滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

目的建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法。方法以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原,金标记SPA为显色剂,建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法(DIGFA);并以ELISA平行检测比较。结果用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份,其阳性检出率为96.0%,50份正常鼠血清的阴性符合率达100%,DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份,绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份,前二者均为阴性,后者交叉反应率为5.6%;DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清,两法符合率达96.7%。结论DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性,且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点,是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法。

滴金免疫渗滤法快速诊断肺吸虫病的研究

目的寻找一种快速诊断肺吸虫病的方法。方法以肺吸虫成虫浸出液为抗原 ,金标抗人 Ig G为显示剂检测肺吸虫抗体 ( DIGFA)。结果检测肺吸虫病人血清 4 1份 ,阳性符合率为 1 0 0 % ;检测非流行区健康人血清 5 1份 ,流行区健康人血清 30份 ,阴性符合率 1 0 0 % ;检测班氏丝虫病人血清 2 0份 ,均为阴性 ;检测日本血吸虫病人血清 2 0份 ,其中 2例呈阳性。用 DIGFA与 ELISA同时检测肺吸虫病人血清 4 1份 ,非流行区健康人血清 5 1份及流行区健康人血清 30份 ,两种方法的阳性与阴性符合率均为 1 0 0 %。结论 DIGFA检测人体肺吸虫抗体敏感性高 ,特异性强 ,检测时无需特定的仪器 ,操作简便、快速 ,适于基层单位和现场应用。

滴金免疫渗滤法在检测抗结核抗体中的应用

活动性肺结核的及时诊断和治疗,对控制结核病的发展和阻断传播有十分重要意义。目前诊断该病的方法很多,但均存在不足之处。痰菌检查虽可确诊病人,但其灵敏度低,检出率仅在30%左右;培养法费时且不经济,不能满足临床急需;BACTEC技术虽可缩短时间,然而受昂贵的设备条件限制;X线胸片只能提供可能的诊断;PCR技术为结核病诊断提供了广阔的应用前景,但其临床和流行病学意义尚待进一步探讨。近年来血清学方法倍受国内外学者关注,由于其快速、简便、不需要特殊仪器,具有明显的优越性。本文采用滴金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration Assay,DIGFA)快速检测抗结核抗体并与常规ELISA比较,取得较为满意的结果,现报道如下。

斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用

目的 将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体 ,以制备囊虫病诊断试剂盒。方法 经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原 ,对 71份囊虫病患者、90份正常人和 2 0份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较。结果 斑点金免疫渗滤法的敏感性为 90 .1% (6 4 / 71) ,特异性为 95 .6 % (86 / 90 ) ,其他病患者血清反应中仅 1例脑肿瘤患者血清阳性 ,其余为阴性。斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94 .4 % (15 2 / 16 1)。

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的 研究应用斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。 方法 采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原 ,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体 ,以颜色深浅为判断阳性标准。 结果 纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应 ,1 0min内即可直接观察结果。在 76份患者血清的检测中 ,阳性率为 94 .74 % ,与ELISA法的检出阳性率 86 .84 %相比差异无显著性 ( χ2 =2 .83,P >0 .0 5)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。

滴金免疫测定法在检测日本血吸虫抗体中的应用

滴金免疫测定法(DIGFA)是以胶体金作为标记物的快速斑点免疫结合试验,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,阳性结果出现红色斑点。本文用血吸虫虫卵浸出液为抗原,金标记A蛋白为显示剂,建立了检测血吸虫抗体的DIG-FA。以本法检测血吸虫病患者血清81份,阳性卒92.6％;献血者血清50份,特异性为98％;42份产前检查的孕妇血清均为阴性;6例华枝睾吸虫患者未出现交叉反应;6例并殖吸虫患者中4例出现不同程度的阳性反应,其中3例环卵反应亦为阳性,环沉率8～15％。提示本法的敏感性和特异性与环卵反应相近。

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot-ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4％和98.9％。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。

检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究

将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上，以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针（以下简称血吸虫抗原胶体金），建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法（Two-step Dot Immunogold Filtration Assay，T—DIGFA）。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点，可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体，与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份，与粪孵法阳性符合率为100％，阴性符合率为99．2％；T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实，T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性，适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。

斑点免疫金渗滤法快速检测沙门氏菌O_9抗原的研究

目的 利用针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体 3- 4 7- 0和胶体金标记亲和纯化的羊抗鼠IgG ,建立一种以微孔滤膜为固相载体 ,快速检测沙门氏菌O9抗原的斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)。方法与结果 以沙门氏菌点膜 ,加入单抗 3- 4 7- 0 ,洗涤后再加入胶体金标记的羊抗鼠IgG ,阳性结果呈红色圆点 ,阴性结果无颜色 ,整个检测过程仅需 10min。肠炎沙门氏菌标准菌株测定该方法灵敏度为 6× 10 4CFU/点。该方法可检测所有已知含O9抗原的沙门氏菌 ,而不与其它沙门氏菌、肠杆菌科其他细菌和常见革兰氏阳性细菌反应。人工感染样品经前增菌和选择性增菌处理后即可进行瞬时检测。结论 建立了一种快速、简便、准确检测沙门氏菌O9抗原的斑点免疫金渗滤法 。

斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征单重斑点免疫金渗滤法的基础上,建立能同时检测HC和PRRS的双重斑点免疫金渗滤法。将提纯的HC和PRRS抗原同时包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,当猪血清中含有HC、PRRS抗体时,则相应的点会显现红色(呈红色斑点),结果易于判断。且操作简单,耗时短,与猪细小病毒、口蹄疫和猪伪狂犬病毒阳性血清不发生交叉反应。

斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留

研究斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留,将制备的金霉素多克隆抗体点在硝酸纤维素膜上,用以竞争捕获胶体金标记的金霉素-牛血清白蛋白结合物和样品中的游离金霉素,通过可见的颜色深浅判断结果。结果表明,本方法的检测限为0.4μg/ml,在金霉素浓度为0.6～1μg/ml范围内可实现定量分析。结果与酶联免疫方法的测定结果一致(相关系数r为0.970)。该法可应用于禽肉中金霉素残留的快速检测。

斑点金免疫渗滤法检测血清抗精子抗体

目的建立检测血清抗精子抗体的斑点金免疫渗滤法 (dot im munogold filtration assay,DIGFA)。方法 采用经 Sephadex G- 75 -抗人全血清柱亲和层析纯化的人精子抗原和胶体金标记的 SPA,根据免疫渗滤原理 ,建立抗精子抗体(ASAb)的斑点金免疫渗滤法检测法。结果 纯化的人精子抗原具有较好的特异性 ;斑点金免疫渗滤法与 EL ISA法比较 ,符合率为 97.7%。特异性为 96 .2 % (TN/ TN+ FP× 10 0 % ) ,敏感性为 88.9% (TP/ TP+ FN× 10 0 % ) ,阳性预测值 84.2 % (TP/TP+ FP) ,阴性预测值 97.2 % (TN/ TN+ FN) .结论 斑点金免疫渗滤法方法检测血清抗精子抗体有较好的特异性和敏感性 ,重复性好 ,试剂稳定 ,操作简便快速 。

斑点金免疫渗滤法快速诊断布鲁杆菌病的研究

目的建立一种布鲁杆菌病快速免疫诊断方法。方法以硝酸纤维素膜为载体,胶体金标记蛋白为显示剂,通过最佳实验条件的选择及稳定性、重现性、敏感性、特异性和交叉反应试验,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)快速检测布鲁杆菌病。结果 DIGFA快速检测布鲁杆菌病具有很好的重现性和稳定性;敏感性、特异性分别达到98％和100％;未发现与肺结核患者、乙肝患者及幽门螺杆菌感染者血清有交叉反应。结论 DIGFA快速检测布鲁杆菌病快速、简便,测试过程1-2 min内完成,试剂敏感、特异、稳定,非常适合布鲁杆菌病的诊断及流行病学调查。

滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的 建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法 应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果 对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论 DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。