亚洲玉米螟滞育关联蛋白的分离和纯化

用 6 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,在亚洲玉米螟Ostriniafurnacalis河南种群滞育幼虫血淋巴中发现了 2种滞育关联蛋白 ,它们的等电点分别为 5 3和 4 7;而在亚洲玉米螟上海种群滞育幼虫血淋巴中发现了 1种滞育关联蛋白 ,等电点为 4 7。亚洲玉米螟河南种群滞育关联蛋白仅在滞育幼虫血淋巴中存在。亚洲玉米螟上海种群滞育关联蛋白在滞育和非滞育幼虫血淋巴中均存在 ,只是它们在滞育幼虫血淋巴中的含量明显高于非滞育幼虫血淋巴中的含量。用 30 %～ 5 0 %丙酮沉淀、Seph aDexG 10 0凝胶过滤和MONOQRH 5 5阴离子交换快速液相法 ,纯化到了高纯度 (≥ 98%)亚洲玉米螟上海种群滞育幼虫血淋巴中的滞育关联蛋白。

昆虫滞育及滞育关联蛋白

昆虫属于变温动物,其生命活动受环境条件的影响,极端的高温或低温影响其正常生活,同时也威胁昆虫种和个体的生命维持,在漫长的进化过程中,昆虫对环境条件的不断适应和环境对昆虫个体的选择,最终出现了昆虫滞育的特性.滞育对昆虫种的延续有两方面的意义,一是度过不良环境,维持种和个体生存;二是为了群体发育齐一,增强雌雄个体间交配的机会,以利产生更多的后代,保证种的繁衍,如热带昆虫发生滞育,并不是因为低温寒冷,主要为了保证群体发育一致,主动停止发育[4].

眼斑芫菁卵滞育条件及滞育关联蛋白

探讨眼斑芫菁(Mylabris cichorii Linnaeus)滞育条件以及分析滞育卵中的差异表达蛋白。该研究以不同温度和光周期处理眼斑芫菁成虫和卵,观察卵滞育和滞育解除的条件,采用SDS-PAGE电泳分析眼斑芫菁滞育卵中的滞育关联蛋白。结果显示:短光照可诱导眼斑芫菁成虫产滞育卵,在28℃条件下其滞育临界光周期在L11∶D13与L10∶D14之间(每天光照10～11 h);滞育卵胚胎发育至萼片腹节期后进入滞育,10℃低温处理10 d可有效解除卵的滞育;滞育卵中分离出分子量为8.0×104左右的滞育关联蛋白,而且分子量为4.5×104和2.3×104的蛋白质表达也显著上调。表明影响眼斑芫菁滞育的关键因素是亲代成虫所处的光周期。

柞蚕滞育关联蛋白基因dap2的表达特征及分子特性

滞育关联蛋白(DAP)在昆虫滞育进程中可能发挥重要作用。从NCBI获取柞蚕滞育关联蛋白基因2(Antheraea pernyi diapause-associated protein 2,dap2)的序列,序列分析表明该基因的cDNA全长1 187bp,ORF为874bp,编码278个氨基酸。NCBI数据库氨基酸序列比对,DAP2与烟草天蛾和家蚕的眼色素结合蛋白(omminbinding protein,OBP)同源性分别达到57%和58%。通过荧光定量PCR和Western blotting方法,分别检测柞蚕不同发育时期和五龄幼虫不同组织中dap2的转录表达水平,结果表明dap2在滞育蛹中转录和表达水平最高;在5龄幼虫不同组织中的分析表明其转录水平在脂肪体和血淋巴中最高,在翻译水平上血淋巴中表达最高。分离纯化后,对天然DAP2蛋白分子特性进行初步研究,吸收光谱分析不能表明其携带色素,去糖基化修饰分析表明其为糖蛋白,双向电泳表明其可能存在三种不同程度的翻译后修饰,推测其可能是柞蚕的一种眼色素结合蛋白(ommin-binding protein,OBP)。