桂皮醛对miRNA-146a干扰的骨关节炎滑膜炎性反应影响的实验研究

目的:研究miRNA-146a基因及桂皮醛对miRNA-146a干扰的滑膜成纤维细胞释放TLR4、NO、MMP-13的影响,探寻其在OA滑膜炎性反应分子学机制中的作用。方法:采用脂质体转染法将miR-146a基因模拟及抑制性质粒载体对经LPS诱导后的OA滑膜炎性反应效应细胞滑膜成纤维细胞进行基因导入,并用桂皮醛对干扰后的细胞进行干预,检测不同组间TLR4、NO及MMP-13表达的差异。结果:miRNA-146a相关质粒转染后的TLR4、NO、MMP-13浓度的变化趋势大致相同:与对照组比较,三者的inhibitor组均升高,mimics组则均呈下降趋势(P<0.05)。桂皮醛单独作用于miRNA-146a干扰后的细胞时,与对照组比较,TLR4、NO、MMP-13浓度均有明显下降(P<0.05),而当mimics和CA联合干预时,三者释放量显著下降(P<0.05)。结论:miRNA-146a及桂皮醛均对骨关节滑膜炎性反应产生影响,当mimics和桂皮醛联合作用时,抑制炎性反应效果最好。为进一步阐明骨关节炎分子机制和药物靶点的识别与开发提供实验依据。

基于生物信息学鉴定膝关节骨性关节炎滑膜炎性反应的关键基因和通路

目的:筛选和鉴定与膝骨关节炎(KOA)滑膜炎性反应有关的关键基因和通路,并探讨潜在的分子机制。方法:从Cene Expression Omnibus(GEO)数据库下载了两个基因表达数据集(GSE55235和GSE55457),使用RPA和R软件中的sva包对数据进行归一化处理。通过R软件limma包鉴定差异表达基因(DEG),并进行GO和KEGG通路富集分析。并通过STRING数据库构建DEG的蛋白-蛋白交互作用(PPI)网络,并使用Cytoscape软件进行可视化。结果:总共鉴定出279个DEG,其中包括133个上调基因和146个下调基因。GO富集的结果表明,DEG主要位于细胞外,主要参与了“免疫反应”,“细胞黏附”和“炎性反应”等生物学过程。KEGG通路分析表明,DEG主要富集在“类风湿关节炎”,“TNF信号通路”,“破骨细胞分化”和“ECM-受体相互作用”等通路。前30位Hub基因包括白细胞介素(IL)-6、原始原癌基因(JUN)、CXC基序趋化因子配8(CXCL8)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、核因子κB抑制剂α(NFKBIA)、基质金属蛋白酶(MMP)1、MMP9等。在PPI网络中确定了两个模块,并且两个模块中都富集到IL-17信号通路。结论:本研究从生信工具角度分析了KOA滑膜炎性反应中的关键DEG和通路,帮助理解其分子机制及在KOA发病机制和发生、发展过程中的作用,为寻找KOA新的治疗靶点提供思路。

《伤寒论》中不同比例的桂芍配伍对骨关节炎滑膜炎性反应的作用研究

目的:研究《伤寒论》中不同比例的桂芍配伍对骨关节炎(OA)滑膜炎性反应的作用,筛选出该药对抗炎的最佳配伍比例。方法:采用冷冻干燥法将桂枝与白芍单味药及二者在《伤寒论》中不同配伍比例(1∶1、1∶2、5∶3)的水煎剂进行处理,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法确定干预浓度后,分别作用于经脂多糖(LPS)诱导的OA滑膜炎性反应的效应细胞滑膜成纤维细胞,通过流式细胞术测定不同组间细胞表面TLR^2和TLR4的阳性率表达差异、Griess法、Elisa法测定上清液中NO、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)的释放量。结果:桂芍及各配比组对TLR^2、TLR4的阳性表达及NO、IL-1β及TNF-α的释放均低于对照组(P<0.05),配伍组的抑制作用明显强于单味药组(P<0.05),其中,桂芍比为5∶3时抑制作用最强。结论:桂芍配伍组对滑膜炎性反应的抑制作用优于单味组,桂芍药对抗炎作用的最佳配伍比例为5∶3。

桂皮醛及白芍总苷对骨关节炎滑膜炎性反应的影响

目的:通过通络止痛方中君药的活性成分桂皮醛(CA)和白芍总苷(TGP)的对滑膜成纤维细胞(FLS)的干预,研究固有免疫系统中TLR2和TLR4及其介导的信号通路的下游产物白介素1β(IL-1β)和基质金属蛋白酶(MMP-13)在骨关节炎滑膜炎性反应中的表达及其相互关系。方法:将高、低浓度的CA和TGP分别对经脂多糖(LPS)活化的FLS进行干预,收集细胞上清采用ELISA法测定IL-1β和MMP-13的浓度;收集细胞采用流式细胞术测定FLS表面TLR2和TLR4的表达,并分析它们之间的相关性。结果:LPS对滑膜炎性反应有显著的诱导活化作用,高、低CA和TGP均可不同程度抑制IL-1β、MMP-13的释放和TLR2、TLR4的表达,其中CA高浓度组抑制作用最强(P<0.05)。TLR2、TLR4、IL-1β、MMP-13之间均存在显著的正相关性,具体为:TLR2与TLR4(r=0.862,P<0.05),IL-1β与MMP-13(r=0.994,P<0.05),TLR2与IL-1β(r=0.754,P<0.05),TLR2与MMP-13(r=0.717,P<0.05),TLR4与IL-1β(r=0.929,P<0.05),TLR4与MMP-13(r=0.929,P<0.05)。结论:CA和TGP在通过调控固有免疫应答进程进而抑制滑膜炎性反应的作用,明确了固有免疫效应网中不同环节的元件的相关性,为中药有效成分作用靶点的探寻及未来防治OA有效方案的制定提供数据支持及新的思路。

前交叉韧带重建术后反应性滑膜炎治疗对策

目的探讨膝关节前交叉韧带(ACL)重建术后反应性滑膜炎的发生原因及治疗策略。方法我科2005年3月-2008年8月关节镜下重建ACL术后发生反应性滑膜炎8例,采用置管灌注冲洗,其中4例行关节镜清理。结果Lysholm膝关节评分(81.6±9.5)分,膝关节活动度(88.8±8.3)°,Lachman试验和前抽屉试验阳性为1例。结论ACL术后反应性滑膜炎,早期采用置管灌注冲洗及关节镜清理疗效满意。

盐酸左氧氟沙星注射液致腕关节滑膜炎1例

患者,男,96岁。因右下肢无力1d入院,体检：患者意识清,语言欠流畅,右下肢肌力3＋级,双上肢肌力5级,T36.3℃,P64次/min,BP122/96 mmHg,无药物过敏史。既往病史：脑梗死后遗症、前列腺增生。临床诊断：脑供血不足。入院后经改善脑循环及其他对症治疗,病情平稳。

热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜组织炎性反应及滑膜细胞坏死性凋亡的影响

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织炎性因子及滑膜细胞坏死性凋亡的影响,探讨热补针法治疗RA的抗炎机制。方法:新西兰家兔按随机数字表法分为正常组、模型组、抑制剂组、捻转补法组、热补针法组,每组8只。采用卵蛋白诱导联合弗氏完全佐剂混合液注射,配合低温冷冻法复制RA寒证模型。抑制剂组予TAK-632(25 mg/kg)灌胃,每2 d治疗1次,共治疗7次;捻转补法组和热补针法组取双侧“足三里”分别施以捻转补法及热补针法操作,均留针30 min, 1次/d,共治疗14次。干预结束后,测量各组家兔膝关节皮温、周径;彩色多普勒超声观察各组家兔膝关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号;HE染色法观察各组家兔膝关节滑膜组织病理形态学变化;ELISA法检测各组家兔血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6含量;透射电镜法观察各组家兔膝关节滑膜细胞超微结构及坏死情况;Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织受体相互作用蛋白(RIPK)1、RIPK3、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化(p)-MLKL的表达。结果:与正常组比较,模型组家兔膝关节皮温明显降低(P<0.01),周径明显增大(P<0.01),彩色多普勒超声示滑膜弥漫性增生,关节腔积液及异常血流信号明显;HE染色示滑膜细胞明显增生,大量炎性细胞簇集,且排列紊乱;血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高(P<0.01);透射电镜示细胞膜完整性破坏,线粒体肿胀甚则破裂呈空泡样,细胞核破裂明显,染色质、核仁显著凝聚固缩;膝关节滑膜组织RIPK1、RIPK3、p-MLKL及MLKL蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,抑制剂组、捻转补法组、热补针法组膝关节皮温均升高,周径均缩小(P<0.01,P<0.05);滑膜组织增生、关节腔积液及异常血流信号不同程度减轻;滑膜细胞增生、炎性细胞浸润不同程度减轻;血清TNF-α、IL-1β及IL-6含量降低(P<0.01,P<0.05);细胞膜结构破坏及线粒体肿胀、破裂、核固缩不同程度减轻;滑膜组织RIPK1、RIPK3、p-MLKL及MLKL蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。与捻转补法组比较,抑制剂组和热补针法组各指标变化更明显(P<0.01,P<0.05)。结论:热补针法能减轻RA寒证家兔膝关节滑膜炎性反应,其机制可能与抑制滑膜细胞坏死性凋亡有关。

电针对类风湿性关节炎大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB信号通路的影响

目的:观察电针对类风湿性关节炎(RA)大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB(TACE/NF-κB)的影响,探讨电针抗RA的可能机制。方法 :SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和非穴位组,每组10只,采用皮内注射牛Ⅱ型胶原诱发RA模型。电针组电针"足三里""悬钟"和"肾俞"穴,1次/d,共19d。非穴位组取穴位外侧旁开5mm进行针刺,方法与电针组相同。Westergren法检测血浆红细胞沉降率(ESR),速率散射比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)和类风湿因子(RF),免疫印迹法检测膝关节滑膜组织TACE及NF-κB蛋白含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠血浆ESR、血清CRP和RF显著升高,膝关节滑膜组织中TACE及NF-κB蛋白表达增加(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠ESR、CRP和RF显著降低,膝关节滑膜组织中TACE及NF-κB蛋白表达均降低(P<0.05);非穴位组与模型组比较,各项指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针能有效调节RA大鼠关节炎性损伤状况,降低RA大鼠膝关节滑膜组织中的TACE及NF-κB蛋白表达,这可能是电针通过调节TACE/NF-κB改善RA的信号调节机制之一。

热补针法对类风湿关节炎寒证模型家兔血清炎性因子及膝关节滑膜组织自噬的影响

目的:观察热补针法对类风湿性关节炎(RA)寒证模型家兔血清炎性因子及膝关节滑膜组织自噬的影响,探讨热补针法治疗RA的抗炎机制。方法:清洁级新西兰家兔随机分为正常组、模型组、热补针法组、抑制剂组和激动剂组,每组10只。采用弗氏佐剂、卵蛋白混合溶液注射联合低温冷冻+风寒湿法建立RA寒证模型。热补针法组予“足三里”施热补针法干预,留针30 min, 1次/d,干预14 d;抑制剂组和激动剂组分别腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(1.9 mg/kg)和自噬激动剂雷帕霉素(2.5 mg/kg),隔日1次,共7次。测量各组家兔膝关节周径、皮肤温度;用彩色多普勒超声检查家兔膝关节滑膜厚度、关节腔积液及内部血流信号;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6及C反应蛋白(CRP)含量;透射电镜观察滑膜细胞超微形态结构及自噬小体;Western blot法检测滑膜组织自噬相关蛋白Atg5、Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)及Beclin-1的表达水平;荧光定量PCR法检测滑膜组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、核因子-κB(NF-κB)mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组家兔膝关节周径显著增大(P<0.01),皮肤温度明显降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6及CRP含量升高(P<0.01),滑膜组织Atg5、ULK1、Beclin-1蛋白表达水平及LC3BⅡ/LC3BⅠ显著降低(P<0.01),NLRP3、 NF-κB mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组、抑制剂组比较,热补针法组及激动剂组膝关节周径缩小(P<0.01),皮肤温度升高(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6及CRP含量降低(P<0.01),滑膜组织Atg5、ULK1、Beclin-1表达水平及LC3BⅡ/LC3BⅠ升高(P<0.01),NLRP3、NF-κB mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。正常组家兔关节滑膜光滑平整,无关节腔积液及异常血流信号,滑膜细胞核染色致密均匀,核膜光滑完整;模型组滑膜增厚、血流信号丰富,关节囊积液明显,滑膜细胞核染色质固缩,核膜模糊残缺,偶见自噬小体;热补针法组及激动剂组滑膜变薄、血流信号减弱,滑膜细胞核染色固缩不明显,细胞核膜较清晰,可见吞噬泡及自噬小体;抑制剂组上述改善均不明显。结论:热补针法能显著缓解RA寒证模型家兔膝关节滑膜炎性反应,其机制可能与增强滑膜细胞自噬活性,抑制炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及CRP的合成与释放有关。