CTCF在人类疱疹病毒潜伏复发机制中的调控作用

疱疹病毒家族是一类具有包膜结构的双链DNA病毒,是人类病毒性疾病常见的病原体。目前已经鉴定的人类疱疹病毒共有8种,分为α、β、γ三个亚科,8种疱疹病毒所引起的临床表现各不相同,但均可在宿主体内建立长期潜伏感染,并在潜伏感染过程中可出现再激活,再致病。CTCF结合因子作为重要的多功能转录因子,是表观遗传学调控的重要作用因子,可调控多种靶基因的表达。目前研究提示,在多种人类疱疹病毒潜伏的建立及再激活过程中,CTCF发挥着重要的作用,本文就CTCF在人类疱疹病毒潜伏复发机制中的调控作用作一综述。

单纯疱疹病毒Ⅱ型CTCF结合位点抑制启动子功能

为了找到CTCF在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)中的结合位点,并探讨其基因表达调控作用。对比HSV-1与HSV-2全基因组中CTCF结合序列区别;生物信息学分析HSV-2全基因组;Jaspar在线预测CTCF结合位点;依据CTCF结合的序列特点预测结合位置;PCR扩增预测位点并插入pGL3-promoter构建重组载体;重组载体转染人胚胎肾细胞(293T)双荧光检测验证预测位点转录调控效应。预测得到三个CTCF结合位点分别位于潜伏相关转录本(LAT)上游(CTUL)、下游(CTa’m)及内含子(CTRL)位置;扩增目的片段并构建重组载体,双酶切及测序验证成功;双荧光检测显示LAT内含子(pGL3-promoter-CTRL)及下游(pGL3-promoter-CTa’m)结合位点重组载体转染组与pGL3-promoter载体转染组相比,荧光强度明显减弱,差异有统计学意(P<0.001),但与pGL3-basic组相比,并没有完全沉默荧光霉素的表达;上游结合位点重组载体(pGL3-promoter-CTUL)转染组与pGL3-promoter相比无明显差异(P>0.05)。HSV-2LAT序列内含子及下游序列上存在CTCF结合位点,具有减弱基因启动子功能的效应,可能在HSV-2维持潜伏中发挥作用。