类风湿性关节炎灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞γ-干扰素影响的初步研究

目的观察类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞IFN-γ水平的影响。方法抽取RA患者膝关节液分离滑膜液细胞,分实验组：2.0×10^6/mL非灭活滑膜液细胞,分别与2.0×10^5/mL、4.0×10^4/mL、2.0×10^4/mL甲醛灭活后的滑膜液细胞（灭活滑膜液细胞比非灭活滑膜液细胞为1：10、1：50、1：100）混合培养;对照组：单独培养细胞数为2.0×106/mL的非灭活滑膜液细胞。37℃,5%CO_2条件下培养48 h后,ELISA法测定炎症因子IFN-γ水平。结果（1）实验组较对照组IFN-γ水平明显降低（P〈0.05）;（2）实验组各组间比较,灭活滑膜液细胞比非灭活滑膜液细胞为1：10组较1：50组及1：100组相比较IFN-γ水平显著降低（P〈0.05）。1：50组同1：100组IFN-γ水平无显著性差异（P〉0.05）。结论（1）灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞IFN-γ的分泌具有抑制作用;（2）灭活滑膜液细胞比非灭活滑膜液细胞为1：10时,抑制IFN-γ分泌的作用最强;（3）灭活滑膜液细胞可抑制非灭活滑膜液的IFN-γ分泌,其机制有待进一步研究。

类风湿关节炎灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞TNF-α、IL-1β和IFN-γ分泌的影响

目的观察类风湿关节炎(RA)灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细TNF-α、IL-1β与IFN-γ分泌的影响。方法随机选择RA患者20例,抽取RA患者膝关节液,应用Ficoll梯度离心法分离滑膜液细胞。实验组:细胞数为2×106/mL,非灭活滑膜液细胞加灭活后的滑膜液细胞按10∶1混合培养;对照组:细胞数为2×106/mL的非灭活滑膜液细胞单纯培养。两组均用10%FCS-RPMI 1640培养液,37℃,5%CO2条件下培养48 h后,用ELISA法分别测定TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平。结果实验组较对照组的细胞生长、TNF-α、IL-1β与IFN-γ水平均明显降低(P<0.05)。结论未经克隆选择的RA灭活滑膜液细胞对非灭活滑膜液细胞的细胞生长、TNF-α、IL-1β与IFN-γ的分泌具有抑制作用,未经克隆选择的类风湿关节炎灭活滑膜液细胞有潜在的临床应用价值。

类风湿性关节炎滑液刺激T细胞表达GADD45β机制的研究

目的研究GADD45β在类风湿性关节炎病灶局部组织细胞中的表达、与炎症因子间的关系以及对Th1细胞活化的作用,以探讨GADD45β在RA等自身免疫病发病机制中的作用。方法用Real-Time PCR检测RA患者滑膜组织单个核细胞(SFMC)、滑膜液单个核细胞(STMC)和外周血单个核细胞(PBMC)以及SFMC、PBMC中CD4/CD8+T细胞(磁珠法分离)中GADD45β的表达格局;用RA患者滑膜液(RA SF)刺激体外培养的健康人PBMC,用Real-Time PCR检测GADD45β和IFN-γ mRNA表达情况;SiRNA感染GADD45β基因表达。流式细胞仪检测T细胞亚群。ELISA检测细胞因子。结果RA SFMC中GADD45β的表达水平明显高于其STMC和PBMC及健康人PBMC,且以SF中浸润的CD4+T细胞为主;RA SF可以上调健康人PBMC(主要是CD4+T细胞)中GADD45β和IFN-γ表达;用SiRNA干扰GADD45β基因转录后IFN-γ分泌减少。结论GADD45β在RA患者滑膜组织和滑液单个核细胞中表达明显上调,并且参与SF刺激的T细胞产生IFN-γ。

类风湿关节炎患者CD14+HLA-DR-MDSC细胞的变化及临床意义

本研究旨在探讨类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达特征,分析类风湿关节炎患者CD14+ HLA-DR- MDSC细胞的变化及临床意义。方法 选取31例类风湿关节炎患者为样本,采用流式细胞仪检测其表达情况,并设置正常对照组。结果 研究结果表明,与正常对照组相比,风湿关节炎患者关节滑膜液中的B淋巴细胞CD25表达增高,T淋巴细胞与B淋巴细胞的HLA-DR表达也显著升高,差异具有统计学意义,(P<0.05)。结论 由此可以得出结论,关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达特征在类风湿关节炎的发病机制中起着重要作用。

类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞CD_(25)、HLA-DR的表达特征分析

目的对类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞CD_(25)、HLA-DR的表达特征进行分析。方法取我院收治的31例类风湿关节炎患者患者作为研究对象,对其关节滑膜液淋巴细胞CD_(25)、HLA-DR的表达行流式细胞仪检测,设立正常对照组。结果风湿关节炎患者关节滑膜液表达CD_(25)的B淋巴细胞与表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论关节滑膜液淋巴细胞CD_(25)、HLA-DR的表达特征为增高,在类风湿关节炎患者发病机制中有重要作用。

类风湿性关节炎中树突状细胞亚群分析

目的分析类风湿性关节炎患者外周血和关节液中的DC(dendritic cell,DC)亚群以及DC亚群与炎症产生的关系。方法收集来自西南医院体检中心26例健康人外周血作为对照组,来自西南医院风湿免疫科28例RA患者的外周血及滑膜液作为实验组,其中RA患者的外周血和滑膜液来自同一RA患者。采用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离提取对照组和实验组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和滑膜液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cells,SFMCs),流式细胞术检测如下DC亚群:浆细胞样DC(CD123^(+)DC)、髓系DC(CD11c^(+)DC),进一步分析CD11c^(+)DC亚群,CD1c^(+)DC和CD141^(+)DC。结果首先我们分析比较健康人外周血、RA患者外周血和RA患者滑膜液中各DC亚群,结果发现:健康人外周血CD123^(+)DC亚群的比例明显高于RA患者外周血(P<0.0001),而RA患者外周血和滑膜液CD123^(+)DC亚群的比例无显著性差异;而RA患者滑膜液中CD11c^(+)DC亚群占比例明显高于RA患者外周血(P<0.01);进一步对CD11c^(+)的亚群进行分析,结果发现RA患者滑膜液中CD1c^(+)DC所占比例明显高于RA患者外周血(P<0.05);而RA患者滑膜液中CD141^(+)DC亚群所占比例也显著高于RA患者外周血(P<0.001);最后我们分析了RA患者滑膜液中CD11c^(+)、CD1c^(+)以及CD141^(+)DC亚群与RA患者滑膜液中活化CD4^(+)CD45RO^(+)T细胞相关性,结果发现:CD1c^(+)DC的比例与CD4^(+)CD45RO^(+)T细胞比例有显著正相关(P<0.05)。结论RA患者滑膜液中CD11^(+)DC、CD1c^(+)DC和CD141^(+)DC亚群的比例明显高于患者外周血,提示mDC可能在RA的局部炎症中起着比较重要的作用。

GADD45β参与类风湿关节炎发病机制研究(2)-GADD45β介导类风关CD4+T细胞抗凋亡研究

在发现了GADD45β在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)病灶局部组织细胞中、CD4+T细胞表达增高并参与介导IFN-γ产生的基础上,进一步探讨GADD45β参与RA的其他机制。用siRNA干扰人PBMC中GADD45β基因表达。Real-time PCR检测GADD45β和凋亡相关基因的表达格局。用RA患者滑膜液(RA synovial fluid,RA SF)刺激GADD45β基因敲除的健康人PBMC并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果RA患者的SFMC中T细胞凋亡减少。用SF刺激正常人PBMC时细胞凋亡减少。经siRNA干扰后PBMC中GADD45β的表达明显降低,同时细胞凋亡增加。同时检测与凋亡相关基因发现SF刺激后Bcl-2分子在凋亡的细胞中表达明显降低,而Fas-FasL、Bcl-2家族其他分子如Bcl-xl、Bax、Bim等变化不明显。GADD45β参与介导RA的炎症性T细胞凋亡,而Bcl-2分子参与了由GADD45β介导抗凋亡作用,而这一作用与RA患者滑膜液中炎症细胞能够长期存活并介导炎症可能有密切关系。