祛痹方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管生成调控因子的影响

目的:从滑膜新生血管生成的角度,部分揭示祛痹方治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法:选用雄性SD大鼠,随机选取12只作为空白对照组,其余60只采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂的方法制作胶原诱导性关节炎(CIA)模型。15d后将CIA大鼠随机分为模型组、雷公藤多苷组、祛痹方高、低剂量组,随即灌胃给药,1次/d,连续4周。采用免疫组化的方法检测大鼠膝关节滑膜组织中fins样酪氨酸激酶(FLT-4)和胎肝激酶受体(FLK-1)的变化。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠FLK-1、FLT-4明显升高(P<0.01);雷公藤多苷组和祛痹方高剂量组FLK-1、FLT-4水平较模型组明显降低(P<0.01),且祛痹方高剂量组FLK-1较雷公藤多苷组明显降低(P<0.05)。结论:祛痹方治疗RA的功效与抑制新生血管生成相关。

中药抑制类风湿性关节炎滑膜血管生成研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎症为主的慢性、多发性、全身性自身免疫性疾病,血管生成在RA的发病机制中起着至关重要的作用。新形成的血管可将炎症细胞运送至滑膜炎症部位维持慢性炎症,并为滑膜血管提供营养和氧气,导致滑膜炎症、增生和进行性骨破坏。因此,通过靶向滑膜血管生成的疗法有望成为治疗RA的新趋势。近几年,中医药通过抑制滑膜血管生成治疗RA的研究成为热点。研究表明,多种中药及其成分、中成药及复方通过调节缺氧诱导因子(HIF)、血管内皮生长因子(VEGF)等细胞因子,改善RA滑膜病理性血管生成。因此,应用中药干预RA早期滑膜病理性血管生成为临床早期提供了一种新的、有效的诊疗方法,具有广阔的发展前景。

通痹灵对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子表达水平的影响

[目的]观察通痹灵对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节滑膜组织炎症和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响,以探讨通痹灵治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机理。[方法]大鼠尾根部皮下注射Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型,分组给药治疗.给药37d后处死动物,对动物膝关节滑膜组织病理切片后分别常规HE染色和免疫组化染色。对HE染色切片用显微镜观察炎症细胞浸润、巨噬细胞增生和纤维增生情况,对免疫组化染色切片观察血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞情况以了解各组动物关节滑膜VEGF的表达水平。[结果]HE染色切片显示通痹灵高剂量组滑膜炎症细胞浸润、巨噬样A型细胞增生和纤维组织增生的程度均比模型组低(P<0.05或P<0.01),并与正常组相仿(P>0.05)。免疫组化染色切片显示通痹灵和雷公藤高剂量组均能降低滑膜VEGF表达水平(P<0.05)。[结论]通痹灵有改善大鼠关节滑膜炎症,抑制滑膜VEGF表达作用,这可能是通痹灵治疗关节炎取得临床疗效的机理之一。

骨关节炎滑膜组织中缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子的表达

目的比较骨关节炎、急性创伤性关节炎、正常人滑膜组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,了解其在骨关节炎滑膜病变中的作用。方法取骨关节炎患者滑膜、急性半月板或交叉韧带损伤患者滑膜、正常人滑膜组织共60例,应用免疫组织化学技术进行HIF-1α、VEGF染色,分析它们在3组病例中的表达差异及相关关系。结果 HIF-1α及VEGF在正常人滑膜中几乎未见阳性表达,急性创伤性滑膜炎组表达率分别为60%、48%,骨关节炎组表达率分别为86.7%、80%,骨关节炎组表达较急性创伤性滑膜炎组为高,差异具有显著性(P<0.05),HIF-1α与VEGF在急性创伤性滑膜炎、骨关节炎组均成正相关,相关系数分别为0.666、0.678。结论 HIF-1α、VEGF在骨关节滑膜组织中表达明显高于急性创伤性滑膜炎组,它们在滑膜炎滑膜组织中表达具有相关性,共同促进骨关节炎发病。

S100A4在类风湿关节炎滑膜中的表达及其对成纤维样滑膜细胞分泌VEGF促进血管生成的影响

目的:研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者和正常人膝关节滑膜中的表达水平,以及S100A4对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RAFLSs)促进血管生成的影响。方法:滑膜分别取自RA患者(RA组)及正常人(control组)膝关节,免疫组化法观察S100A4和VEGF蛋白在2组滑膜中的表达情况。RAFLSs分离自活动性RA滑膜;ELISA法检测S100A4刺激RAFLSs分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的作用;用rh S100A4孵育RAFLSs的条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),检测S100A4体外血管生成能力。结果:S100A4及VEGF蛋白在RA组滑膜中高表达(P<0.05),rh S100A4显著刺激RAFLSs分泌VEGF,呈时间和剂量依赖性(P<0.05);rh S100A4孵育RAFLSs的条件培养基可促进HUVECs在体外形成管腔。结论:S100A4蛋白在RA患者膝关节滑膜中高表达,S100A4可通过促进RAFLSs分泌VEGF来刺激滑膜血管生成。这些结果提示S100A4可作为治疗RA的潜在靶点。

通痹灵对类风湿关节炎滑膜细胞血管内皮生长因子mRNA的影响

目的观察通痹灵对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养。空白对照组:含生理盐水+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵低剂量组:50mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵高剂量组:200mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGFmRNA的表达。结果通痹灵高、低剂量组VEGFmRNA表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论通痹灵可以下调RA患者滑膜细胞VEGFmRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。

类风湿关节炎滑膜血管生成和血管翳

血管翳的形成是类风湿关节炎(RA)的重要病理过程,是引起关节病变、软骨破坏的主要原因及病理基础,而滑膜血管增生是血管翳形成的主要病理特点。本文从滑膜血管生成过程及其影响因素以及以滑膜血管或血管翳为靶标的RA治疗策略3个方面进行了初步的阐述,以期为RA临床的防治研究提供思路和参考。

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子与微血管密度

背景:目前发现的促进血管增生活性最强的是血管内皮生长因子,其在类风湿关节炎滑膜细胞呈现强表达。目的:观察对胶原诱导性关节炎大鼠不同时间点滑膜血管内皮生长因子表达和微血管计数的变化,探讨血管内皮生长因子和微血管在类风湿关节炎发病机制中的作用及其相关性。方法:采用Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎模型,采用免疫组织化学方法观察实验性关节炎大鼠不同时间点滑膜组织血管内皮生长因子的表达水平和新生血管计数,并同时观察发病时间与关节炎指数积分、血管内皮生长因子及滑膜新生血管数之间的关系。用直线相关分析法分析血管内皮生长因子表达与滑膜新生血管数之间的关系,用等级相关分析法分析关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达及滑膜新生血管数之间的关系。结果与结论:随着实验性关节炎发病时间的延长,滑膜新生血管逐渐增多,滑膜增厚,关节炎指数积分逐渐增加,血管内皮生长因子表达水平和微血管数也随之升高;其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平呈正相关关系(r=0.535、P<0.05),血管内皮生长因子表达水平与微血管计数呈显著正相关关系(r=0.860,P<0.01)。血管内皮生长因子参与了实验性关节炎大鼠滑膜血管翳的形成过程,血管内皮生长因子与微血管密度在类风湿关节炎的发病中具有重要意义。

兔骨关节炎滑膜组织血管内皮生长因子mRNA表达及透明质酸钠的影响

背景:骨关节炎的发病机制目前还未完全清楚,研究发现血管内皮生长因子参与骨关节炎的发生发展。目的:观察血管内皮生长因子在滑膜组织表达的改变及透明质酸钠对滑膜血管内皮生长因子基因表达的影响。方法:24只大耳白兔随机正常对照组、生理盐水组和透明质酸钠组行单膝前交叉韧带切断术,4周后生理盐水组关节腔注射生理盐水0.3mL,透明质酸钠组注射等量的高分子量10g/L透明质酸钠,1次/周,连续5周。第10周处死动物,比较各组股骨内髁关节软骨的大体变化,采用实时定量聚合酶链反应方法检测滑膜VEGFmRNA的表达水平。结果与结论:大体评分显示生理盐水组软骨退变的程度明显重于正常对照组和透明质酸钠组(P<0.05);生理盐水组滑膜血管内皮生长因子mRNA表达较正常组显著下降(P<0.05),透明质酸钠组滑膜血管内皮生长因子mRNA表达较生理盐水组有升高,但比正常对照组低(P<0.05)。结果表明,滑膜组织血管内皮生长因子表达下降可能参与透明质酸钠的发生发展,关节腔注射透明质酸钠对透明质酸钠滑膜组织血管内皮生长因子表达有上调作用,有利于滑膜组织修复,可能是其治疗透明质酸钠机制之一。

沙利度胺联合化疗在急性白血病患者中的临床疗效及对血管生成调控因子的影响研究

目的探讨沙利度胺联合化疗在急性白血病患者中的临床治疗效果及对血管生成调控因子的影响。方法选取2013年4月-2014年4月收治的40例急性白血病患者。根据不同治疗方案将其分为对照组和试验组各20例。对照组采用常规化疗治疗,试验组同时口服沙利度胺,治疗前及治疗8周采集外周血进行血浆VEGF、b FGF水平检测,分析两组疗效。结果两组治疗前血浆VEGF以及b FGF等指标差异不显著（P〉0.05）;试验组治疗后VEGF指标,显著低于对照组（P〈0.05）;试验组治疗后b FGF指标显著高于对照组（P〈0.05）;试验组不良反应发生对照组相比差异不显著（P〈0.05）。结论白血病患者在常规化疗基础上联合沙利度胺治疗效果理想,通过抑制机体内血浆VEGF及受体表达发挥抗白血病作用,值得推广使用。

胚胎着床过程中血管生成相关因子的表达及其调控

血管生成(angiogenesis)主要在雌性生殖器官中发生,在其它器官和组织中则很少见。许多血管生成相关因子参与血管生成。在哺乳动物的胚胎着床过程中,胚胎着床位点处子宫内膜的血管通透性发生变化,随后进行蜕膜化及胎盘形成,以利于胎儿进一步发育,这些过程均与血管生成相关。本文综述了近年来关于血管内皮生长因子等血管生成因子在着床过程中的表达、调节以及作用机制。

痹肿消汤对关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子表达水平及关节症状的影响(英文)

目的:观察痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子(vscularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达水平的影响,探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法:75只SD大鼠按随机数字表法分为4组(正常对照组,模型对照组,甲氨蝶呤治疗组,痹肿消汤治疗组),皮下注射Ⅱ胶原诱导实验性关节炎模型,用免疫组化法检测各组不同时间点大鼠滑膜组织VEGF的表达,同时采用关节指数积分法评价其关节炎症状。结果:免疫大鼠88.57%出现关节炎症状;模型组的关节炎指数逐渐增加,而痹肿消汤组和甲氨蝶呤组关节炎指数则在35d后逐渐下降。正常组滑膜组织未见明显VEGF表达,模型组VEGF表达犤(30.6±6.2)%于25d起就明显高于痹肿消汤组犤(16.2±4.4)%犦(P<0.001)和甲氨蝶呤组犤(24.4±3.6)%犦(P<0.001);随着时间的延长,模型组VEG表达逐渐升高,痹肿消汤组与甲氨蝶呤组的VEGF表达逐渐降低,于45d模型组更明显高于痹肿消汤组(P<0.001)和甲氨蝶呤组(P0.001),且痹肿消汤组又低于甲氨蝶呤组(P<0.001)。结论:VEGF参与了RA疾病滑膜炎的形成和发展过程;其VEGF表达的高低与关节炎症状的轻重有关。痹肿消汤可能通过阻断VEGF的表达来阻抑关节炎滑膜血管翳的形成或骨质侵袭。

血管内皮生长因子对佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:观察血管内皮生长因子对佐剂性关节炎滑膜细胞质金属蛋白酶3及质金属蛋白酶9表达的影响,并探讨其意义。方法:实验于2006-02/12在桂林医学院实验中心完成。①实验材料:清洁级8周龄雄性Wistar大鼠6只,血管内皮生长因子为Peprotech EC LTD公司产品,基质金属蛋白酶3(扩增369bp)上游引物、下游引物,基质金属蛋白酶9(扩增405bp)上游引物、下游引物均购自晶美公司。②实验干预:先用弗氏完全佐剂造Wistar大鼠模型;造模20d后取Wistar大鼠右后足滑膜细胞进行原代培养。③实验分组:实验分为血管内皮生长因子组:取P2代细胞接种于6孔培养板,分别加入终浓度为5,25,50μg/L血管内皮生长因子;对照组:不加血管内皮生长因子。④实验评估:取病理切片观察滑膜细胞形态学改变;采用半定量反转录聚合酶链反应检测Wistar大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9的m-RNA表达。结果:①培养细胞的形态学观察:原代培养14d滑膜细胞从组织块边缘逸出,21d密集生长开始传代;传代细胞48h可明显分辨出树突样细胞、巨噬细胞样细胞和成纤维细胞样细胞;传至21代,细胞生长及特性稳定。②病理切片:滑膜组织有中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润,滑膜细胞增生、排列紊乱,纤维素渗出,胶原纤维沉着,纤维素样坏死,呈滑膜炎表现。③基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9的mRNA表达:对照组基质金属蛋白酶3mRNA表达相对灰度值与血管内皮生长因子终浓度5,25,50μg/L组比较,差异有显著性意义(0.32±0.03,0.77±0.06,1.12±0.12,1.59±0.02,P<0.05);对照组基质金属蛋白酶9mRNA表达相对灰度值与血管内皮生长因子终浓度5,25,50μg/L组比较,差异有显著性意义(0.47±0.07,0.50±0.10,0.91±0.10,1.31±0.06,P<0.05);基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9mRNA表达随血管内皮生长因子浓度的加大表达增加。结论:血管内皮生长因子以剂量递增的方式对体外培养的佐剂性关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶9的表达有促进作用。

胶质瘤血管生成拟态调控因子的研究进展

胶质瘤血管生成拟态目前为国内外研究的热点,胶质瘤血管生成拟态的发生与发展改变肿瘤微环境。胶质瘤血管生成拟态还参与肿瘤侵袭与患者的预后。本文章将阐释多种因子,如血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶、钙粘素、组织因子通路途径抑制物、迁移诱导蛋白、缺氧诱导因子等对于血管生成拟态的影响机制及研究进展做一综述。

甲状腺转录因子-1对鸡胚尿囊膜血管生成的实验研究

目的研究甲状腺转录因子-1(TTF1)对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的影响。方法利用CAM模型,60枚新鲜种蛋随机分为3组:PBS组,25μg/mlTTF1组,50μg/mlTTF1组,每组20只。种蛋消毒后,放入37.8℃恒温箱内孵育6d,暴露尿囊膜,将含有待测品的滤纸放在尿囊膜血管较少部位,继续孵育2d,以滤纸为中心,把膜剪下,固定,拍照并记录各组CAM血管生长及血管数目情况。结果 PBS组CAM血管及其网络清晰可见,生长良好;给药组血管数目较PBS组明显减少,血管结构模糊,颜色变浅、苍白。结论 TTF1对CAM血管生成有明显的抑制作用。

乳腺癌前病变血管生成及调控因子VEGF、FLK表达与中医辨证相关性研究

目的:探讨乳腺癌前病变阶段中医辨证与血管生成及相关调控因子的相关性,健全乳腺癌前病变中医微观辨证指标。方法:对60例乳腺增生、乳腺癌和乳腺癌前病变高危患者进行辨证分型,观察中医证候分布与病理分布、血管生成及调控因子VEGF、FLK表达的相关性。结果:乳腺癌前病变患者辨证主要集中于痰瘀互结(偏肝郁气滞、冲任失调)型,辨证分型与血管生成及调控因子有相关性,癌前病变阶段MVD、VEGF、FLK表达呈显著性增高,且随癌前病变病理分级的递进呈增高趋势。结论:MVD、VEGF、FLK从新生血管角度上能客观反映乳腺癌前病变阶段辨证规律和病机演变特点,可作为临床辨证微观指标。

缺氧诱导因子-1与脑膜瘤血管生成

缺氧诱导因子1是细胞在缺氧条件下产生的具有转录活性的核蛋白,由α亚单位和β亚单位构成,其中α亚单位被认为是特异性氧调节亚单位,决定了HIF1的活性。大量研究发现HIF1是肿瘤血管生成信号途径的关键性上游转录调控因子,通过影响其他血管生长因子的表达,而直接参与血管生成的全程。脑膜瘤是常见的颅内肿瘤,多呈实体性且血供丰富,在颅内呈膨胀性或侵袭性生长,其发生、发展与血管生成密切相关。深入研究HIF1在脑膜瘤中的表达及其对血管生成的调控可能为脑膜瘤的治疗发现新方法。

血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β_1在骨关节炎滑膜组织中的表达及相关性

背景:血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1都是与骨关节炎关系比较密切的合成及分解类细胞因子家族,在骨关节炎组织中表达情况的报道多限于软骨细胞及基质方面,且报道结果并不完全一致,对滑膜组织研究尚不深入。目的:进一步了解血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1在骨关节炎滑膜组织中的表达及相关性。设计、时间及地点:细胞分子生物学体外实验,2003-01/2004-09在滨州医学院附属淄博市中心医院分子生物学实验室完成。对象:选取符合骨关节炎诊断标准并经辅检证实的患者的滑膜病理标本30例;非正常死亡及创伤性截肢的健康国人滑膜标本8例为正常对照。方法:所有滑膜标本进行免疫组织化学染色,常规脱蜡至水,先后加入过氧化酶阻断溶液及正常羊血清孵育,并依次加一抗、生物素标记二抗、链亲和素-过氧化物酶溶液及DAB溶液,其间均充分水洗,苏木精复染封固观察。对照实验采用替代实验,用PBS替代一抗,余步骤同上述实验方法。主要观察指标:血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1在滑膜组织中的表达情况及其相关性。结果:血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1的阳性表达率分别为86.7%和13.3%,与正常组织比较,转化生长因子β1表达率降低(P<0.05),血管内皮细胞生长因子表达率增高(P<0.05)。血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1表达的相关性有显著性意义(rs=0.373,0.01<P<0.05)。结论:血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1在骨关节滑膜组织中的表达有相关性。血管内皮细胞生长因子和转化生长因子β1的改变是骨关节炎发生、发展的重要介导因素。

IL-6R抗体调节PMMA骨水泥介导的滑膜成纤维细胞MMPs和血管化因子mRNA表达

目的探讨IL-6R抗体对PMMA骨水泥介导的滑膜成纤维细胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA表达的调节。方法从全髋关节置换术中获取滑膜组织消化并传代培养。倒置相差显微镜对滑膜细胞进行形态学观察,免疫细胞化学(SABC法)染色对滑膜成纤维细胞进行鉴定。根据加入不同培养物,实验分为3组:PMMA组:75μg/mL PMMA骨水泥颗粒;IL-6R抗体组:10 ng/mL IL-6R抗体+75μg/mL PMMA骨水泥颗粒;空白对照组。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测IL-6R抗体、PMMA对滑膜成纤维细胞增殖活力影响;实时荧光定量PCR(real timefluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测MMP-1、MMP-3、VEGF和PDGF mRNA表达。结果原代滑膜细胞贴壁后,初期为短梭形。连续3次传代后,95%以上细胞为长梭形成纤维细胞样细胞。SABC法染色检测结果显示:上述成纤维样细胞抗CD68抗体阴性,抗vimentin抗体呈棕黄色,为阳性反应。CCK-8检测显示:与PMMA组和空白对照组相比,IL-6R抗体组吸光度(A)值明显降低(P<0.01);而空白对照组与PMMA组间吸光度(A)值无统计学差异(P>0.05)。FQ-PCR检测发现:与PMMA组和空白对照组相比,IL-6R抗体组中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF mRNA的表达明显受到抑制(P<0.01);PMMA组中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGF表达较空白对照组升高(P<0.05)。结论 IL-6R抗体能显著抑制滑膜成纤维细胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGFmRNA的表达,为生物制剂预防和治疗假体无菌性松动提供分子生物学的理论依据。

幼年类风湿性关节炎滑膜组织血管形成相关因子表达的分析

目的:以幼年类风湿性关节炎增生滑膜组织为研究对象,探讨血管形成相关因子在其病理过程中的作用。方法:采用RPA(RNaseprotectionassay)方法检测多种血管形成相关因子的表达。结果:多种血管形成因子在类风湿性关节炎滑膜组织中均有较高的表达。结论:滑膜组织血管翳形成与多种血管形成因子相关,其中endoglin(CD105)的表达是一种特征性标志,滑膜成纤维细胞是血管形成因子的主要来源之一。