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陆地棉漆酶基因家族成员表达模式分析
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作者 左春阳 李亚玮 +4 位作者 李焱龙 金双侠 朱龙付 张献龙 闵玲 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2344-2361,共18页
漆酶是铜蓝氧化酶蛋白家族的一员,在植物木质素合成和提高植株抵御胁迫能力等方面发挥着重要作用。本研究从陆地棉基因组中鉴定到104个漆酶基因(GhLAC)家族成员,进行了系统进化树和组织表达图谱的构建,并随机选取了20个基因进行荧光定量... 漆酶是铜蓝氧化酶蛋白家族的一员,在植物木质素合成和提高植株抵御胁迫能力等方面发挥着重要作用。本研究从陆地棉基因组中鉴定到104个漆酶基因(GhLAC)家族成员,进行了系统进化树和组织表达图谱的构建,并随机选取了20个基因进行荧光定量PCR分析,验证了表达热图的结果。为进一步探索漆酶在棉花中担当的角色,本研究采用启动子-GUS融合载体转化拟南芥,通过转基因拟南芥不同发育过程不同组织GUS染色结果,分析了陆地棉漆酶基因家族6个成员(GhLAC12A、GhLAC14A、GhLAC20A、GhLAC25D、GhLAC59D、GhLAC63D)的精细表达模式。为探究漆酶在逆境中发挥的作用,对该6个漆酶基因进行了切割和刺洞2种创伤胁迫诱导表达分析,并利用2个棉花品系‘84021’(高温耐受型)和‘H05’(高温敏感型)在常温和高温胁迫条件下不同时期的花药进行相应基因的荧光定量PCR分析。研究结果表明,随机挑选的20个基因在根、茎、叶、花瓣、花药和柱头6个组织中差异表达,大多数基因的表达与转录组结果一致。6个漆酶基因的启动子能够不同程度地驱动GUS基因在种子萌发时期、二叶期、四叶期表达;创伤处理结果显示GhLAC12A、GhLAC14A的启动子受创伤诱导后驱动GUS蛋白在叶片中表达的能力显著提高,暗示着这2个基因可能参与创伤胁迫响应。6个GhLACs基因在棉花耐高温品系‘84021’的四分体时期和花药开裂期高温胁迫后都有表达量显著下调的趋势,推测GhLACs基因可能负调控陆地棉花药高温耐受性。本研究结果为进一步探索漆酶家族基因功能提供了参考。 展开更多
关键词 陆地棉 漆酶基因 启动子-GUS表达模式分析 花药高温响应 创伤诱导
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枳漆酶基因家族鉴定及其响应盐胁迫的表达分析
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作者 徐小勇 顾铭洲 +1 位作者 梁梦鸽 姜丽娟 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第9期52-59,共8页
漆酶(LAC)是植物木质素生物合成中催化木质素单体聚合的关键酶,在调控植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要作用。对枳漆酶基因家族进行鉴定和分析,并探究其在盐胁迫下的表达模式,可为进一步研究枳漆酶基因功能提供重要的参考信息。采用... 漆酶(LAC)是植物木质素生物合成中催化木质素单体聚合的关键酶,在调控植物生长发育和胁迫响应中发挥着重要作用。对枳漆酶基因家族进行鉴定和分析,并探究其在盐胁迫下的表达模式,可为进一步研究枳漆酶基因功能提供重要的参考信息。采用生物信息学手段鉴定枳漆酶基因家族成员,对其家族成员的理化性质、基因结构、系统进化关系、启动子顺式作用元件等进行分析,并通过qRT-PCR方法分析其盐胁迫表达模式。结果表明,枳基因组中共有20个LAC基因家族成员,其中18个分布在5条已知染色体上,2个分布在未知染色体上,被预测定位到细胞膜和细胞核中;共有6~14个外显子,5~13个内含子,9~11个motif;系统进化树分析结果显示,20个枳LAC基因家族成员与17个拟南芥LAC基因家族成员共分成7个亚组,20个枳LAC基因家族成员分布在其中的6组;20个枳LAC基因家族成员与拟南芥LAC基因间存在19对共线性关系;启动子区域含有24种顺式作用元件,其中厌氧诱导元件、干旱响应元件和茉莉酸甲酯响应元件数量最多;16个枳LAC基因在盐胁迫下显著上调表达,推测枳漆酶基因参与了盐胁迫响应。 展开更多
关键词 漆酶基因 进化树 顺式作用元件 盐胁迫
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金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究 被引量:28
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作者 张银波 姜琼 +1 位作者 江木兰 马立新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期775-779,共5页
综合运用cDNA末端快速扩增 (RapidAmplificationofcDNAEnds ,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇 (Flammulinavelutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA ,经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族 ,与已发表... 综合运用cDNA末端快速扩增 (RapidAmplificationofcDNAEnds ,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇 (Flammulinavelutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA ,经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族 ,与已发表的漆酶基因 (AF176 2 30 )的同源性最高 ,在氨基酸水平为 72 %。该结构基因命名为gl ccFv,cDNA命名为lccFv ,其序列提交GenBank ,登录号分别为AY4 85 82 6和AY4 5 0 4 0 6。将lccFv的开放阅读框克隆到毕赤酵母表达载体pHBM90 6 ,转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母GS115 (pHBM5 6 5 )诱导产酶 ,在培养温度 2 0℃、甲醇流加量为 1 0 % (V V)的情况下 ,其分泌表达的LCCFv的最高酶活为 0 10 70U mL ,最适反应温度为 4 5℃ ,最适反应pH值为 3 9。 展开更多
关键词 CDNA末端快速扩增 基因组步行 漆酶基因 毕赤酵母 分泌表达
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灵芝(Ganoderma lucidum)漆酶基因的克隆及其序列分析 被引量:7
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作者 张银波 江木兰 +2 位作者 胡小加 张桂敏 马立新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期700-704,共5页
The oxidizing enzyme laccase produced by many fungi is generally considered to be active in the biodegradation of lignin, a major plant cell wall component highly resistant to microbial attack. Using degenerate primer... The oxidizing enzyme laccase produced by many fungi is generally considered to be active in the biodegradation of lignin, a major plant cell wall component highly resistant to microbial attack. Using degenerate primers and molecular techniques such as genome-walking and RT-PCR, a laccase gene and its corresponding cDNA were cloned from Ganoderma lucidum. The coding region of the genomic laccase sequence, which is preceded by the eukaryotic promoter elements TATA and CAAT, spans more than 2107 bp. The corresponding laccase cDNA was identical to the genomic sequence except for 9 introns that were 51-78 bp long. Sequence analysis indicated that the G. lucidum lccGl product has 10 potential N-glycosylation sites (Asn-Xxx-Ser/Thr) and four conserved fungi laccase amino acids signature sequences. The G. lucidum laccase sequence is most similar to the sequence of the laccase from Flammulina velutipes (similarity 73%). 展开更多
关键词 灵芝 漆酶基因 基因克隆 基因序列 氨基酸
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毛木耳漆酶基因的克隆、序列分析及其鉴定 被引量:7
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作者 杨建明 孟鑫 +4 位作者 徐鑫 张磊 李强 咸漠 潘迎捷 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1708-1714,共7页
本文利用PCR和RACE技术首次从毛木耳AP4菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及其基因组全长序列,基因组大小为2514 bp。通过比较该漆酶基因的cDNA和基因组DNA的全长序列,发现该基因包含14个外显子和13个内含子。cDNA序列的全长为1972 bp,其包... 本文利用PCR和RACE技术首次从毛木耳AP4菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及其基因组全长序列,基因组大小为2514 bp。通过比较该漆酶基因的cDNA和基因组DNA的全长序列,发现该基因包含14个外显子和13个内含子。cDNA序列的全长为1972 bp,其包含一个完整的ORF,长度为1860 bp,编码619氨基酸,推测的分子量大小为68 kD,等电点pI为5.15。在氨基酸序列的氨基末端存在一个信号肽序列,同时该基因还包括含铜氧化酶的三个功能结构域KOG1263、SufI和pfam00394。氨基酸序列与GenBank中登录的真菌漆酶蛋白序列比对表明:该氨基酸序列与其它真菌漆酶蛋白序列有较高的同源性,氨基酸序列相同性最高达41%,相似性为58%,并且含有真菌漆酶的四个保守的Cu-bind结构域。将获得的漆酶基因lac1与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pYH3660,将其转化到毕赤酵母中,经甲醇诱导该基因在第10天产酶高达123 IU/L,并通过Native SDS-PAGE电泳获得预期大小的漆酶蛋白条带。结构分析和功能验证均表明:本研究获得的基因lac1为漆酶基因。 展开更多
关键词 毛木耳 漆酶基因 RACE 结构域
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红平菇漆酶基因异源表达及对染料脱色的研究 被引量:7
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作者 郑苗苗 邵淑丽 +2 位作者 张东向 张令昂 焦战战 《纺织学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第12期84-90,共7页
以白腐菌红平菇Pleurotus djamor RNA为模板,通过RT-PCR(反转录)得到红平菇漆酶Pd-lac1基因的完整CDS序列。构建毕赤酵母表达载体pPICZB-Pd-Lac1(重组表达载体),并通过电转化法导入毕赤酵母Pichia pastoris中,通过PCR结果证明,Pd-lac1的... 以白腐菌红平菇Pleurotus djamor RNA为模板,通过RT-PCR(反转录)得到红平菇漆酶Pd-lac1基因的完整CDS序列。构建毕赤酵母表达载体pPICZB-Pd-Lac1(重组表达载体),并通过电转化法导入毕赤酵母Pichia pastoris中,通过PCR结果证明,Pd-lac1的CDS序列部分阳性转化子已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上。经液体摇瓶培养后筛选出蛋白表达较高的酵母工程菌株,漆酶活力达54 U/L。进而研究了重组漆酶对染料脱色的影响。结果表明:重组漆酶对蒽醌类SN4R脱色可达52.8%;杂环类中性红、偶氮类甲基橙和三苯基甲烷类孔雀绿的脱色率低于SN4R,脱色率分别为14.8%、14.5%、0.24%,显示出重组漆酶对SN4R脱色效率具有较大的应用潜力,从而对含蒽醌类染料的废水处理具有更广的应用前景。 展开更多
关键词 红平菇 漆酶基因 毕赤酵母 异源表达 染料脱色
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宏基因组漆酶基因片段的克隆与分析 被引量:7
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作者 黄循柳 黄仕杰 +1 位作者 郭丽琼 林俊芳 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期746-751,共6页
关键词 基因 DNA提取方法 简并引物 漆酶基因克隆
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玉米大斑病菌漆酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量:4
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作者 孟川 贾慧 +4 位作者 曹可可 刘宁 曹志艳 董金皋 韩建民 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期12-18,共7页
根据真菌漆酶铜离子结合位点的保守性,设计简并引物,利用PCR结合末端快速扩增(RACE)技术和染色体步移(Genome walking)技术获得玉米大斑病菌漆酶基因全长,采用生物信息学方法分析基因结构,预测功能。本研究共克隆获得了2个玉米大斑病菌... 根据真菌漆酶铜离子结合位点的保守性,设计简并引物,利用PCR结合末端快速扩增(RACE)技术和染色体步移(Genome walking)技术获得玉米大斑病菌漆酶基因全长,采用生物信息学方法分析基因结构,预测功能。本研究共克隆获得了2个玉米大斑病菌的漆酶基因,分别命名为StLAC1和StLAC2。StLAC1基因的cDNA全长为1 806bp,DNA全长为1 855bp,序列含有1个49bp的内含子,编码601个氨基酸。StLAC2基因DNA全长为1 763bp,其中含有3个外显子,2个内含子,cDNA为1 665bp,编码554个氨基酸。Stlac1p和Stlac2p均具有漆酶特有的3个Cu2+活性位点,且活性位点高度保守。Southern blot分析结果表明漆酶基因StLAC1和StLAC2在玉米大斑病菌基因组中均以单拷贝形式存在。结果表明:玉米大斑病菌基因组中至少存在2个漆酶基因。 展开更多
关键词 玉米大斑病菌 漆酶基因 基因克隆 生物信息学分析
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平菇漆酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 被引量:9
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作者 张银波 江木兰 +2 位作者 胡小加 张桂敏 马立新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期625-629,共5页
采用RTPCR技术克隆到一个平菇(Pleurotusostreatus)漆酶基因的全长cDNA,命名为lccPo1,其序列提交GenBank,登录号为AY450404。将其ORF克隆到毕赤酵母表达载体pHBM906,转化3株毕赤酵母GS115、KM71和SMD1168,该漆酶基因在3种毕赤酵母菌株... 采用RTPCR技术克隆到一个平菇(Pleurotusostreatus)漆酶基因的全长cDNA,命名为lccPo1,其序列提交GenBank,登录号为AY450404。将其ORF克隆到毕赤酵母表达载体pHBM906,转化3株毕赤酵母GS115、KM71和SMD1168,该漆酶基因在3种毕赤酵母菌株中均实现了分泌表达。3种摇瓶培养条件①25℃,1.0%(VV)甲醇;②20℃,1.0%(VV)甲醇;③20℃,0.5%(VV)甲醇,进行比较研究后发现适当提高甲醇浓度有利于漆酶在低温条件下表达,而降低培养温度到20℃则可以提高漆酶的产量2~6倍。3株重组毕赤酵母在其最适反应条件下测得三者粗酶液最高漆酶酶活分别为3.19UmL[GS115(pHBM565)]、2.56UmL[KM71(pHBM565)]和2.49UmL[SMD1168(pHBM565)]。对重组酶进行相关的酶学性质分析表明,三者的最适反应pH值约为4.2,最适反应温度约为60℃。重组毕赤酵母GS115(pHBM565)所产酶的热稳定性稍好,在pH稳定性方面三者没有太大差异。 展开更多
关键词 RT-PCR 漆酶基因 毕赤酵母 分泌表达
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偏肿革裥菌漆酶基因克隆及不同染料脱色研究 被引量:4
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作者 郑苗苗 池玉杰 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期744-750,共7页
染料由于具有复杂的化学结构通常难以降解.漆酶粗酶液对终浓度为50mg/L的不同化学结构的染料的脱色研究,可快速对蒽醌类茜素红进行脱色可达100%;杂环类中性红、偶氮类刚果红和三苯基甲烷类结晶紫的脱色效果低于茜素红,测试的3种染料均... 染料由于具有复杂的化学结构通常难以降解.漆酶粗酶液对终浓度为50mg/L的不同化学结构的染料的脱色研究,可快速对蒽醌类茜素红进行脱色可达100%;杂环类中性红、偶氮类刚果红和三苯基甲烷类结晶紫的脱色效果低于茜素红,测试的3种染料均可在没有介体存在的条件下被漆酶脱色,显示出偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)漆酶对茜素红染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景.利用PCR和RACE技术首次从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及其基因组全长序列,基因组大小为2 106bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和基因组DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子.cDNA序列的全长为1 982bp,其中包含一个完整的ORF,长度为1 563bp,编码520个氨基酸. 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 漆酶基因 染料脱色 结构域
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灰树花漆酶基因及启动子克隆和序列分析 被引量:2
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作者 郑苗苗 池玉杰 +1 位作者 邵淑丽 姜秋旭 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期606-612,共7页
本文以优化后的漆酶培养基为基础,运用RT-PCR和RACE技术相结合,从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2105 bp。比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内... 本文以优化后的漆酶培养基为基础,运用RT-PCR和RACE技术相结合,从该菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2105 bp。比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子。cDNA序列全长为1873 bp,其中,包含一个完整的ORF,长度为1563 bp,编码520个氨基酸。序列在氨基酸水平上与偏肿革裥菌Lenzites gibbosa的相似性评价最高,相似性达70%。采用FA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长800 bp的启动子序列。该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及AP2等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括3个MRE元件、2个STRE元件、1个HSEs元件、5个氮因子结合位点等。这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节灰树花漆酶基因的表达。 展开更多
关键词 灰树花 漆酶基因 启动子克隆 转录调控
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红平菇HP1漆酶基因及启动子克隆和序列分析 被引量:1
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作者 郑苗苗 邵淑丽 +1 位作者 张令昻 焦战战 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第8期21-26,共6页
以优化后的漆酶培养基为基础,将RT-PCR、RACE技术相结合,从红平菇菌株中获得漆酶基因cDNA全长及Genomic DNA全长序列,Genomic DNA大小为2 344 bp。通过对漆酶基因cDNA全长和Genomic DNA全长序列的比较,结果显示该基因包含13个外显子和1... 以优化后的漆酶培养基为基础,将RT-PCR、RACE技术相结合,从红平菇菌株中获得漆酶基因cDNA全长及Genomic DNA全长序列,Genomic DNA大小为2 344 bp。通过对漆酶基因cDNA全长和Genomic DNA全长序列的比较,结果显示该基因包含13个外显子和12个内含子。基因cDNA全长为1 746 bp,其中包含1个完整的ORF,长度为1 590 bp,编码529个氨基酸。序列在氨基酸水平上与桃红侧耳Pleurotus salmoneostramineus的氨基酸序列具有较高的同源性,相似性达97%,与齿耳菌Steccherinum murashkinskyi漆酶氨基酸序列相似性达到72%。通过SEFA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长1 126 bp的启动子序列。分析表明,该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box、AP2等基本的转录起始元件外,还存在多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括4个MRE元件、2个CreA热击元件、2个STRE元件、1个NIT2元件、1个HSEs元件、1个XRE异生物质反应元件、4个氮因子结合位点等。不同外源诱导物可以调节红平菇HP1漆酶基因的表达。 展开更多
关键词 红平菇 漆酶基因 启动子克隆 转录调控
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黄曲霉漆酶基因HIGS载体的构建及对花生的转化 被引量:1
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作者 孙全喜 王云云 +5 位作者 王秀贞 唐月异 吴琪 张青云 曹广英 王传堂 《山东农业科学》 2015年第10期8-12,共5页
黄曲霉毒素污染严重影响着花生食品安全。通过常规育种的方式培育抗黄曲霉花生新品种进展缓慢,效果也难如人意。HIGS(Host-Induced Gene Silencing,寄主诱导的转基因沉默)技术是一种新兴的RNA干扰技术,为培育抗病植物提供了可能。但该... 黄曲霉毒素污染严重影响着花生食品安全。通过常规育种的方式培育抗黄曲霉花生新品种进展缓慢,效果也难如人意。HIGS(Host-Induced Gene Silencing,寄主诱导的转基因沉默)技术是一种新兴的RNA干扰技术,为培育抗病植物提供了可能。但该技术在花生上的应用尚未见报道。为创造抗黄曲霉花生新品系,本研究利用该技术构建了两个黄曲霉漆酶基因(Lac1和Lac2)的HIGS载体,并试图将其转化到易感黄曲霉的花生品种粤油20中,获得了转Lac1基因的PCR阳性种子。根据HIGS的原理,黄曲霉侵染后,转基因花生中产生的dsRNA将抑制黄曲霉漆酶基因表达,从而使转基因花生对黄曲霉产生抗性。基于该原理,下一步将对转基因种子是否抗黄曲霉侵染进行鉴定。本研究为利用HIGS技术探索黄曲霉漆酶基因与黄曲霉致病性的关系奠定了基础,为培育抗黄曲霉花生品种提供了一条新思路。 展开更多
关键词 花生 黄曲霉 漆酶基因 寄主诱导的转基因沉默(HIGS) 遗传转化
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偏肿革裥菌漆酶基因克隆及启动子序列分析 被引量:1
14
作者 郑苗苗 池玉杰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期524-530,共7页
以优化后的漆酶培养基为基础,通过RT-PCR和RACE技术相结合,从偏肿革裥菌Lenzites gibbosa菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2 165 bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基... 以优化后的漆酶培养基为基础,通过RT-PCR和RACE技术相结合,从偏肿革裥菌Lenzites gibbosa菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2 165 bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子.cDNA序列的全长为1 873 bp,其中包含一个完整的ORF,长度为1 563 bp,编码520个氨基酸.序列在氨基酸水平上与彩绒革盖菌Trametes versicolor的相似性评价最高,相似性达83%.通过SEFA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长986 bp的启动子序列.分析表明,该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及AP2等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括7个MRE元件、2个STRE元件、1个HSEs元件、7个氮因子结合位点等.这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节偏肿革裥菌漆酶基因的表达. 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 漆酶基因 启动子克隆 转录调控
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黄孢原毛平革菌漆酶基因lac1680的克隆、表达及产酶研究 被引量:4
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作者 陈建军 刘梁涛 曹香林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期214-220,共7页
以先前筛选到的高产漆酶黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)为模板,利用同源克隆技术合成一个全长为1 680 bp的漆酶基因,核苷酸及氨基酸序列比对显示该基因与真菌漆酶基因有较高的同源性,将其命名为lac1680,将该基因连接到构... 以先前筛选到的高产漆酶黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)为模板,利用同源克隆技术合成一个全长为1 680 bp的漆酶基因,核苷酸及氨基酸序列比对显示该基因与真菌漆酶基因有较高的同源性,将其命名为lac1680,将该基因连接到构建好的p ET24a载体上,并转入表达菌株BL21 Escherichia coli(DE3)中,经对重组菌预表达的全菌裂解物进行SDS-PAGE检测,获得75 k D目的条带,表明诱导表达成功。随后利用NI-NTA层析柱对洗脱下来的lac1680蛋白进行纯化,纯化回收后,漆酶纯度可达98%以上。通过对比基因工程菌和黄孢原毛平革菌野生菌株不同培养时间产酶活力,结果表明构建好的工程菌活力比原菌酶活力有明显的提高,提高了近39%。 展开更多
关键词 黄孢原毛平革菌 漆酶基因 异源表达 蛋白纯化 活力
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杏鲍菇漆酶基因DNA片段的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 薛丹 郭九峰 +1 位作者 那日 刘腾 《食药用菌》 2013年第5期282-287,共6页
参照Genbank中发表的杏鲍菇漆酶基因序列(No.AY686700),并根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计特异性引物。以杏鲍菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2 606 bp的漆酶基因片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定和序列分析,证明该... 参照Genbank中发表的杏鲍菇漆酶基因序列(No.AY686700),并根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计特异性引物。以杏鲍菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2 606 bp的漆酶基因片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定和序列分析,证明该片段为完整的杏鲍菇漆酶基因(Genbank注册号KC789846)。通过对基因序列的内含子/外显子进行预测分析,获得漆酶编码区的cDNA,该基因的开放阅读框由1 596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽,分子量大小约为56 682.0,等电点pI为4.56;比对结果发现该基因氨基酸序列与其他真菌漆酶的同源性最高达93%;进一步对X22-12漆酶二级结构进行分析,并通过SWISS-MODEL预测了该酶的三维结构。 展开更多
关键词 杏鲍菇 漆酶基因 基因克隆 序列分析
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野桑蚕漆酶基因克隆、序列分析及转录表达谱研究
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作者 张永亮 武安泉 +1 位作者 盛东峰 张杰 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期468-472,共5页
利用RT-PCR方法,克隆了野桑蚕Bombyx mandarina漆酶基因,获得了其cDNA序列.该序列长2 317bp,含有一个2 295bp的完整开放阅读框,有8个外显子,7个内含子,编码一个由764个氨基酸残基组成的蛋白质,其蛋白质的分子量和等电点分别为84 340.91... 利用RT-PCR方法,克隆了野桑蚕Bombyx mandarina漆酶基因,获得了其cDNA序列.该序列长2 317bp,含有一个2 295bp的完整开放阅读框,有8个外显子,7个内含子,编码一个由764个氨基酸残基组成的蛋白质,其蛋白质的分子量和等电点分别为84 340.91和6.61.推导的氨基酸序列与其它鳞翅目昆虫(Laccase)基因相应氨基酸序列有较高的同源性,该序列具有它们的漆酶基因所共有的典型特征.组织特异性表达分析表明了该基因仅在野桑蚕的表皮、头部、中肠和血液中有表达.这些结果为进一步研究野桑蚕漆酶基因的功能提供了分子基础. 展开更多
关键词 野桑蚕 漆酶基因克隆 序列分析 转录表达
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变色栓菌漆酶基因的克隆与序列分析
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作者 雷威 陈立祥 +2 位作者 苏建明 张学文 章怀云 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第5期90-93,共4页
本研究以PCR扩增的方法,从变色栓(菌Trametes versicolor)的基因组DNA中扩增出了一预期大小的DNA片断,并将其克隆到了pUCM-T载体上。经筛选、酶切、PCR鉴定,序列分析,证明该片断为变色栓菌漆酶基因的克隆。该基因的开放阅读框由1560个... 本研究以PCR扩增的方法,从变色栓(菌Trametes versicolor)的基因组DNA中扩增出了一预期大小的DNA片断,并将其克隆到了pUCM-T载体上。经筛选、酶切、PCR鉴定,序列分析,证明该片断为变色栓菌漆酶基因的克隆。该基因的开放阅读框由1560个核苷酸组成,编码一个由519个氨基酸组成的多肽。与GeneBank中发表的Laccase基因(AY081188)序列比较发现,编码的氨基酸序列同源性为96%,而核苷酸序列的同源性为92%。 展开更多
关键词 变色栓菌 漆酶基因 克隆 序列分析
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白灵菇漆酶基因的克隆及其序列分析
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作者 薛丹 刘腾 +2 位作者 那日 王志永 郭九峰 《微生物前沿》 2014年第2期44-55,共12页
白灵菇作为一种珍稀食用菌,提高其产量及质量具有重要的现实意义,而漆酶对真菌的生长发育具有重要影响。本文根据侧耳科漆酶基因共同保守序列,设计引物,利用RT-PCR的方法,克隆白灵菇漆酶序列,经测序获得其cDNA序列。为进一步获得该漆酶... 白灵菇作为一种珍稀食用菌,提高其产量及质量具有重要的现实意义,而漆酶对真菌的生长发育具有重要影响。本文根据侧耳科漆酶基因共同保守序列,设计引物,利用RT-PCR的方法,克隆白灵菇漆酶序列,经测序获得其cDNA序列。为进一步获得该漆酶基因序列,以白灵菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2606 bp的漆酶基因DNA片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定、序列分析,证明该片段为完整的白灵菇漆酶基因(GenBank注册号KC789845)。对基因序列的内含子/外显子进行分析,分析结果与经反转录测序获得的cDNA序列一致。该基因的开放阅读框由1596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽(GenBank登录号AGO64758.1),Protein Blast 分析结果表明,该基因含有3个铜氧化酶(Cu-oxidase)保守结构域,并具有高度保守的漆酶特征序列L3;又进一步对白灵菇漆酶二级结构进行分析,并通过 SWISS-MODE预测了该酶的三维结构。&#160; 展开更多
关键词 白灵菇 漆酶基因 克隆 序列分析
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毛竹漆酶基因PeLAC的克隆与表达分析 被引量:10
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作者 李利超 孙化雨 +3 位作者 娄永峰 杨意宏 赵韩生 高志民 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期252-259,共8页
漆酶(LAC)对植物生长发育具有重要作用。本研究以毛竹(Phyllostachys edulis(Carr.)Lehaie)为实验材料,克隆获得毛竹漆酶基因PeLAC的cDNA和基因组序列,长度分别为1692 bp和2785 bp。该基因包含5个内含子和6个外显子;PeLAC蛋白编码563个... 漆酶(LAC)对植物生长发育具有重要作用。本研究以毛竹(Phyllostachys edulis(Carr.)Lehaie)为实验材料,克隆获得毛竹漆酶基因PeLAC的cDNA和基因组序列,长度分别为1692 bp和2785 bp。该基因包含5个内含子和6个外显子;PeLAC蛋白编码563个氨基酸,推测的分子质量和等电点分别为62.3 k D和9.056。系统进化分析表明,PeLAC与其它植物的漆酶具有较高的一致性。经预测PeLAC基因编码序列中含有miR397的靶点,利用RLM-5'RACE技术证明miR397对PeLAC能够准确切割,位点位于靶序列的第10~11位碱基之间。组织特异性分析表明,PeLAC基因在茎中表达丰度最高,根中次之,叶鞘中较少,叶片中几乎未检测到表达;随着笋高度的增加,PeLAC表达丰度上升,生长至15 cm时达到最大值,30 cm时又有所下降;而miR397的表达与PeLAC相反。本研究同时克隆了PeLAC基因上游启动子序列PeLACp,其包含ABRE、MBS等多种与逆境胁迫相关的响应元件。利用ABA(100μmol/L)和NaCl(400 mmol/L)溶液处理可明显诱导PeLAC在毛竹根中表达,而GA3(100μmol/L)处理则对其表达具有抑制作用。 展开更多
关键词 毛竹 漆酶基因 miR397 表达分析
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