扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗（HAART）6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞（PBMC）和高度纯化的CD4＋T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4＋T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率（93.3%）明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率（10.0%）。结论 PBMC纯化CD4＋T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。

HIV-1潜伏库研究进展

HIV-1在未经治疗的艾滋病患者体内虽可以持续复制,但也可潜伏在细胞内以逃避宿主的免疫清除,这一现象即病毒潜伏。病毒潜伏对抗病毒治疗带来了挑战,也引起人们的高度关注。本文对HIV-1病毒潜伏库的研究进展进行了综述。

HIV-1潜伏库调控剂的研究进展

HIV-1潜伏库的存在导致艾滋病无法彻底治愈。因此,迫切需要开发高效低毒、成药性良好的HIV-1潜伏库调控剂以实现艾滋病的功能性治愈。本文综述了2019年以来潜伏库调控剂的研究进展,涵盖药物发现策略、生物活性和作用机制。本文对于发现具有临床应用价值的HIV-1潜伏库调控剂具有重要的指导意义。

Ⅰ型人类免疫缺陷病毒潜伏激活剂的研究进展

艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的获得性机体免疫缺陷综合征。高效抗反转录病毒治疗是目前治疗AIDS患者最有效的方法,其虽可降低病人体内病毒载量,但却不能彻底清除病毒。2012年“shock and kill”治疗策略被提出,该策略利用HIV潜伏激活剂(LRA)激活潜伏在CD4+T细胞内的HIV-1使其暴露,随后通过增强免疫系统或采用抗病毒药物消灭携带有病毒的宿主细胞,从而逐渐清除病毒潜伏库,最终实现艾滋病的功能性治愈。HIV-1潜伏机制主要有5种:表观遗传学调控、转录因子对基因的调控、免疫信号通路的调节、前病毒基因整合位点的影响和微RNA的影响。基于HIV-1的潜伏机制,目前有潜力作为LRA的药物主要包括表观遗传修饰剂、转录因子调节剂和免疫激活剂等。本文对以上几类药物的作用机制、代表性药物以及研究进展进行综述,以期为LRA研发提供思路。

DC-SIGN启动子活化信号通路对HIV-15’LTR活性的影响

目的研究诱导DC-SIGN启动子活化的信号通路对HIV-15’LTR活性的影响。方法PCR法扩增DC-SIGN启动子及HIV-15’LTR序列，通过双酶切重组到荧光素酶报告质粒中，构建DC-SIGN启动子和HIV-15’LTR荧光素酶报告质粒。以PMA分化的THP-1细胞作为细胞模型，分别转染DC-SIGN启动子和HIV-15’LTR荧光素酶报告质粒，并以相应的信号通路阻断剂处理，以1000IU／ml的IL-4诱导24h后检测荧光素酶活性。结果HIV-15’LTR荧光素酶报告质粒的活性明显弱于DC-SIGN启动子，IL-4诱导可以使DC-SIGN启动子和HIV-15’LTR荧光素酶报告质粒的活性升高至2倍以上。ERK、JAK-STAT和NF-KB信号通路阻断剂均能够降低DC-SIGN启动子荧光素酶报告质粒的活性，其中ERKl／2抑制剂抑制活性最强，几乎完全阻断了IL-4的诱导效应。对于HIV-15‘LTR荧光素酶报告质粒，NF-κB信号通路阻断剂阻断效果最明显，阻断效率为52．32％，ERK信号通路阻断剂阻断效率为43．31％。结论IL-4诱导的信号通路在活化DC-SIGN启动子的同时，对HIV-15’LTR也具有一定的活化作用，并主要通过NF-κB和ERK信号通路实现。

干扰素α对人免疫缺陷病毒潜伏库的影响

艾滋病已成为全球性的公共卫生问题。因为HIV-1潜伏库的存在，HAART虽然延缓了疾病的进程，减少了相关机会性感染的发生，但是却无法将病毒从人体内完全清除。近年来IFN-α对HIV-1潜伏库的清除受到广泛关注，此文对IFN—α对HIV-1病毒潜伏库的作用进行综述。