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潮霉素B抗性基因在木醋杆菌中的整合表达 被引量:1
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作者 闵勇 吴顺清 +6 位作者 朱海云 方北松 万中义 王开梅 吴昊 陈华 杨自文 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第12期3064-3066,共3页
以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传... 以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传代稳定,潮霉素抗性有了较大的提高,从100μg/mL提高到了400μg/mL以上,而产纤维素能力只略有下降。 展开更多
关键词 潮霉素b抗性基因 接合转移 整合表达 木醋杆菌
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具有潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备 被引量:1
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作者 张梅英 李华 +8 位作者 董婉维 杨葳 秦英 汪瑛 周生来 于洋 王惟 王太一 王禄增 《实验动物与比较医学》 CAS 2005年第3期131-135,191,共6页
目的建立具有潮霉素B(hygromycin B)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2 -human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B 磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物... 目的建立具有潮霉素B(hygromycin B)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2 -human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B 磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和Southern blot鉴定。结果经300 μg/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southern blot 鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。结论本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES 细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。 展开更多
关键词 NIH3T3细胞 潮霉素b磷酸转移酶基因 转染 潮霉素b抗性 ES细胞
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具潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备
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作者 张梅英 李华 +8 位作者 董婉维 杨葳 秦英 汪瑛 周生来 于洋 王惟 王太一 王禄增 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第S1期57-58,共2页
[目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物... [目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和southernblot鉴定。[结果]经300ug/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。[结论]本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。 展开更多
关键词 NIHNIH3T3细胞 潮霉素b磷酸转移酶基因 转染 潮霉素b抗性 ES细胞
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根癌农杆菌介导的深绿木霉菌T23遗传转化研究 被引量:8
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作者 孙文良 胡晓璐 +3 位作者 吴萌章 陈捷 刘鹏 陈云鹏 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2009年第5期489-493,共5页
采用根癌农杆菌介导的方法,成功地建立了丝状生防真菌深绿木霉(Trichoderma atroviride)菌株T23的遗传转化体系。并且,通过提高筛选培养基中潮霉素B的浓度和调整农杆菌的培养时间,对转化体系作了进一步的优化。转化效率约为50个突变体/... 采用根癌农杆菌介导的方法,成功地建立了丝状生防真菌深绿木霉(Trichoderma atroviride)菌株T23的遗传转化体系。并且,通过提高筛选培养基中潮霉素B的浓度和调整农杆菌的培养时间,对转化体系作了进一步的优化。转化效率约为50个突变体/107个分生孢子。所有转化子经继代培养5代,潮霉素B抗性筛选后,共得到118个遗传稳定的转化子。随机抽取部分转化子,进行PCR和Southern blot分子鉴定,结果证实外源的T-DNA已经随机整合到T23的基因组中。通过形态学观察,筛选出3个在产孢量和菌丝体生长速度方面显著不同于野生型菌株T23的转化子。农杆菌介导的遗传转化方法在深绿木霉菌株T23上的成功运用,将为研究该菌的功能基因组提供强有力的工具。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 深绿木霉 转化子 遗传稳定 潮霉素b抗性
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基因枪法遗传转化双孢蘑菇菌褶 被引量:6
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作者 曹育博 刘天翔 +4 位作者 周巍巍 高玉千 戚元成 申进文 邱立友 《食用菌学报》 北大核心 2011年第3期9-11,共3页
以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)2793为试材,采用基因枪法对其菌褶进行遗传转化,相对转化率为2.69%,转化子经PCR检测表明,外源潮霉素B抗性基因已经被转入到菌丝体中。
关键词 双孢蘑菇 基因枪 遗传转化 潮霉素b抗性
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赤霉菌原生质体DNA转化 被引量:6
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作者 朱平 杨金玲 +1 位作者 朱慧新 程克棣 《菌物系统》 CSCD 北大核心 2000年第2期283-287,共5页
Methods for the protoplast preparation and DNA transformation of Gibberella fujikuroi were established. The protoplasts were transformed with plasmid pAN7-1, which carries hygromycin B resistant gene (hPh), and the tr... Methods for the protoplast preparation and DNA transformation of Gibberella fujikuroi were established. The protoplasts were transformed with plasmid pAN7-1, which carries hygromycin B resistant gene (hPh), and the transformation frequency was about 10. Some transformants grew vigorously on the selectivemedium containing 400μg / ml of hygromycin B, while the minimum inhibitory concentration (MIC) of the antibiotic to the recipient strain was oniy 20μg / ml. Southern hybridization showed that the hph gene has integrated into the genomic DNA of the recipient strain in different manners. 展开更多
关键词 赤霉菌 原生质体 DNA转化 潮霉素b抗性基因
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含绿色荧光蛋白标记的木霉表达载体的构建 被引量:2
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作者 吕天晓 李世贵 +2 位作者 顾金刚 姜瑞波 牛永春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期125-129,共5页
ACCC 30150是由本实验室筛选的一株对黄瓜枯萎病、青椒疫病等多种土传病害具有较好防治效果的长柄木霉生防菌,为研究其在蔬菜根际的定殖情况,本试验将含绿色荧光蛋白(GFP)和潮霉素B抗性的融合基因交换整合到真核表达骨架载体pNOM102上... ACCC 30150是由本实验室筛选的一株对黄瓜枯萎病、青椒疫病等多种土传病害具有较好防治效果的长柄木霉生防菌,为研究其在蔬菜根际的定殖情况,本试验将含绿色荧光蛋白(GFP)和潮霉素B抗性的融合基因交换整合到真核表达骨架载体pNOM102上。通过酶切鉴定和测序鉴定证明目的片段与载体片段连接正确,木霉表达载体pNOM102-HygEGFP构建成功,为下一步进行生防木霉根际定殖研究奠定基础。 展开更多
关键词 载体构建 绿色荧光蛋白 潮霉素b抗性 表达载体 木霉
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丝状真菌转化载体的改进 被引量:2
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作者 李继刚 陈永利 +1 位作者 杨忠祥 郑建坡 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第5期110-113,共4页
为了改进农杆菌介导丝状真菌遗传转化用的Ti双元载体,将质粒pUCATPH上真菌trpC基因启动子驱动的潮霉素B抗性基因(hygB)表达盒转移到Ti质粒pPZP111上,构建成用于丝状真菌遗传转化的Ti载体pATZ。将植物表达载体pDL916上的草丁膦抗性bar基... 为了改进农杆菌介导丝状真菌遗传转化用的Ti双元载体,将质粒pUCATPH上真菌trpC基因启动子驱动的潮霉素B抗性基因(hygB)表达盒转移到Ti质粒pPZP111上,构建成用于丝状真菌遗传转化的Ti载体pATZ。将植物表达载体pDL916上的草丁膦抗性bar基因重组到载体pKS-trpC上,构建成含真菌启动子、终止子调控的bar基因表达盒的中间载体pTrpCBar;之后将该表达盒转移到pPZP111载体上,得到以bar基因为筛选标记的真菌转化Ti质粒pTBZ。上述质粒载体经酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,为丝状真菌的农杆菌介导遗传转化提供了新的工具。 展开更多
关键词 农杆菌介导转化 丝状真菌 转化载体 草丁膦基因bar 潮霉素b抗性基因hygb 真菌启动子
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一种农杆菌介导的赤霉菌CCRC3.572的转化方法 被引量:2
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作者 郝丽梅 龚伟 +2 位作者 梅兴国 刁志花 曾瑞红 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期888-890,共3页
目的:建立农杆菌Ti质粒介导的转化赤霉菌的新方法。方法:以农杆菌Ti质粒pCAMBIA0390为基础,构建带有潮霉素抗性基因表达盒的双元载体,并用农杆菌介导的方法转化赤霉菌。结果:构建了双元载体pCAMBIA0390-hph(PgpdA),并获得了具有潮霉素... 目的:建立农杆菌Ti质粒介导的转化赤霉菌的新方法。方法:以农杆菌Ti质粒pCAMBIA0390为基础,构建带有潮霉素抗性基因表达盒的双元载体,并用农杆菌介导的方法转化赤霉菌。结果:构建了双元载体pCAMBIA0390-hph(PgpdA),并获得了具有潮霉素抗性的赤霉菌转化子。结论:农杆菌介导的方法适于赤霉菌的转化,为赤霉菌的遗传研究提供了一种新的手段。 展开更多
关键词 赤霉菌 农杆菌 双元载体 转化 潮霉素b抗性基因
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木霉双价基因表达载体的构建
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作者 陈凯 李纪顺 +2 位作者 李红梅 魏艳丽 杨合同 《中国农学通报》 CSCD 2014年第9期232-236,共5页
利用几丁质酶基因和β-1,4-葡聚糖酶基因构建双价基因表达载体,为木霉转化奠定基础。利用限制性内切酶酶切得到目的基因片段,通过T4 DNAligase将基因插入表达框中,并采用PCR、酶切和核苷酸序列分析验证双价基因表达载体的正确性。利用... 利用几丁质酶基因和β-1,4-葡聚糖酶基因构建双价基因表达载体,为木霉转化奠定基础。利用限制性内切酶酶切得到目的基因片段,通过T4 DNAligase将基因插入表达框中,并采用PCR、酶切和核苷酸序列分析验证双价基因表达载体的正确性。利用启动子CaMV35S和终止子PolyA构建几丁质酶基因chi42的表达框,获得表达载体pC1302-C42;利用启动子CaMV35S和终止子Nos构建β-1,4-葡聚糖酶基因glu14的表达框,获得表达载体pC1300-2-G14;在单基因表达载体的基础上,通过串联构建双价基因表达载体pC1300-2-G14-C42,该表达载体含有潮霉素B抗性基因。经检测证实表达元件35S-chi42-PolyA和35S-glu14-Nos连接成功。得到的双价基因表达载体pC1300-2-G14-C42可直接用于木霉等丝状真菌的遗传转化,为构建木霉广谱高效工程菌株奠定基础。 展开更多
关键词 木霉 双价基因表达载体 几丁质酶基因 β-1 4-葡聚糖酶基因 潮霉素b抗性
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提高根癌农杆菌介导黑曲霉转化效率的研究 被引量:11
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作者 曹张磊 王德培 张岚 《天津科技大学学报》 CAS 北大核心 2016年第2期20-25,共6页
为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导黑曲霉(Aspergillus niger)转化(ATMT)效率,本文对影响转化效率的分生孢子与农杆菌的比例、转化媒介、诱导溶氧、诱导时间、诱导时乙酰丁香酮(AS)浓度这5个因素进行单因素实验,最终确... 为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导黑曲霉(Aspergillus niger)转化(ATMT)效率,本文对影响转化效率的分生孢子与农杆菌的比例、转化媒介、诱导溶氧、诱导时间、诱导时乙酰丁香酮(AS)浓度这5个因素进行单因素实验,最终确定提高其转化效率的最优条件为:根癌农杆菌诱导过程在400,μmol/L乙酰丁香酮终浓度条件下,100,m L三角瓶中28,℃、100,r/min振荡培养5,h,分生孢子与根癌农杆菌的比例为1﹕100,在硝酸纤维膜媒介上24,℃共培养48,h.在此优化条件下,黑曲霉的转化效率达到35个/107分生孢子.相比于优化前,转化效率提升了78%,,并且整合至黑曲霉基因组的外源潮霉素B抗性基因在转接15代以后仍能稳定遗传. 展开更多
关键词 黑曲霉 根癌农杆菌 潮霉素b抗性
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