正畸力调控下Col1^(+)细胞亚群的分化潜能与机制探究

目的探究正畸力调控下Col1^(+)细胞亚群的多向分化潜能与下游机制,为临床正畸治疗提供新思路。方法建立小鼠正畸牙移动模型,鉴定不同时间节点Col1^(+)细胞亚群在牙周组织中的时间与空间定位;运用谱系示踪及细胞剔除技术,构建Col1Cre ERT2;td Tomato小鼠,证实力学敏感性Col1^(+)细胞在正畸牙移动过程不可或缺的作用;利用流式技术分离扩增小鼠牙周Col1^(+)细胞,运用体外施力模型深入探究细胞内在机制变化;Bulk RNA seq与ATAC seq阐明下游力学响应关键靶点;联合Seahorse、荧光探针与组织免疫荧光等检测细胞的能量代谢变化特征。结果体内模型证实,正畸力施加后第0、3、7、14天,Col1^(+)细胞的数量与增殖活性逐渐升高,且主要聚集于牙周膜附近;条件诱导敲除模型证实,体内剔除Col1^(+)细胞后,正畸牙移动速度减慢;测序分析筛选出Piezo1受体是Col1^(+)细胞响应力的关键靶点,且细胞发生代谢重编程。此外,Seahorse等代谢检测手段揭示,正畸力通过激活线粒体的氧化磷酸化供能途径,调控Col1^(+)细胞的多项分化潜能,在正畸牙移动中发挥关键作用。结论正畸力通过调控Col1^(+)细胞表面Piezo1受体激发细胞代谢重编程与线粒体氧化磷酸化供能途径,激活其多向分化潜能与成骨、成脂、促血管生成等效应,这群力学敏感的Col1^(+)细胞亚群在正畸牙移动中发挥不可或缺的作用,为临床正畸治疗的优化提供新思路。

甲状腺乳头状癌与恶性潜能未定的高分化肿瘤中CK19、Galectin-3和TPO的表达及意义

探析甲状腺乳头状癌(PTC)与恶性潜能未定的高分化肿瘤(WDT-UMP)中CK19、Galectin-3和TPO的表达意义。方法 收集临床2022年1月-2023年12月共1000例甲状腺手术标本,对其中甲状腺乳头状癌(PTC)及恶性潜能未定的高分化肿瘤(WDT-UMP)的病例全部行免疫组化抗体CK19、Galectin-3和TPO检测,分析CK19、Galectin-3和TPO阳性表达情况。结果 1000例中有168例甲状腺乳头状癌标本,7例为甲状腺非浸润性滤泡性肿瘤、乳头核状特征(WDT-UMP),8例甲状腺未定恶性潜能滤泡状肿瘤(FT-UMP),甲状腺乳头状癌的CK19、Galectin-3均为强阳性,FT-UMP、WDT-UMP阳性率分别为12.5%、58.6%(P<0.05);二者的TPO均为强阳性,甲状腺乳头状癌阳性率为6.0%(P<0.05)。结论 TPO、Galectin-3、CK19可以作为甲状腺乳头状癌、恶性潜能未定的高分化肿瘤的诊断与鉴别诊断的重要参考标记,三者联合应用可提高甲状腺乳头状癌、恶性潜能未定的高分化肿瘤诊断的准确性。

人牙周膜细胞群多向分化潜能的实验研究

目的研究体外培养的人牙周膜细胞群（hPDLP）向成骨和成脂方向分化的潜能,为牙周组织工程提供可靠的种子细胞来源。方法组织块法分离培养人牙周膜细胞群,流式细胞术检测间充质干细胞标记CD146和STRO-1的表达;利用茜素红、油红O染色、免疫组化以及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）等检测hPDLP的多向分化标志。结果第1代hPDLP的CD146和STRO-1阳性率分别是27.20%±3.98%和4.23%±4.08%;经矿化诱导可以形成矿化结节,有钙盐沉积;经成脂诱导可见特异性脂滴形成,特异性转录因子过氧化物酶体激活物增生受体2（PPARγ2）和脂蛋白脂酶（LPL）表达上调。第8代hPDLP相对第1代的矿化能力没有差异,但成脂方向分化潜能减弱。结论体外培养的hPDLP具有向成骨和成脂样细胞分化潜能,第1~3代细胞群明显具有牙周膜干细胞的多向分化潜能优势。

小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定

目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5～ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞 ,接种后 1 2～ 1 6d形成单层贴壁的成纤维状细胞。体外多向诱导分化鉴定分离的细胞 ,用传代的细胞进行生长曲线的测定、观察其接种贴壁率、检测细胞周期和超微结构。结果 体外传代培养的MSCs具有分化形成成骨和成脂细胞的能力 ;MSCs倍增时间约为 3 8h ,传代后 1 2h贴壁达 90 %以上 ,细胞周期显示有 80 %细胞处于G0 G1 期 ,并用电镜照片显示其超微结构。结论 在本实验条件下 ,体外培养的MSCs具有多向分化潜能 ,体外生长稳定 ,传代后的细胞适应性强 ,增殖较快 ,超微结构和细胞周期表现出较早期细胞特点。

黄芪多糖对电离辐射骨髓间充质干细胞向神经分化潜能的影响

目的研究黄芪多糖对X射线照射人骨髓间充质干细胞向神经分化的干预作用。方法采用CCK-8法筛选不同浓度的黄芪多糖作用于2Gy X射线辐射人骨髓间充质干细胞的增殖能力;细胞形态计数X射线对骨髓间充质干细胞分化为神经细胞数量的影响;甲苯胺蓝染色检测X射线对骨髓间充质干细胞分化为神经细胞中尼氏体的表达量;Western blot检测神经巢蛋白(Nestin)及神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表达变化。结果与对照组相比,X射线照射后细胞增殖水平明显降低(P<0.05),与单纯照射组比较,加药照射组骨髓间充质干细胞增殖水平显著增加(P<0.05),其中黄芪多糖浓度为50 mg·L^(-1)时促增殖作用最强,设为最佳药物浓度;单纯辐射后骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的数量明显降低(P<0.05),当给予黄芪多糖干预后分化为神经细胞的数量明显上升(P<0.05);辐射后骨髓间充质干细胞分化为神经细胞中尼氏体的表达量降低(P<0.05),当给予黄芪多糖干预后,尼氏体的表达量明显增多;单纯辐射后Nestin及NSE表达量降低(P<0.05),而当给予黄芪多糖干预后,Nestin和NSE表达量升高(P<0.05)。结论黄芪多糖对电离辐射人骨髓间充质干细胞向神经分化潜能的影响具有保护作用。

成体干细胞的分化潜能及在修复重建中的应用前景

目的 探讨成体干细胞 (AS细胞 )的分化潜能性及在临床修复重建中应用的可能。方法 检索医学和生物医学文献数据库中关于 AS细胞研究的相关报道 ,并对 AS细胞的最新研究进展作简要总结。结果 AS细胞存在于成体的各种组织中 ,具有自我更新能力和分化潜能性 ;部分成体干细胞 ,如骨髓、皮肤、肝及脂肪等组织中的 AS细胞 ,具有多向分化潜能 ,可向无关组织类型的成熟细胞横向分化 ;AS细胞是组织更新与修复的起源细胞 ,且与肿瘤的发生和衰老密切相关。结论 AS细胞具有多向分化潜能 。

小鼠骨髓间质干细胞的体外培养与多向分化潜能的鉴定

【目的】建立小鼠骨髓间质干细胞(MSC)体外培养、纯化、扩增方法,并进行体外定向诱导条件下的多向分化潜能鉴定。【方法】取3～18月雄性C57BL/6J小鼠(共48只)骨髓细胞,贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,观察纯化后的细胞形态,对3、10、20代的MSC进行细胞生长曲线绘制;并检测细胞在不同诱导条件下向成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞的分化能力。【结果】小鼠MSC在体外可以诱导成成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞。MSC连续传代培养达30代以上,细胞的形态、抗原表达无改变,并保持多向分化潜能。【结论】该方法获得的MSC具有高度增殖、多向分化潜能、生物学特性稳定的特点。

绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞的多向分化潜能研究

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向诱导下的多向分化潜能。方法取6周龄GFP转基因小鼠1只,用密度梯度离心法结合贴壁法体外培养获得GFP转基因小鼠骨髓MSCs有限细胞系(GFP_MSCs)。取第3代GFP_MSCs进行体外多向分化诱导:成骨诱导后进行碱性磷酸酶增殖活性检测及茜素红钙盐染色;成脂肪诱导20d后进行油红O染色鉴定;成神经诱导6h后用免疫组织化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)的表达。结果GFP_MSCs经成骨诱导后ALP表达较对照组明显升高,20d后茜素红染色可见有橘红色钙盐沉积;经成脂诱导后油红O染色阳性;经成神经诱导后,细胞形态由梭形转变为星状细胞,NSE染色呈强阳性表达。结论GFP转基因小鼠骨髓MSCs在体外诱导下具有多向分化能力,对GFP稳定表达无影响,可以作为研究MSCs多向分化潜能机制的一个有效示踪工具。

新生昆明小鼠胰腺干细胞体外分离、培养及自然分化的潜能

背景:关于胰腺干细胞在胰腺组织中的分布情况,以及如何有效的将其分离、体外优化培养,目前仍有一定的困难。目的:从新生昆明小鼠胰腺组织中分离出胰腺干细胞,在体外条件下培养观察其形态学和生物学特征,并进行初步鉴定。方法:取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅴ型胶原酶消化,采用Percoll不连续密度梯度离心,使胰腺组织内、外分泌部细胞分离,分布在3个不同的密度界面;收集各界面的细胞,以无血清、添加碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的DMEM培养基培养。结果与结论:通过细胞形态学和细胞生长特性的观察,结合双硫腙染色证实:采用Percoll不连续密度梯度离心,第一、二密度界面的细胞来源于胰腺内分泌部;第三密度界面细胞来源于胰腺外分泌部。分别从胰腺内、外分泌部获取胰腺组织细胞,在体外培养观察发现均存在一类大、圆、单个核的细胞,呈集落样附壁生长,具有较活跃的分裂增殖能力,碱性磷酸酶染色阳性,表达胰腺干细胞的特异性标志巢蛋白,即为胰腺干细胞;随着体外培养时间的延长,分别表达PDX-1和CK-19,呈现向胰腺内分泌部细胞和外分泌部细胞分化的趋势。

犬脂肪间充质干细胞的分离培养及分化潜能研究

为获得犬脂肪间充质干细胞,本试验取犬腹股沟皮下脂肪组织,分别利用组织培养法和酶消化法分离犬脂肪来源间充质干细胞,对比观察不同来源细胞的形态和增殖特征,并通过诱导液促进细胞向成骨细胞和成脂细胞方向分化,检测其分化潜能。结果表明,通过组织培养法培养的青年犬脂肪组织,可获得大量脂肪间充质干细胞,该细胞生长旺盛,形态均一,可分化为碱性磷酸酶染色阳性的成骨细胞和油红O染色阳性成脂细胞。组织培养法分离培养犬脂肪间充质干细胞操作简单,可为细胞移植治疗等研究提供充足的细胞来源。

人脐血间充质干细胞生物学特性、分化潜能与临床应用的研究进展

关于干细胞的描述始于19世纪末，随着生命科学的进步，干细胞研究和应用领域得以不断拓宽和深入。所谓干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞，能够产生至少一种类型、高度分化的子代细胞。干细胞按其发生学来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞，成体干细胞是指已分化组织中的未分化细胞，包括造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等。我国对成体干细胞的研究甚多，尤其是对间充质干细胞（ Mesenchymal stem cell，MSCs）的研究。 MSCs主要存在于骨髓、外周血、胎盘、脐带、脐血、成人膝关节的滑膜中，胎儿、成人和老年人的骨骼肌和皮肤结缔组织中也均含有MSCs。脐血作为干细胞的来源和应用已被广泛接受，近年来，人脐血间充质干细胞（ Umbilical cord blood mesenchymal stem cells ， UBMSCs ）以其来源丰富和生物学特性，成为倍受关注的成体干细胞。

绿色荧光蛋白转基因小鼠脂肪间充质干细胞的多向分化潜能

目的:研究绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠脂肪间充质干细胞(ADSC)体外定向诱导下的多向分化潜能.方法:取出生后4 d的GFP转基因小鼠腹股沟的皮下脂肪组织,经过胶原酶消化,加入脂肪组织来源干细胞条件培养基中培养.将生长状态良好的第5代GFP-ADSCs分别加入成骨及成脂条件培养液进行体外多向分化诱导研究.并分别采用茜素红钙盐染色和油红O染色进行鉴定.结果:成功获得了稳定表达GFP的ADSCs,GFP-ADSC经成骨诱导20 d后茜素红染色可见有橘红色钙盐沉积;经成脂诱导10 d后油红O染色阳性.结论:GFP作为报告基因在ADSCs分化过程中没有被关闭,亦未影响到ASCs的多向分化潜能,是ADSC在体多向分化研究的一个有效示踪工具.

半月板碎片来源间充质干细胞样细胞的分离培养及多向分化潜能

目的：探讨半月板碎片来源间充质干细胞（MSC）样细胞的分离培养和多向分化潜能。方法：通过酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞,体外培养至第3代,显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代细胞并对其进行向成骨、成脂和成软骨诱导分化。结果：经酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞4～6天可见少量的长梭形贴壁,10～14天细胞成簇生长,克隆集落形成。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好。成骨诱导14天后ALP和茜素红染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导14天后油红O染色阳性提示细胞内有脂滴形成。采用细胞微团无血清成软骨诱导21天后甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞外有蛋白多糖形成;免疫组织化学染色示特异软骨基质Ⅱ型胶原表达阳性。结论：采用混合胶原酶消化的方法分离获得的半月板碎片来源的细胞贴壁生长,呈典型的长梭形的MSC样细胞形态,在体外适当的诱导条件下具有分化成骨、成脂、成软骨的潜能,有望成为半月板再生的种子细胞来源。

体外分离培养胎盘多分化潜能细胞的实验研究

目的探索一种新的获取间充质干细胞(m esem chym al stem cells,MSCs)的来源及方法。MSCs在成人骨髓内含量极低,数量随着年龄的增长而减少。MSCs同时少量出现于外周血以及脐带血、胎儿组织器官内,然而,胎儿组织样本难以获取,脐带血中含量太低。这样,如何获得合适的MSCs来源以建立稳定的培养体系,同时避免伦理道德问题的约束是一个值得探索的课题。方法消化胎盘实体组织,贴壁培养细胞,观测形态并检测其细胞表面抗原表达以及分化潜能。结果胎盘组织中分离出的贴壁细胞与骨髓间充质干细胞有相似形态和细胞表面标志,具有分化为成骨细胞以及神经细胞的能力。结论胎盘组织中含有的多分化潜能细胞(p lacenta-derived mu ltipotent cells,PDMCs)与骨髓MSCs形态功能相似,胎盘可以作为获取MSCs的一种有效来源。

两种人羊膜细胞的表型鉴定和分化潜能测定(英文)

本研究旨在分离、培养和表型鉴定两种人羊膜细胞并分析其多向分化潜能。羊膜中可分离出来源于外胚层的羊膜上皮细胞和来源于中胚层的羊膜间充质细胞。用流式细胞术和免疫荧光法对其进行表型鉴定,同时用免疫荧光法分析其多向分化潜能。结果表明:两种人羊膜细胞阳性表达HLA-A,B,C和间充质干细胞的标志(CD29,CD73,CD44,CD59,CD90,CD105,CH166),不表达造血干细胞的标志(CD31,CD34,CD45,HLA-DR),弱表达协同刺激分子(CD40,CD40L,CD80,CD86),且这些表型的表达量在第3-7代都维持稳定。免疫荧光法显示羊膜上皮细胞表达角蛋白19,不表达波形蛋白,而羊膜间充质细胞则相反。对其多向分化潜能测定显示,羊膜间充质细胞更好地向心肌细胞分化,而羊膜上皮细胞更好地向神经细胞分化。结论:从羊膜中可分离出羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞,两种细胞的表型相似,多向分化潜能却不同。羊膜上皮细胞具有更好的外胚层分化潜能,而羊膜间充质细胞更好地向中胚层分化。此结论对细胞治疗有很好的指导作用。

ES细胞源性表皮干细胞分化潜能的研究

目的探讨人羊膜诱导的ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内的分化,研究其在不同微环境中的分化潜能和稳定性,为组织工程皮肤寻找新的种子细胞奠定基础。方法Hoechst33342标记129小鼠E14胚胎干细胞,与人羊膜共培养4d,定向诱导其分化为的表皮干细胞克隆,诱导后的细胞移植入129小鼠肾被囊内,术后4,6和8周取材。对移植后细胞的分化进行形态学和免疫荧光双标CK19及CK18检测。结果ES细胞源性表皮干细胞在小鼠肾被囊内4周,分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构,种植6周和8周,除上述结构外,可见角化复层上皮、汗腺样、皮脂腺样及毛囊样等结构。管泡状结构免疫荧光双标染色呈CK19及CK18阳性。结论ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内,仍具有分化为角化复层上皮、汗腺样、皮脂腺样及毛囊样结构的潜能。

单细胞克隆肝癌干细胞向间充质样细胞的分化潜能

目的:探讨单细胞克隆肝癌干细胞(liver cancer stem cell,LCSCs)向间充质样细胞分化的潜能。方法:通过有限稀释法获得单个细胞来源的LCSC克隆,采用RT-PCR法鉴定干细胞标志物;将该单细胞克隆分别用成骨、软骨和脂肪诱导分化培养基培养3周后,采用Real-time PCR及特殊染色技术比较诱导前后LCSC表达成骨、软骨及脂肪细胞特异标志物的差异。结果:单细胞克隆的LCSC表达多种干细胞标志物、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、干细胞因子受体、C-kit、巢蛋白(nestin)、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)、CD133。分化诱导培养3周后,成骨方向诱导的细胞茜素红染色呈现橘红色钙结节形成,软骨方向诱导的细胞阿尔新蓝染色显示蓝色蛋白多糖沉积,脂肪方向诱导的细胞油红O染色显示大量脂滴形成。Real-time PCR结果显示,诱导后成骨细胞特异标志物骨钙素和Ⅰ型胶原、软骨细胞特异标志物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原、脂肪细胞特异标志物脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达均较对照组显著上调(Ⅰ型及Ⅱ型胶原间为P<0.05,其他指标间均为P<0.01)。结论:LCSC具有可塑性,在特定的微环境下具有向间充质样细胞分化的潜能。

脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究

目的建立人脂肪来源的基质细胞（ADSCs）的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果每100ml脂肪抽吸物中可分离得到2×10^7-4×10^7个有核细胞,60d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞。结论建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能。有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗。

真皮成纤维细胞多向分化潜能的研究进展

真皮成纤维细胞起源于胚胎中胚层间质细胞,是构成体内疏松结缔组织的主要细胞成分。以往认为,真皮成纤维细胞在机体发育过程中是分化完全的终末细胞,不具备多向分化潜能,只能作为真皮组织的种子细胞。近年来研究发现,真皮成纤维细胞能够表达间充质干细胞相关标志物,具有多向分化潜能,在特定条件下能够向骨、脂肪、软骨、肌腱、神经以及胰岛等多胚层组织器官分化,可能成为组织器官构建的种子细胞来源。现将真皮成纤维细胞的多向分化潜能研究现状进行综述。

胚胎干细胞源表皮样干细胞分化潜能的初步研究

目的 探讨胚胎干细胞 (ES)源表皮样干细胞的分化潜能 ,为研究其分化的调控及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。 方法 将Hoechst33342标记或未标记的小鼠ES细胞 ,与人羊膜共培养 4d ,诱导其定向分化为表皮样干细胞克隆 ,胰酶消化后移植于裸鼠皮下 ,10、2 0、30和 4 5d ,对移植后细胞的分化进行形态学和免疫组织化学观察分析。 结果 10～ 2 0d后 ,标记的细胞可分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状或泡状结构 ,它们分别呈 β1 整合素、CK19、CK15、PK、套膜蛋白 (involucrin)和CEA阳性 ;移植 4 5d后 ,可见角化复层扁平上皮、皮脂腺样、汗腺样和毛囊样等组织结构。 结论 小鼠ES源表皮样干细胞具有分化为角化复层扁平上皮和毛囊样、汗腺样和皮脂腺样等结构的潜能。