教师魅力:一种潜隐的教育力量

教师魅力是由教师的综合素质构成的,是促使学生产生积极态度的一种吸引力、感召力和凝聚力。教师魅力是一种不能直接显现的存在,是在人们未加以注意时发挥潜移默化的作用的教育资源。这种无形的教育资源能使学习者在信仰、行为以及目标实现方面无条件接受教师的影响,可以使学生在不知不觉中对教师产生信任与尊敬。近年研究表明,教师魅力有助于创设愉悦的学习环境,实现无形的柔性管理,为学生起到榜样示范,改善学习成绩,促进学生心理向积极健康方向发展。教师魅力的成因取决于外源性因素与内在功夫两个方面。外源性因素是指教师的社会地位、教师的工作条件和整个社会尊师重教的风气;内在功夫是指教师的理论素养、专业素质,教师的人格因素与教师不断探索与创新的精神。教师可以从自我形象塑造、丰富学识、锤炼语言、提高教学技能和修炼自身的品性等五个方面获得和提升自己的魅力。

TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测西瓜潜隐病毒

【目的】西瓜潜隐病毒(Citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年来新发生的一种重要种传病害,研究旨在建立基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes,TaqMan-qPCR)检测技术,为开展种子、种苗带毒鉴定和病害防控提供技术支撑。【方法】通过基于小RNA高通量测序技术在北京西瓜产地发现了CiLCV,并克隆CiLCV的dsRNA1和dsRNA2全长序列,设计特异性引物建立RT-PCR和TaqMan-qPCR检测方法。以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottled mosaic virus)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus)、甜瓜内源病毒(Cucumis melo endornavirus)、瓜类褪绿病毒(cucurbit chlorotic yellows virus)、南瓜花叶病毒(squash mosaic virus)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus)、西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus)、小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus)8种常见病毒为对照进行检测方法特异性分析;利用建立的实时荧光定量标准曲线对方法灵敏度进行评价;进一步利用TaqMan-qPCR和RT-PCR技术监测我国葫芦科作物主产区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗带毒情况。【结果】通过分析获得的高质量小RNA数据,发现17条组装的contig与CiLCV基因组有较好同源性。进一步克隆获得CiLCV的dsRNA1和dsRNA2序列全长(分别为1603和1466 nt),发现其与河南省鉴定出的CiLCV同源性高达99.4%和99.8%(GenBank number KY081285、KY081284)。建立的RT-PCR检测技术对CiLCV有单一扩增条带;建立的TaqMan-qPCR检测技术具有较好特异性和灵敏度,且能够检测到最低拷贝数为2×10^(3)的病毒,灵敏度是RT-PCR的100倍。同时,发现有1份来自北京的西瓜种苗检出了CiLCV,而其余地区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗均未检出该病毒,表明我国葫芦科作物主产区种苗带毒情况总体不高。【结论】建立的TaqMan-qPCR检测CiLCV技术特异性强、灵敏度高,适用于口岸和实验室开展CiLCV快速检测和精准鉴定。鉴于CiLCV可以通过种子、种苗等传播方式快速扩散,我国应重视种子、种苗的带毒检测,防止带毒种子、种苗流入生产环节进而调运扩散至全国,给产业造成重大经济损失。

应用RT-PCR分子检测技术快速检测大蒜普通潜隐病毒

根据大蒜普通潜隐病毒(Garlic common latent virus,GCLV)的外壳蛋白区域的保守序列设计合成一对寡核苷酸引物,以带毒植物的总RNA为模板,进行反转录和PCR扩增,通过反应体系和反应程序的建立与优化,扩增得到长300 bp的目的片段,并将目的片段转入大肠杆菌进行了克隆和序列测定。测序结果与GenBank中其他GCLV相应区域的序列同源性最高达98%。并对其检测的特异性和灵敏度进行了验证,从而建立了快速、灵敏、特异性强的GCLV分子生物学检测方法。

逆转录环介导等温扩增技术检测草莓潜隐环斑病毒的研究

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspot virus,SLRSV)检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65℃等温扩增,整个检测周期约1.5h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。

应用多重RT-PCR检测甘肃‘成县迟蒜’中的大蒜潜隐病毒和洋葱黄矮病毒

根据大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)和洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)的外壳蛋白基因核苷酸序列分别设计2对特异性引物,在单重RT-PCR检测的基础上,建立同时检测GLV和OYDV的多重RT-PCR技术体系.结果表明:该方法可从带病的甘肃‘成县迟蒜’大蒜样品中扩增出GLV(849bp)和OYDV(571bp)的2条特异性片段.GLV扩增产物与GenBank中登录的其他分离物核苷酸同源性在90.00%～99.76%,OYDV扩增产物与其他分离物核苷酸的同源性为90.00%～98.00%.

桃潜隐花叶类病毒中国分离株P_3的克隆与序列分析

本研究以提取的类病毒cRNA为模板,采用RT-PCR方法,从5株表现明显花叶症状的'雨花露'桃树上检测到桃潜隐花叶类病毒(PLMVd),并对其中的样品P3通过2次RT-PCR扩增,然后分别将扩增产物回收、克隆测序,确定了该分离株(命名为PLMVd-P3分离株)的全长核苷酸序列,其cDNA分子全长为337 nt,这与已经报道的PLMVd典型分离株基因组大小相似.序列比较分析结果表明,该分离株与已经报道的不同地区来源的其它分离株相似性为90%～96%.

应用RT-PCR检测水仙潜隐病毒

根据已报道的水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus,NLV)外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列,设计一对特异性引物,以提取的水仙样品总RNA为模板进行RT-PCR,并进行特异性和灵敏度测定。结果表明,此法能够从携带NLV的水仙样品中成功扩增出大小约829 bp的特异性目的片段,具有良好的特异性和较高的灵敏度,可有效地应用于水仙样品中NLV的检测。

糖链抗原19－9放免测定对诊断胃肠道潜隐癌的价值

对胃肠道潜隐癌、癌前病变和炎性病变各３０例患者术前的糖链抗原（ＣＡ）１９－９水平进行回顾性分析，发现３组之间或两两比较均有明显差异。发现＜３７ｕ／ｍｌ者９７．４４％为良性病变，＞９０ｕ／ｍｌ者９４．４４％为恶性病变。３７～９０ｕ／ｍｌ之间者复查前后对比，癌变组血清ＣＡ１９－９水平平均升高１４．４２ｕ／ｍｌ，良性病变组平均下降９．６２ｕ／ｍｌ。提示对经内镜活组织检查未被证实的可疑胃肠道肿瘤患者，常规ＣＡ１９－９放免测定有助于发现胃肠道潜隐癌。

苹果潜隐病毒(Latent virus)研究——Ⅱ.苹果品种和矮生砧木潜隐病毒鉴定

在1980—1985年,对我国主要苹果产区的潜隐病毒种类进行调查鉴定,基本明确渤海湾果区、黄河故道果区和西北高原果区主栽苹果品种普遍潜带褪绿叶斑病毒、茎痘病毒和茎沟病毒,未检出其他病毒。营养系矮生砧木也普遍潜带这三种病毒。解决潜隐病毒为害的主要途径是培育无病毒母本树,栽培无病毒苗木。这方面的研究工作正在进行中。

甘薯潜隐病毒外壳蛋白基因的克隆、表达及其抗血清的制备

根据已报道的甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus,SPLV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR方法克隆了SPLV河南分离物(SPLV-HN)的CP基因及部分3′端非编码区序列,序列分析表明,SPLV-HN CP基因由879个核苷酸组成(GenBank登录号为DQ399862),编码293个氨基酸残基。与GenBank中SPLV-CH(X84011)和SPLV-T(X84012)分离物的核苷酸序列相似性分别为96.8%和93.0%;与日本分离物(E15420)的核苷酸序列相似性为83.6%。将CP基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPLV外壳蛋白的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甘薯样品的检测。

应用分析双链RNA技术诊断苹果潜隐性病毒病

本文报导一种以分析病毒双链RNA为依据,检测苹果潜隐性病毒的新方法。这种方法能快速、准确地从苹果组织中分离和分析病毒的双链RNA(ds RNA),因此能直接、有效地从病毒侵染的组织诊断苹果潜隐性病毒。双链RNA是从自然侵染的苹果叶片或花瓣用酚萃取,经CF-11纤维素层析纯化,再用6％聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴乙锭或银盐染色分析ds RNA电泳图谱。经脱毒的苹果树叶片,未发现有病毒的ds RNA存在。文中还报导了使用这一技术诊断苹果潜隐性病毒的有关技术条件。

水仙潜隐病毒病病原鉴定

在中国水仙主产区水仙病毒病的系统调查中,从无症和褪绿斑驳的病叶中分离到3个分离物NC、Ⅱ-3和Ⅹ-3.经人工根接和汁液摩擦接种在昆诺藜和千日红上,表现为局部枯斑;在番杏和苋色藜上,表现为局部褪绿或局部褪绿白斑;在克利夫兰烟和菜豆上产生系统褪绿;而对曼陀罗、豇豆和裂叶牵牛则不侵染。电镜观察病原病毒为635～660nm×13nm的线状粒体。体外抗性测定表明:TIP为65～70℃、DEP为10^(-2)～10^(-3),而LIV为3天。ELISA测定结果与来自荷兰水仙上的NLV标准抗血清起阳性反应。这些结果表明,3个分离物为同一病原,均属水仙潜隐病毒(NLV)。

苹果潜隐病毒的研究——Ⅱ.苹果茎沟槽病毒对苹果生理生化的影响

用金冠、富士二品种幼苗接种茎沟槽病毒(SGV)后,分期测定蛋白质、核酸、DNA、总氮、氨基酸、可溶性糖、铁和锌含量。结果表明:受SGV侵染的植株,核酸、蛋白质含量下降;DNA、总氮、游离氨基酸含量增加;铁含量增加,锌含量减少,可溶性糖含量增加。

两种苹果潜隐病毒脱毒技术研究

该文应用热处理、热处理加茎尖组织培养以及在培养基中加入抗病毒药剂等方法，脱除了苹果优系短枝富士的苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）和苹果茎沟病毒（ＳＧＶ），从而获得无潜隐病毒苗木。

苹果潜隐病毒的研究——苹果主栽品种脱毒研究

西北地区的苹果主要栽培品种都普遍带有苹果潜隐病毒,其带毒株率高达80—100%。1985—1988年在37±1℃的恒温下、热处理28天,对苹果主要栽培品种进行了脱毒研究。目前,已培育出金冠、红星、红富士和秦冠的无毒母树。

福建口岸从英国进境水仙种球上截获南芥菜花叶病毒和水仙潜隐病毒

2011年11月，福建出入境检验检疫局技术中心对一批英国进境水仙种球进行检疫，采用ELISA初筛，RT—PCR及序列测定确认的方法，从中同时检出南芥菜花叶病毒（Arabis mosaic virus，ArMV）和水仙潜隐病毒（Narcissus latent virus，NLV）。这2种植物病毒均为福建局首次检出。

苹果潜隐病毒的研究——Ⅲ.茎沟槽病毒对苹果内源激素的影响

用LC—6A高效液相色谱仪测试富士二年生苹果苗的三种内源激素。结果表明:受茎沟槽病毒侵染植株GA_3、CTK及IAA,三种内源激素的含量均较对照(无毒植株)低。GA_3降低最显著,比无毒植株低111.18％,CTK比无毒株低19.66％,IAA比无毒株低17.69％。

啤酒花潜隐病毒新疆分离物的全基因组序列分析

对新疆啤酒花上获得的HpLV分离物HpLV-XJ进行了全长克隆和基因组序列分析。结果显示:HpLV-XJ的全基因组序列为8612个核苷酸(nt)(不包括poly A),含有6个开放阅读框(ORF),分别编码224 kDa(ORF1)、25kDa(ORF2)、11 kDa(ORF3)、7 kDa(ORF4)、34 kDa(ORF5)、和12 kDa(ORF6)蛋白。序列相似性分析结果表明,HpLV-XJ与HpLV(GenBank:AB032469)序列相似性达98.5%,6个开放阅读框的核苷酸序列相似性分别为98.3%、99.0%、97.6%、96.7%、99.5%和98.4%;由此推导的氨基酸序列相似性分别为98.6%、98.7%、97.2%、95.0%、99.4%和98.1%,各个基因的核苷酸序列和蛋白的氨基酸之间存在着一定的差异。

接种和检测苹果潜隐病毒

通过试管微嫁接,分别将苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒接种到小金海棠组培苗上,并用PAS-ELISA法检测其带毒率。结果表明:接穗小金海棠苹果褪绿叶斑病毒的带毒率为60.0％,其苹果茎沟病毒带毒率为73.3％,从而证明用此方法可以对组培苗进行快速病毒接种而得到带毒的实验材料。