姜黄素对LPS诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响

目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化的影响。方法 0、5、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素作用小鼠滑膜成纤维细胞24 h, MTT法检测细胞增殖情况,筛选最佳作用浓度。将细胞分为对照组、模型组(10μg/mL LPS)、姜黄素组(20μmol/L)、SB-431542组(100μmol/L)和姜黄素+SB-431542组(20μmol/L+100μmol/L)。ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-6水平,Western blot法检测COL1A1、TIMP1、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组和SB-431542组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达降低(P<0.05);与SB-431542组比较,姜黄素+SB-431542组滑膜成纤维细胞IL-1β、TNF-α、IL-6水平,以及COL1A1、TIMP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 姜黄素通过抑制TGF-β1/Smad信号通路,从而抑制LPS诱导小鼠滑膜成纤维细胞炎症和纤维化。

新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。

独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

背景:独活寄生汤是治疗类风湿关节炎的经典方剂,但具体作用机制尚不清楚,细胞外囊泡具有细胞间通讯及传递信号的强大功能,可能是该方剂发挥作用的信号载体。目的:探讨独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:肿瘤坏死因子α体外诱导构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,实验分为5组:正常组、模型组、独活寄生汤含药血清组、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡组、生理盐水血清细胞外囊泡组。采用CCK-8法筛选独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳浓度及时间;ELISA检测细胞上清炎症因子水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力及迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;qRT-PCR及Western blot检测细胞凋亡相关基因及蛋白表达。结果与结论:(1)独活寄生汤含药血清作用的最佳体积分数为10%,独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳质量浓度为10 ng/mL,二者作用的最佳时间均为24 h;(2)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均能抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的炎症因子表达(P<0.05)、划痕愈合(P<0.05)、迁移及侵袭(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡的抑制作用更为突出(P<0.05);(3)独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡均可促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡;(4)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均可增加促凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax表达(P<0.05),降低抑凋亡因子Bcl-2表达(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对凋亡相关因子的调节作用更显著。上述实验结果表明独活寄生汤含药血清细胞外囊泡可以抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的过度增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡。

滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖含量的高效液相色谱法测定

目的建立一种快速、准确测定滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖含量的高效液相色谱法。方法采用乙腈萃取-超声-离心的方法提取滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖;SB-C18色谱柱分离,乙腈(10 mmol/L)∶戊烷磺酸钠(10∶90)做流动相,柱温常温,流速0.8 mL/min,检测波长192 nm。结果该方法在0.5~2.5 mg/mL浓度范围内具有良好的线性关系(r>0.999);滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖检出限为0.11 mg/mL;定量限为0.23 mg/mL;回收率为88.7%~95.4%。结论该方法简便、快速、灵敏,是一种检测滑膜成纤维细胞中盐酸氨基葡萄糖含量的优良方法。

低强度脉冲超声通过p38/JNK-白细胞介素-6抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖的研究

目的:探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(fibroblastlike synoviocytes in rheumatoid arthritis,RA-FLS)异常细胞表型的抑制作用及可能机制。方法:酶消化法分离滑膜细胞,显微镜下观察细胞形态,同时用免疫荧光检测Vimentin蛋白表达来鉴定RA-FLS。将细胞进行体外培养并分为4组:对照组、LIPUS组、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)组和TNF-α+LIPUS组或3组:对照组、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)组和IL-6+LIPUS组。CCK8和EDU实验分别检测LIPUS对RA-FLS细胞活性和增殖的作用,划痕实验和Transwell迁移实验观察LIPUS对RA-FLS迁移能力的影响,RT-q PCR检测RA-FLS中重要的细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的基因表达,ELISA进一步检测LIPUS对RA-FLS中关键效应分子IL-6蛋白水平的作用,Western Blot检测LIPUS对RAFLS中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响。结果:分离得到较纯净的RA-FLS。在体外培养的RA-FLS中,首先,LIPUS可以抑制TNF-α诱导的细胞活性(P<0.001)和增殖(P=0.007),但它对其迁移及迁移相关MMPs(MMP2和MMP9)转录水平的作用在组间无显著性差异(P>0.05)。在TNF-α诱导的炎性环境下,LIPUS能够抑制IL-6和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)在m RNA水平上的高表达(P<0.001),但其对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、MMP1和MMP13的抑制作用在组间无显著性差异(P>0.05)。与未处理组相比,LIPUS抑制TNF-α诱导的RA-FLS中IL-6的分泌(P<0.001),同时也抑制IL-6诱导的RA-FLS增殖(P=0.003)。LIPUS能够抑制MAPK信号通路中p38 MAPK(P=0.033)的磷酸化和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化(P=0.019),但其对细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signalregulated kinas 1/2,ERK1/2)蛋白的磷酸化则无显著作用(P>0.05)。结论:LIPUS能够减少炎性状态下RA-FLS的异常增殖而不作用于其迁移,该作用可能与p38/JNK-IL-6信号通路的抑制有关。

湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭

目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂量(25 mg/L)PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量(25 mg/L)PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低(P<0.05),划痕愈合面积显著减小(P<0.01),迁移和侵袭至下室的细胞显著减少(P<0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01)。与高剂量PHSTF组相比,PI3K激动剂740Y-P显著提高了PHSTF处理下MH7A细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),也使得MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01)。结论:PHSTF能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制MH7A细胞迁移和侵袭。

siRNA沉默锌指蛋白A20基因促进人类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞焦亡

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默锌指蛋白A20基因对人类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(HFLS-RA)焦亡的调节作用。方法培养人HFLS-RA细胞系(MH7A细胞),通过RNA干扰技术靶向敲降人类A20基因,合成siRNA-A20,用脂质体法将siRNA-A20(沉默组)和siRNA-NC(阴性对照组)转染MH7A细胞。RT-qPCR检测细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA的表达;Western blot法检测细胞中NLRP3和Caspase-1蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的水平;透射电子显微镜(TEM)检测细胞焦亡。结果siRNA-A20组MH7A细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平与对照组相比均显著增高(P<0.01);siRNA-A20组细胞培养上清液中IL-1β、IL-18浓度与对照组相比均显著增高(P<0.01)。与对照组相比,siRNA-A20组部分细胞肿胀和破裂,细胞膜的完整性也丧失,细胞内出现大面积水肿区,细胞核局部核膜凹陷模糊,异染色质固缩增加,分布不均匀并在核膜周围聚集。结论通过siRNA沉默A20表达后可促进HFLS-RA中NLRP3/Caspase-1介导细胞焦亡,为探讨RA临床治疗新方案提供了实验依据。

温阳通络方基于miR-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的机制研究

目的:探讨温阳通络方基于微小RNA(miR)-26b-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的作用。方法:SD大鼠随机分为温阳通络方组和空白血清组。温阳通络方组大鼠给药剂量为4.05 g·kg^(-1)·d^(–1),2次/d,间隔12 h,连续给药3 d,末次给药后1 h腹主动脉取血分离血清;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验筛选温阳通络方含药血清最佳浓度和干预时间;在人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A中分别转染inhibitor NC、miR-26b-3p inhibitor、mimic NC、miR-26b-3p mimic片段,并用温阳通络方含药血清干预,设置正常关节成纤维样滑膜细胞为对照组,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测MH7A细胞中miR-26b-3p的表达;CCK-8实验检测各组细胞的增殖情况;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭情况。结果:不同浓度温阳通络方含药血清均能上调miR-26b-3p的表达(P<0.05),miR-26b-3p的表达呈浓度依赖性升高。温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。miR-26b-3p过表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05);干扰miR-26b-3p的表达后,MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。在干扰miR-26b-3p表达的基础上,温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:温阳通络方通过上调miR-26b-3p的表达抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭。

环状RNA_0032131靶向微小RNA-145-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状RNA_003213(hsa_circ_003213)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响。方法检测RA患者和健康体检者外周血、RA-FLSs、人正常滑膜成纤维细胞中hsa_circ_0032131和miR-145-5p的水平。将RA-FLSs分为对照(NC)组、si-NC组、si-hsa_circ_0032131组、miR-NC组、miR-145-5p组、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组、anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组、pcDNA组、pcDNA-hsa_circ_0032131组。采用CCK-8和Transwell法检测RA-FLSs活力、迁移和侵袭数。通过双荧光素酶报告实验确定hsa_circ_0032131与miR-145-5p的靶向关系。结果与健康体检者相比,RA患者外周血中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与人正常滑膜成纤维细胞相比,RA-FLSs中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-145-5p组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组比较,anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0032131组RA-FLSs中miR-145-5p水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-145-5p是hsa_circ_0032131的直接靶点。结论敲低hsa_circ_0032131通过上调miR-145-5p抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。

四妙散对肩周炎患者成纤维细胞样滑膜细胞形态学的影响及促凋亡机制研究

目的:探究四妙散对肩周炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(Fibroblast-like Synoviocytes,FLS)形态学的影响及促凋亡机制。方法:取不同浓度的四妙散溶液(10、20、40μg/mL)刺激FLS细胞,设置0μg/mL的空白对照组,各组培养24、48、72 h,采用四甲基偶氮唑蓝法检测各组刺激后的FLS细胞变化情况,评估四妙散溶液对细胞增殖的抑制作用,采用倒置显微镜观察培养48 h各组细胞的形态学变化情况,采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-Diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色法观察各组FLS细胞凋亡情况,并采用Western blot检测各组促凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(B-cell lymphoma-2-Associated X protein,Bax)、抗凋亡蛋白髓细胞白血病因子(Myeloid Cell Leukemia 1,Mcl-1)的表达情况。结果:四妙散溶液在10~40μg/mL的浓度范围内可有效降低FLS细胞的存活率,且呈现时间和浓度依赖性(P<0.05);倒置显微镜下观察可见空白对照组的FLS细胞生长状态良好,随着四妙散溶液浓度的增加,细胞表面有棕褐色絮状物质形成,细胞增殖受到抑制,细胞密度随四妙散溶液浓度上升而降低(P<0.05);DAPI染色下空白对照组细胞核均匀淡染,胞膜完整,随着四妙散溶液浓度增加细胞膜通透性增加,细胞核固缩形态增加且有细胞核碎裂;随着四妙散溶液浓度的增加,Bax水平上调,Mcl-1水平下降,均呈现出浓度依赖性(P<0.05)。结论:四妙散溶液能够显著降低肩周炎患者FLS细胞的存活率,有一定的时间和浓度依赖性,作用机制可能是通过调节促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Mcl-1的表达来实现的。

沉默PGRN基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨沉默颗粒蛋白前体(PGRN)基因对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:按照脂质体法将siRNA PGRN、siRNA NC转染至RA滑膜成纤维细胞MH7A,记为siRNA NC组、siRNA PGRN组,对照组(Control)未进行转染处理;将siRNA PGRN转染RA滑膜成纤维细胞MH7A后,加入丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路激活剂Anisomycin,记为siRNA PGRN+Anisomycin组。采用qRT-PCR检测各组细胞PGRN mRNA表达水平;噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡变化;Western blot检测各组细胞PGRN、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、MAPK通路蛋白表达。结果:与Control组、siRNA NC组相比,siRNA PGRN组内PGRN mRNA及蛋白表达、克隆形成率、存活率明显降低,凋亡率明显升高,Cyclin D1、PCNA、Bcl-2、p-p38 MAPK蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加。与siRNA PGRN组相比,siRNA PGRN+Anisomycin组内p-p38 MAPK、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达增加,克隆形成率、存活率明显增加,Bax蛋白表达、凋亡率明显降低。结论:沉默PGRN能抑制RA滑膜成纤维细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与MAPK信号通路有关。

巴多昔芬治疗小鼠胶原诱导性关节炎的疗效及对滑膜成纤维细胞的影响

目的探究巴多昔芬(BAZ)对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用和对MH7A滑膜成纤维细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用牛Ⅱ型胶原诱导(CIA)DBA/1小鼠类风湿性关节炎模型,通过关节炎评分、测量后足厚度等方法评价BAZ对小鼠关节炎的治疗作用,采用苏木精伊红和番固红绿染色检测小鼠关节病理变化,采用micro-CT进一步验证BAZ对关节骨破坏的影响。采用CCK-8法、平板克隆实验、细胞划痕实验和Transwell小室的方法考察BAZ对MH7A细胞的存活、增殖、迁移和侵袭的影响。结果BAZ能显著地降低关节炎评分,减轻后足肿胀;病理切片显示,BAZ能显著减少滑膜炎、血管翳、软骨侵袭和骨质破坏;BAZ与gp130抑制剂SC144均可有效抑制MH7A细胞的增殖,降低MH7A细胞迁移和侵袭能力。结论BAZ对小鼠胶原诱导性关节炎有较好治疗作用,其作用可能与抑制滑膜成纤维细胞增殖、侵袭和迁移有关。

电针调控lncRNA NEAT1减轻类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症反应的研究

目的:观察电针对调控lncRNA NEAT1减轻类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞炎症反应的影响。方法:将16只2月龄大鼠应用随机数字表法分为空白对照组和电针组,每组8只。空白对照组大鼠未接受干预,电针组大鼠予以电针干预,分别制备空白对照组、电针组血清。予以连续酶消化法获取3周龄SD大鼠滑膜成纤维细胞,波形蛋白免疫组化染色进行鉴定;再将6孔板中已培养的滑膜成纤维细胞随机分为空白对照组、模型对照组、电针组成纤维细胞。空白对照组成纤维细胞予以空白对照组血清干预,模型对照组成纤维细胞予以含10 ng·mL^(-1)白细胞介素-1β(IL-1β)的空白对照组血清诱导滑膜成纤维细胞致炎,电针组成纤维细胞予以含10 ng·mL^(-1)IL-1β的电针组血清干预。Real-time PCR检测各组滑膜成纤维细胞中lncRNA NEAT1水平变化;Western blot检测各组滑膜成纤维细胞基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达含量。结果:经波形蛋白免疫组化染色后,大鼠滑膜成纤维细胞波形蛋白染色为阳性,证实成纤维细胞提取成功。与空白对照组比较,模型对照组中lncRNA NEAT1的相对表达水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,电针组中lncRNA NEAT1相对表达水平显著降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型对照组比较,电针组MMP-3、RELA、TNF-α蛋白表达含量显著降低(P<0.05)。结论:电针可通过调控lncRNA NEAT1减轻类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞炎症反应。

苦参碱对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的研究苦参碱对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs)增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响。方法分别采用MTT法、Transwell小室法检测不同浓度苦参碱对的影响RASFs增殖、侵袭;RT-PCR检测苦参碱对RASFs基质金属蛋白酶3(matrix metallo proteinase 3,MMP-3)、TNF-α及IL-1β表达的影响;Western blot法检测苦参碱对RASFs中NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果增殖实验结果表明苦参碱可剂量依赖性抑制RASFs的增殖;细胞侵袭结果表明它可显著抑制RASFs的侵袭;苦参碱可下调MMP-3、TNF-α及IL-1β的表达水平,同时它可抑制NF-κB p65的表达水平。结论苦参碱通过NF-κB信号通路抑制MMP-3、TNF-α及IL-1β的表达,进而抑制RASFs增殖、侵袭。

壮骨健膝方对脂多糖诱导兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响

目的探讨壮骨健膝方对兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响及作用机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激兔滑膜成纤维细胞(FLS)建立炎症模型,筛选壮骨健膝方干预炎症模型的最佳条件(浓度10%,时间48h)后,采用随机数字表法随机分为空白组、模型组和壮骨健膝方组,分别给予相应条件干预后采用ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,qPCR法检测各组细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、增殖细胞核抗原(PCNA)、IκBα、NF-κB p65 mRNA表达,Western blot法检测各组细胞中PCNA、核因子κB抑制因子α(IκBα)及核内核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达。结果与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α、IL-6含量,IL-1β、TNF-α、IL-6、PCNA、NF-κB p65 mRNA及核内NF-κB p65蛋白表达均显著升高(P均<0.05),IκBαmRNA及蛋白表达显著降低(P均<0.05);与模型组比较,壮骨健膝方组IL-1β、TNF-α、IL-6含量,IL-1β、TNF-α、IL-6、PCNA、NF-κB p65 mRNA及核内NF-κB p65蛋白表达均显著降低(P均<0.05),IκBαmRNA及蛋白表达显著升高(P均<0.05)。结论壮骨健膝方可减轻LPS诱导的兔FLS炎症反应并能抑制FLS的过度增殖,从而发挥“除痹”功效,其部分作用机制与抑制兔FLS细胞中NF-κB信号通路激活有关。

miR-142-3P靶向ADAM17对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞活性的影响及其作用机制研究

目的:研究微小R-142-3P(miR-142-3P)靶向解聚素金属蛋白酶17(ADAM17)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)活性的影响及其作用机制。方法:购买12份类风湿关节炎-外周血单个核细胞(RA-PBMC),随机分为4个RA-PBMC组,每组3份,3份正常人外周血单个核细胞(PBMC)记为正常PBMC组,采用Western blot法检测检查RA-PBMC、正常PBMC中ADAM17表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测RA-PBMC、正常PBMC中miR-142-3P表达情况,检测过度表达ADAM17和miR-142-3P的RA-PBMC对RA-FLS凋亡及增值的影响。结果:RA-PBMC组中ADAM17水平低于正常PBMC组(P<0.05),RA-PBMC组中miR-142-3P水平高于正常PBMC组(P<0.05);过度miR-142-3P组RA-FLS凋亡率高于空白对照组,RA-FLS增殖活性低于空白对照组(P<0.05);过度ADAM17组RA-FLS凋亡率低于空白对照组,RA-FLS增殖活性高于空白对照组(P<0.05)。结论:RA-PBMC中ADAM17呈低表达状态,miR-142-3P呈高表达状态,miR-142-3P与RA-FLS活性呈负相关,ADAM17与RA-FLS活性呈正相关。

三七总皂苷抑制人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系增殖和促凋亡

目的:探讨三七总皂苷对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的的影响及可能机制。方法:MH7A细胞用不同剂量(0.5、1.0、2.0mg/mL)三七总皂苷干预细胞24h后,CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测蛋白(Ki-67、PCNA、E-cadherin和N-cadherin)的表达,qRT-PCR法检测miR-335-5p表达。转染miR-335-5p模拟物、转染miR-335-5p抑制剂至MH7A细胞后再用2.0mg/mL三七总皂苷干预24h,然后采用上述相同方法检测细胞增殖、迁移和侵袭。结果:与对照组比较,三七总皂苷降低MH7A细胞A值、划痕愈合率、侵袭数及Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达量(P<0.05),而提高细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达量(P<0.05),同时促进细胞中miR-335-5p表达(P<0.05)。上调miR-335-5p后,MH7A细胞A值、划痕愈合率、侵袭数及Ki-67、PCNA和N-cadherin蛋白表达量均降低(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达量升高(P<0.05)。下调miR-335-5p逆转了三七总皂苷对MH7A细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:三七总皂苷可能通过上调miR-335-5p抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。

circ_0005276靶向miR-557调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨circ_0005276靶向miR-557对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR检测circ_0005276和miR-557在CIA大鼠滑膜组织中的表达。将si-circ_0005276、si-NC、pcDNA、pcDNA-circ_0005276、miR-NC、miR-557模拟物、si-circ_0005276+anti-miR-NC、si-circ_0005276+anti-miR-557分别转染RA-FLS,CCK-8、划痕愈合、Transwell实验用于检测RA-FLS的活力、划痕愈合率以及侵袭数。双荧光素酶报告验证circ_0005276和miR-557的靶向关系。结果与正常组滑膜组织比较,CIA大鼠滑膜组织中circ_0005276表达上调(P<0.05),miR-557表达下调(P<0.05)。干扰circ_0005276后RA-FLS的光密度(OD)值、划痕愈合率、侵袭数显著降低(P<0.05),miR-557表达升高(P<0.05)。过表达circ_0005276后RA-FLS中miR-557表达显著降低(P<0.05)。过表达miR-557后RA-FLS的OD值、划痕愈合率、侵袭数显著降低(P<0.05)。下调miR-557表达显著减弱了干扰circ_0005276表达对RA-FLS的OD值、划痕愈合率和侵袭数的影响(P<0.05)。结论干扰circ_0005276可通过靶向促进miR-557表达,从而抑制RA-FLS增殖、迁移和侵袭。

circPTPRA靶向miR-140-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移的机制研究

目的:探讨circPTPRA对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移的影响及其对miR-140-5p的调控作用。方法:原代分离培养人正常滑膜成纤维细胞与类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分为NC组(不转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-circPTPRA组(转染si-circPTPRA)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-140-5p组(转染miR-140-5p mimics)、anti-miR-NC+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-NC和si-circPTPRA)、anti-miR-140-5p+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-140-5p和si-circPTPRA)。qRT-PCR检测circPTPRA与miR-140-5p的表达量;MTT实验检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移;双荧光素酶报告基因实验检测circPTPRA与miR-140-5p的靶向关系。结果:与正常滑膜成纤维细胞比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中circPTPRA的表达量升高,miR-140-5p的表达量降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-circPTPRA组细胞活力降低,迁移细胞数减少(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-140-5p组细胞活力降低,迁移细胞数减少(P<0.01);circPTPRA可靶向调控miR-140-5p;与anti-miR-NC+si-circPTPRA组比较,anti-miR-140-5p+si-circPTPRA组细胞活力升高,迁移细胞数增多(P<0.01)。结论:干扰circPTPRA表达可通过靶向调控miR-140-5p的表达而抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移。

CircSERPINE2靶向miR-23a-3p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨CircSERPINE2对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:选取于武汉市第四医院就诊的44例RA患者和健康体检者的外周血,培养滑膜成纤维细胞(FLSs)和RA滑膜成纤维细胞(RA-FLSs),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CircSERPINE2和miR-23a-3p表达水平;将RA-FLSs随机分为NC组、pcDNACircSERPINE2组、pcDNA组、anti-miR-23a-3p组、anti-miR-NC组、miR-23a-3p+pcDNA-CircSERPINE2组、miR-NC+pcDNA-CircSERPINE2组;CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移数和侵袭数;双荧光素酶报告实验检测CircSERPINE2和miR-23a-3p的靶向关系。结果:RA患者外周血中CircSERPINE2表达水平低于健康体检者,而miR-23a-3p表达水平高于健康体检者(P<0.05)。与FLSs比较,RA-FLSs中CircSERPINE2表达水平降低,而miR-23a-3p表达水平升高(P<0.05)。过表达CircSERPINE2或抑制miR-23a-3p表达,细胞活性降低,迁移和侵袭细胞数减少(P<0.05)。CircSERPINE2靶向调控miR-23a-3p。miR-23a-3p过表达可逆转CircSERPINE2过表达对RA-FLSs的影响。结论:CircSERPINE2过表达可通过靶向调控miR-23a-3p抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。