潜伏期膜蛋白1与疾病关系的研究进展

EB病毒(EBV)是一种普遍存在的致癌病毒,是高度相关的淋巴和上皮肿瘤的来源和发展,包括伯基特淋巴瘤和鼻咽癌(NPC)等,EBV基因几乎可以在所有细胞中。EBV感染通常与少数潜伏病毒功能的蛋白质表达,包括潜伏膜蛋白LMP1和LMP2A等和巴尔核抗原1(EBNA1)。LMP1是肿瘤坏死因子受体超家族的成员,被认为是EBV的主要致瘤蛋白。在EB病毒中通过2个C末端结构域编码基因蛋白LMP1信号来驱动细胞生长,存活和转化。LMP1蛋白目前是惟一已被证实的EB病毒的癌基因,LMP1的表达参与了肿瘤的发生与发展,是目前癌症方面研究的重点。

过表达EB病毒潜伏期膜蛋白1(LMP1)的人B淋巴细胞株的建立

目的构建EB病毒潜伏期膜蛋白1(LMP1)基因的真核表达载体,通过电穿孔法转染人B淋巴瘤细胞株Ramos细胞,建立稳定的LMP1表达细胞株。方法扩增带有EcoRⅠ与BamHⅠ酶切位点的LMP1编码基因,克隆至pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP真核表达载体,挑取阳性单克隆感受态细胞行PCR以及测序后将重组质粒通过电穿孔法转染Ramos细胞, G418筛选稳定表达LMP1的细胞株, PCR和Western blot法分别检测LMP1 mRNA和蛋白在Ramos细胞中的表达。结果 PCR与测序证实成功构建了LMP1重组质粒,建立了稳定转染的Ramos细胞,且LMP1蛋白可在细胞中成功表达。结论成功建立了稳定表达LMP1的Ramos细胞。

EB病毒潜伏期膜蛋白1与自身免疫性疾病关系的研究进展

目的已经证实多种自身免疫性疾病和血液病均与EB病毒(EBV)感染有关,其中EBV潜伏期膜蛋白1(LMP 1)基因是EBV的关键致瘤基因,也是使EBV在人体内维持潜伏感染的重要片段。LMP1在感染过程中参与多种细胞通路的改变与多种细胞因子的调节,其对细胞的诸多调控作用导致了多种自身免疫性疾病的发生发展。本文主要综述EBV的感染特点及LMP1在自身免疫性疾病中参与的发病机制。

LMP1调控的细胞生存与死亡程序及其在抗肿瘤免疫中的意义(英文)

EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)基因组编码数种恶性转化必需的蛋白质,如潜伏期膜蛋白1(latent membraneprote in1,LMP1)。LMP1能上调抗凋亡的蛋白质以支持病毒的复制,同时也能增强细胞凋亡,提示一种病毒的蛋白质既能支持病毒的生存,亦能刺激宿主的防御机制,导致受感染的细胞裂解。病灶浸润的CD8阳性T淋巴细胞通过合成Fas配体等效应分子发挥抗肿瘤免疫功能。作为一种核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)依赖性的分子,Fas可被LMP1诱导。根据我们报道的LMP1对刺激物依赖性的细胞凋亡调节模型,LMP1能增强Fas诱导的细胞凋亡。有结果显示,Fas配体介导的细胞毒性对于EBV相关的鼻咽癌具有明显的治疗效果。近来也有报道提示,影响Fas介导细胞凋亡的基因突变可显著地降低个体对肿瘤的易感性。我们认为,在肿瘤细胞精确地调控Fas水平的细胞因子疗法,仍有可能增强癌症患者的抗肿瘤免疫。

TGF-β1参与调控LMP1介导信号转导通路的研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和EB病毒(EBV)潜伏期膜蛋白1(LMP1)在EBV相关胃癌发生中的作用及其机制。方法设计合成靶向LMP1的siRNA649转染EBV阳性胃癌细胞系GT38,并与TGF-β1联合作用,RT-PCR检测LMP1沉默和TGF-β1作用对LMP1介导的信号转导通路相关因子转录表达的影响。结果与细胞对照和脂质体对照比较,siRNA649、siRNA649+TGF-β1分别作用GT38细胞系后,基质金属蛋白酶9(MMP9)、生存素(Survivin)和细胞黏附分子1(ICAM-1)表达降低,而细胞周期依赖性激酶4(CDK4)表达升高,差异均有显著性(F=10.48～26.23,P<0.05);siRNA649+TGF-β1联合作用后表皮生长因子受体(EGFR)表达水平显著高于对照组(F=9.47,P<0.05),而siRNA649组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。TGF-β1作用EBV阳性细胞系(GT38和SNU719)和EBV阴性细胞系(SGC7901和HGC-27),与对照组相比GT38细胞中ICAM-1表达显著降低,差异有显著性(F=30.36,P<0.05),其他细胞中ICAM-1的表达差异无显著性(P>0.05);4种细胞系TGF-β1作用前后MMP9、Survivin、CDK4和EGFRmRNA转录表达差异均无显著意义(P>0.05)。结论 LMP1可以调控MMP9、Survivin和CDK4表达,LMP1与TGF-β1相互作用可调控ICAM-1和EGFR的转录表达。

鼻咽癌组织中miR-10b、LMP1和Twist1的表达变化及临床意义

目的观察鼻咽癌组织中微小RNA(miR)-10b、潜伏期膜蛋白1(LMP1)及Twist同系物1(Twist1)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用实时定量PCR法检测92例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织中的miR-10b、LMP1和Twist1 mRNA。采用免疫印迹法检测癌组织及癌旁组织中的LMP1、Twist1蛋白。分析鼻咽癌组织中miR-10b、LMP1和Twist1 mRNA表达与患者临床病理特征的关系。采用Pearson线性相关分析miR-10b、LMP1和Twist1表达的相关性。结果与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中miR-10b、LMP1及Twist1 mRNA表达高(P均<0.05),LMP1、Twist1蛋白表达阳性率高(P均<0.05)。不同肿瘤TNM分期鼻咽癌患者癌组织中miR-10b、LMP1和Twist1 mRNA表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。鼻咽癌癌组织中miR-10b与LMP1、Twist1 mRNA的表达呈正相关(r分别为0.603、0.578,P均<0.01),癌组织中LMP1与Twist1 mRNA表达呈正相关(r=0.611,P<0.01)。结论鼻咽癌组织中miR-10b、LMP1、Twist1表达升高,miR-10b、LMP1和Twist1的表达与肿瘤TNM分期有关,有可能成为鼻咽癌诊断治疗的新靶点。

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过NF-κB、AP-1促进IL-8分泌

目的 探讨EB病毒LMP1分子致瘤机制 ,在已证实鼻咽癌细胞系中LMP1有效激活NF κB或AP 1的基础上 ,对LMP1是否通过NF κB或AP 1促进IL 8分泌进行探讨。方法 以稳定表达LMP1及其 3种突变体、空白载体的鼻咽癌细胞系 [HNE2 LMP1、HNE2 LMP1(1 185 )、HNE2 LMP1(1 2 31)、HNE2 LMP1△ 187 35 1和HNE2 pSG5 ]及antisense LMP1处理的HNE2 LMP1鼻咽癌细胞系为材料 ,将IL 8报道质粒瞬时导入这些细胞系中 ,通过测定luciferase值以反映LMP1是否促进IL 8转录 ;将mutAP 1 IL 8 luc或IκBα(S32A S36A)表达质粒导入HNE2 LMP1细胞系中 ,比较其IL 8报道活性 ,以确定LMP1是否通过AP 1或NF κB诱导IL 8转录 ;利用ELISA方法测定HNE2 LMP1、HNE2 pSG5、anti sense LMP1处理的HNE2 LMP1鼻咽癌细胞系中的IL 8浓度 ,进一步从蛋白水平上确定LMP1是否促进IL 8分泌。结果 与HNE2 pSG5相比 ,在HNE2 LMP1、HNE2 LMP1△ 187 35 1和HNE2 LMP1(1 2 31)细胞系中IL 8报道活性分别升高了原来水平的 11.5、8.6和 3.4倍 ,而HNE2 LMP1(1 185 )对IL 8报道活性不影响。在HNE2 LMP1细胞系中IL 8蛋白水平提高了 17.4倍 ,而antisense LMP1则使HNE2 LMP1细胞的IL 8报道活性及蛋白水平分别下降到原来水平的 18.3%和 9.2 % ;