 观察通络益肾方及其拆方滋阴温阳方、解毒通络方含药血清对高糖刺激足细胞自噬及凋亡的影响,研究该方能否提高足细胞自噬水平,抑制足细胞凋亡。方法 足细胞常规培养达一定密度,随机分为:正常组、高糖组、通络益肾方组、解毒通络方组、滋阴温阳方组、甘露醇高渗组。按照各组培养条件培养48 h后分别采用透射电镜观察足细胞线粒体超微结构及自噬体改变,AnnexinV-/PI双染检测足细胞凋亡率,免疫印迹检测自噬蛋白Txnip、mTOR、Beclin-1及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化。结果 电镜下可看到与高糖组相比,通络益肾方组、解毒通络方组、滋阴温阳方组线粒体损伤减轻,肿胀减轻,空泡减少,内部可见不同程度自噬体形成。高糖干预后足细胞凋亡率升高,而通络益肾方、解毒通络方、滋阴温阳方含药血清干预后足细胞凋亡减少差异有统计学意义,(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹结果显示通络益肾方组、解毒通络方组、滋阴温阳方组足细胞Txnip、mTOR、Bax蛋白表达降低,Beclin-1、Bcl-2蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 通络益肾方及其拆方能提高足细胞自噬水平,保护足细胞,降低凋亡率。

高效液相色谱法同时测定滋阴温阳活血膏方中的三种成分

目的:建立同时测定滋阴温阳活血膏方中的三种成分且准确、高效的质量评价方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,以方中君药熟地黄和臣药山茱萸所含成分毛蕊花糖苷、齐墩果酸和熊果酸为指标,使用Agilent ZORABAX SB C18色谱柱(5μm,250×4.6mm),乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长214nm,柱温25℃,共测定了10批采用不同批次药材制备的滋阴温阳活血膏方。结果:含量测定结果显示,10批供试品中,毛蕊花糖苷的含量为5.620~7.058mg/g,齐墩果酸的含量为4.255~5.552mg/g,熊果酸的含量为4.396~5.977mg/g。结论:本研究所建立方面准确、全面、高效,能够适用于对滋阴温阳活血膏方进行质量评价。

颗粒与饮片浸膏制备的滋阴温阳活血膏方临床用量一致性研究

目的:通过测定指标性成分含量,比较配方颗粒和全方药材浸膏制备的滋阴温阳活血膏方的临床等效用量之间的差异。方法:含量测定采用高效液相色谱(HPLC)法,使用Phenomex Kinetex C_(18)色谱柱(4. 6mm×250mm,5μm),0. 1%磷酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1. 0ml/min,柱温30℃,进样量10μl,检测波长254nm;以腺苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷为指标性成分,共测定颗粒和浸膏配制的膏方各10批。结果:10批样品中,1g颗粒制备的膏方相当于0. 957～1. 043g浸膏制备的膏方,二者差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:使用配方颗粒可以替代药材浸膏作为制作膏方的材料。