香蕉茎尖滴冻法保存中细胞的超微结构变化

应用透射电镜研究了香蕉茎尖滴冻法超低温保存中细胞超微结构的变化规律。结果表明:装载后,细胞液泡化程度降低,出现质壁分离。脱水处理使质壁分离程度加重,原生质体浓缩,一部分细胞的细胞壁、膜系统发生了不可逆的损伤;也有小部分位于分生组织区域的细胞结构虽然发生了变化,但程度不深,在恢复培养时会自动修复,并再生出植株。细胞严重伤害主要发生在脱水处理过程中,冷冻环节基本上不产生新的损伤。讨论了上述变化的可能机制。

应用茎尖滴冻法超低温保存香蕉资源研究(英文)

采用正交试验探讨了滴冻法中装载液处理时间、玻璃化溶液处理时间和过渡培养时间的最优组合：另外还研究了不同冰冻保护剂、茎尖大小、恢复培养基中大量元素浓度对滴冻法保存效果的影响。通过试验筛选出了最佳的滴冻法保存方案：剥取含有1～2个叶原基的茎尖，长约1．5～2．5mm，先在室温下用装载液预处理20～120min．再用玻璃化溶液PVS2于0℃下处理30～50min，接着将PVS2溶液滴于铝箔上，每个液滴中放一个茎尖，迅速投入液氮。保存1h后，将铝箔取出投入卸载液（Suc．1．2mol·L^-1＋MS）中快速解冻。15min后取出茎尖，用滤纸吸去水分，转入过渡培养基上（Suc 0．3mol^-1＋MS）暗培养24h。再转到恢复培养基上，暗培养1周后转移到光下常规培养。采用滴冻法成功保存了分属于5个基因组型的15份香蕉资源，每种基因组型的平均成活率为：AAA78．0％．AAB57．8％．ABB72．1％，AA43．3％，野生蕉42．2％。

应用改良滴冻法超低温保存两种柿属植物的研究

以君迁子(Diospyros lotus L.)和柿(D.kaki Thunb.)组培苗茎尖为试材,对影响超低温保存效果的主要因素,如低温锻炼方式、预培养条件、PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4mo1/L蔗糖)处理时间等进行了研究。建立了2种柿属植物的超低温保存程序:(1)切取1cm左右试管苗梢段继代到1/2MS(KNO3和NH4NO3减半)培养基中,交替低温[昼(25±1)℃、夜(4±1)℃]锻炼6周;在含0.5mol/L蔗糖的1/2MS培养基上预培养5d,20℃下装载液(2.0mo1/L甘油+0.4mol/L蔗糖)过渡10min,0℃下PVS2处理1.5h;(2)投入液氮保存;(3)40℃水浴化冻,洗涤5～6次后接种于含1.0mg/LTDZ、0.6g/L可溶性PVP、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的培养基(作者在优化柿属植物离体培养体系试验中获得)上暗培养1周,转入25℃,1500lx培养室。按照上述程序培养,‘鄂柿1号’、‘湘西甜柿’和君迁子的成活率分别为79.6%、67.4%和60.9%。