龙葵茎叶中澳洲茄碱及澳洲茄边碱的超声辅助提取工艺优化

以龙葵茎叶提取物为原料,考察提取时间、料液比、乙醇浓度、水解酸种类及浓度等因素对澳洲茄碱、澳洲茄边碱提取率的影响。结果表明:以乙醇为提取溶剂,超声辅助提取,最佳提取工艺为,乙醇浓度80%、提取时间60 min、提取温度40℃、料液比1∶20,在此条件下,龙葵茎叶中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量分别为0.229%、0.141%;以10%硫酸乙醇作为提取溶剂,在料液比1∶20、提取时间60 min、提取温度80℃条件下,澳洲茄碱与澳洲茄边碱提取率分别为0.275%、0.168%,与乙醇提取相比,提取率分别提高1.2、1.19倍。实验证明:酸水解可提高龙葵茎叶中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的提取率。

澳洲茄碱对肺癌A549细胞生物活性、瘤体抑制及MAPK/ERK1/2的影响

目的澳洲茄碱对肺癌A549细胞生物活性、瘤体抑制及MAPK/ERK1/2信号的影响。方法将人肺癌细胞株A549分为空白组、低剂量澳洲茄碱组、中剂量澳洲茄碱组、高剂量澳洲茄碱组及顺铂组,分别加入浓度为0、15、20、25μmol/L的澳洲茄碱及2μg/mL顺铂培养。MTT检测活性;流式细胞仪检测凋亡率;Transwell法检测侵袭;划痕试验检测划痕愈合率。25只裸鼠分为空白组、低剂量澳洲茄碱组、中剂量澳洲茄碱组、高剂量澳洲茄碱组及顺铂组,皮下注射0.3 mL的0、15、20、25μmol/L的澳洲茄碱及2μg/mL顺铂共培养A549细胞,观察瘤体质量及抑瘤率。结果澳洲茄碱组降低A549细胞活性,凋亡率升高,侵袭、划痕愈合率、MAPK、p-MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平降低(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制肺癌细胞增殖、侵袭及转移,并加快凋亡,作用呈现剂量依赖性且高剂量效果最佳,研究机制可能与抑制MAPK/ERK1/2信号表达相关。

澳洲茄碱的抗肿瘤活性及其机制研究进展

澳洲茄碱(SS)是一种天然来源的生物活性小分子化合物,已经被证实具有抗菌、抗炎和抗肿瘤等功效。在抗肿瘤作用方面,SS可以通过多种机制在不同类型肿瘤中有效发挥抗肿瘤作用,其作用机制包括诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、诱导肿瘤细胞铁死亡、调控肿瘤相关非编码RNA、调节免疫和炎症反应、削弱肿瘤细胞的侵袭和转移能力、抑制糖酵解进程和肿瘤干细胞的产生等,涵盖了肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胆管癌、膀胱癌、胰腺癌、白血病、骨肉瘤等多种癌症类型。阐明SS在不同类型肿瘤中的抗肿瘤活性及其作用机制,为促进SS抗肿瘤作用机制的进一步研究和开发更有效安全的抗肿瘤药物提供了重要的理论基础。

澳洲茄碱抗肿瘤作用及机制研究进展

综述澳洲茄碱(solasonine)抗肿瘤作用及其机制的研究进展。澳洲茄碱对于肝癌、胃癌、肺癌、白血病、胰腺癌和大肠癌等疾病具有抗肿瘤作用,可以抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡、抑制癌细胞迁移侵袭、诱导铁死亡、抑制糖酵解和降低癌细胞耐药性,可以调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)通路、Hh信号通路、核因子-κB(NF-κB)通路、丝裂原活化蛋白激酶(AMPK)通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路等的信号转导。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

澳洲茄碱通过MAPK/ERK信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨澳洲茄碱对肝癌细胞增殖活性的影响及对丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调节作用。方法:取对数生长期的HepG2细胞随机分为对照组、澳洲茄碱组(以50μmol/L澳洲茄碱处理细胞)、激活剂组[以20μmol/L异丙肾上腺素(ISO)处理细胞]和激活剂+澳洲茄碱组(20μmol/L ISO处理细胞24 h后,以50μmol/L澳洲茄碱处理),24 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹法检测磷酸化ERK(p-ERK)、ERK、丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MEK)和磷酸化MEK(p-MEK)蛋白相对表达量。结果:与0μmol/L澳洲茄碱比较,10、20、30、40及50μmol/L澳洲茄碱均可降低细胞存活率,差异均有统计学意义(P<0.05),且具浓度依赖性。与对照组比较,澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数减少;激活剂组细胞划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与澳洲茄碱组比较,激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与激活剂组比较,激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:澳洲茄碱可降低肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过抑制MAPK/ERK信号通路发挥调控作用。

澳洲茄碱对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的 研究澳洲茄碱对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、运动迁移能力的影响,以及对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路和P53蛋白的调节作用。方法 取对数生长期的MDA-MB-468细胞,用不同浓度澳洲茄碱处理,分别在24、48 h用CCK-8检测细胞活力,用划痕实验检测细胞的运动迁移能力,用克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blotting检测PI3K-AKT通路相关蛋白以及P53蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,不同浓度的澳洲茄碱均可降低三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞活力,抑制细胞增殖能力和运动迁移能力,降低划痕的愈合率,抑制细胞的克隆形成能力,引起PI3K、AKT、P53蛋白表达量降低,且其相关抑制作用具浓度依赖性。结论 澳洲茄碱能够抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移和克隆形成,其作用机制可能与调控PI3K-AKT信号通路以及P53蛋白的表达有关。

不同产地龙葵药材中澳洲茄碱量的分析研究

目的 测定龙葵中澳洲茄碱的量以评价不同产地龙葵药材质量。方法 采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），以乙腈-1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，柱温30℃，检测波长205nm。结果6个不同地区龙葵茎叶中澳洲茄碱的平均量在0．5445～1．5049mg／g；果实中澳洲茄碱的平均量在O．8555～3．4408mg／g。连云港灌南地区龙葵茎叶和果实中澳洲茄碱的量最高，分别为1．5049、3．4408mg／g；南京栖霞地区茎叶中量最低，为0．5445mg／g，南京江宁地区果实中量最低，为0．8555mg／g。结论 同一时期、不同产地龙葵药材茎叶和果实中澳洲茄碱量差异较大。

龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞侵袭及MMPs/TIMPs表达的影响

目的探讨龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞侵袭的影响及对基质金属蛋白酶(MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)表达的影响。方法以人肺癌细胞H1299细胞为研究对象,使用0、3、6、9、12、15μmol·L^(-1)浓度的澳洲茄碱作用于肺癌细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖情况。用0、3、6、9μmol·L^(-1)浓度的澳洲茄碱作用于肺癌细胞24 h,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,实时定量PCR检测细胞MMP-2、MMP-9、EMMPIN、TIMP-1、TIMP-2、RECK mRNA表达,Western blot检测PI3K、pPI3K、Akt、pAkt蛋白表达。结果 15μmol·L^(-1)澳洲茄碱作用于肺癌H1299细胞后,细胞存活率明显下降(P<0.05),12μmol·L^(-1)以下浓度的澳洲茄碱则无明显细胞毒性。不同浓度(3、6、9μmol·L^(-1))澳洲茄碱作用于肺癌细胞后,细胞迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。6、9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,MMP-2、MMP-9、EMMPIN mRNA表达明显下降(P<0.05);9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,TIMP-1、TIMP-2、RECK mRNA表达明显上升(P<0.05)。9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,pPI3K和pAkt蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制肺癌细胞侵袭,其机制可能与调控MMPs和TIMPs表达有关。

龙葵果保鲜技术对澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响

目的:研究龙葵果保鲜技术对其抗肿瘤成分澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响。方法:采用独特的龙葵果保鲜技术保存龙葵鲜果,并采用高效液相色谱法对龙葵干果和保鲜处理的鲜果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱进行含量测定,比较保鲜技术对其抗肿瘤有效成分含量的影响。结果:经保鲜技术处理的龙葵鲜果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量要比龙葵干果的含量高80%以上。结论:龙葵果保鲜技术可以明显提高龙葵药材中抗肿瘤有效成分的含量,值得推广使用。

24个产地龙葵中澳洲茄碱的含量测定

目的:对来自10个省市、24个产地的不同生境、生长周期的龙葵中澳洲茄碱进行分析。方法:采用HPLC,AgilentTC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);以乙腈-0.5%磷酸水溶液作为流动相,梯度洗脱;检测波长为203 nm;体积流量:0.9mL/min;柱温为30℃。结果:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大。尤以生境及生长周期对澳洲茄碱的含量影响最为显著。结论:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大,因此控制龙葵药材的来源及最佳采收期,以保证龙葵药材的质量。

龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定

目的:寻找可以作为评价龙葵药材质量的指标成分,提高龙葵药材的质量标准。方法:采用柱层析方法分离化学成分,应用光谱法进行结构鉴定,用高效液相色谱法测定其在龙葵药材不同部位的含量。结果:从龙葵药材中分离并鉴定了2个含量较高的甾体类生物碱苷澳洲茄碱(solasonine)和澳洲茄边碱(solamar-gine);建立了龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的HPLC含量测定方法。结论:这两种生物碱在龙葵药材中含量较高,可用于龙葵药材的质量控制。

澳洲茄碱诱导胆管癌QBC939细胞凋亡及作用机制

研究澳洲茄碱对人胆管癌上皮细胞系QBC939凋亡的诱导与作用机制。采用MTT法检测不同浓度澳洲茄碱对QBC939细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测澳洲茄碱对QBC939细胞的凋亡诱导情况;Western blot检测澳洲茄碱对QBC939细胞中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase3、caspase7、PARP、cleaved PARP)的表达影响。结果发现澳洲茄碱以浓度依赖方式能够抑制QBC939细胞的增殖;澳洲茄碱能够显著诱导QBC939细胞的凋亡;澳洲茄碱可以上调Bax、caspase3、caspase7和cleaved PARP蛋白表达,下调Bcl-2和PARP蛋白表达。表明澳洲茄碱能够通过改变凋亡相关蛋白表达,诱导胆管癌QBC939细胞的凋亡,这对于研发和治疗胆管癌相关药物具有一定的潜在价值。

澳洲茄碱对黑色素瘤细胞的抑制作用

目的:研究澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤细胞的抑制作用及其机制。方法:采用MTT法检测了澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤B16细胞株的抑制效果;以稍高于半致死剂量的澳洲茄碱处理B16细胞48h后,进行荧光定量PCR,分析药物及其溶媒对B16细胞中p53通路的激活情况。结果:澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤B16癌细胞有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖性;其48h IC50约为35μg/m L;SYBR绿色荧光定量PCR数据显示,澳洲茄碱的处理显著提高了癌细胞中p53通路的下游因子Puma基因的表达水平(P﹤0.05)。结论:澳洲茄碱能明显抑制黑色素瘤B16癌细胞的生长,并能显著激活p53通路,这很可能是导致黑色素瘤细胞死亡的主要原因。

澳洲茄碱和澳洲茄胺抑制肺癌细胞的构效比较

目的:探讨澳洲茄碱及其水解苷元澳洲茄胺对肺癌细胞抑制的构效关系。方法:MTT法检测澳洲茄碱及澳洲茄胺对A549和LLC细胞抑制作用;以20μg/m L的澳洲茄碱和8μg/m L澳洲茄胺分别处理A549细胞24h,观察细胞形态,并经定量PCR检测p53靶基因Bax和Puma表达水平。结果:对A549和LLC细胞,澳洲茄胺的24h IC_(50)大约都为7.5μg/m L,澳洲茄碱的大约都为19μg/m L。形态学观察表明澳洲茄胺和澳洲茄碱处理的A549细胞都呈现细胞膜皱缩的垂死形态。定量PCR数据显示,与溶媒相比澳洲茄碱及澳洲茄胺都显著提高了p53通路Puma基因表达水平(P<0.001和P<0.05)。结论:澳洲茄碱及澳洲茄胺对癌细胞抑制量效模式相同,有效部位是苷元,作用机制是诱导细胞死亡,分子机制可能是通过上调Puma表达而激活p53信号通路。

基于网络药理学探讨澳洲茄碱抗肿瘤机制

目的基于网络药理学,构建澳洲茄碱抗肿瘤的“靶点-通路”网络,探讨澳洲茄碱抗肿瘤的作用机制。方法通过TCMSP及Pharm Mapper收集澳洲茄碱潜在靶点,OMIM及Genecards数据库收集肿瘤疾病靶点,将澳洲茄碱潜在靶点与肿瘤疾病靶点交集,获得澳洲茄碱-肿瘤共同靶点。运用String数据库结合Cytoscape 3.7.2绘制澳洲茄碱-肿瘤共同靶点的蛋白相互作用网络图(PPI),筛选核心靶点。最后,基于R3.6.0软件用Bioconductor生物信息软件包,对澳洲茄碱-肿瘤共同靶点进行进行GO功能与KEGG通路富集分析。结果澳洲茄碱-肿瘤共同靶点79个,核心基因3个:IGF1R、MAP2K1、CHEK1。通路分析显示澳洲茄碱参与多条肿瘤相关通路的调控,主要涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、Ras信号通路等经典肿瘤信号通路。结论澳洲茄碱调控多个靶点,同一个靶点参与多个生物学过程和信号通路,澳洲茄碱可能通过多靶点、多通路发挥抗肿瘤作用。

自发性乳腺癌小鼠的引进及其应用于澳洲茄碱抗癌药效评价

为了引进自发性乳腺癌小鼠模型并应用于澳洲茄碱在体抗癌药效评价，试验自国家遗传改造小鼠资源库引入SPF级MMTV—PyMT雄雌种鼠并进行培育，培育成功后以0．8，1．6，3．2mg／mL浓度的澳洲茄碱及其溶剂以按体重100肛L／10g腹腔注射MMTV-PyMT阳性小鼠，结合瘤块内加注100μL，每周一、周四各注射一次，连续注射6周，并以游标卡尺测量瘤块大小。结果表明：引进的MMTV—PyMT自发性乳腺癌小鼠模型能正常繁育并能再现其乳腺癌发病的经典病程，在药效评估上，与对照组相比，以0．8，1．6mg／mL浓度的澳洲茄碱腹腔注射100μL／10g结合瘤块内注射100μL，瘤块生长抑制率分别为14％-22％（P=0．06或P〈0．05）和38％-44％（P〈0．05），而腹腔注射3．2mg／mL组6周死亡率为87．5％（7／8）。说明MMTv—PyMT自发性乳腺癌小鼠模型引进成功，并且可应用于抗癌药物澳洲茄碱在体药效评价研究。

澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨

背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。

龙葵中澳洲茄碱含量的动态规律

目的:通过研究龙葵不同产地、生长周期及药用部位中澳洲茄碱的动态规律,为进一步优化龙葵的采收期、药用部位及栽培提供依据。方法:采用HPLC,Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);以乙腈-0.5%磷酸水溶液作为流动相,梯度洗脱;检测波长为203 nm;体积流量:0.9 m L·min-1;柱温为30℃。结果:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地不同差异很大。龙葵地上部分澳洲茄碱含量的高低主要取决于所结果实的多少,以盛果期含量最高;不同成熟程度果实中澳洲茄碱含量的规律为:成熟果实<青果<幼果。结论:在龙葵的生长过程中,龙葵中澳洲茄碱的含量随着其生长发育进程而发生变化。根据龙葵不同生长阶段所含澳洲茄碱在各器官中的含量变化,龙葵的最佳采收期为盛果期,最佳药用部位为幼果和青果。

澳洲茄碱对压力超负荷诱导的小鼠心肌纤维化的影响

目的探讨澳洲茄碱(SS)对压力超负荷诱导的小鼠心肌纤维化(MF)的影响。方法使用主动脉缩窄术(AB)建立小鼠心肌纤维化模型,采用随机数字表法将40只8~10周雄性C57/B6小鼠随机分为假手术组、假手术+SS组、AB组、AB+SS组,每组10只。AB手术3周后,AB+SS组每天腹腔注射SS(10 mg/kg),AB组每天腹腔注射等量的生理盐水;假手术处理3周后,假手术+SS组每天腹腔注射SS(10 mg/kg),假手术组每天腹腔注射等量的生理盐水。腹腔注射1周后行心脏超声检测各组小鼠心功能[左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)及左室舒张末期内径(LVEDD)]并取材;采用天狼猩红染色观察各组心脏组织纤维化情况;采用qPCR法检测心肌纤维化标志物的mRNA表达水平;采用免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织中纤维化相关信号通路变化。向原代培养的大鼠成纤维细胞中分别加入磷酸缓冲盐溶液(PBS)、PBS+p38 MAPK抑制剂(SB203580)、PBS+SS、TGF-β1+PBS、TGF-β1+SB203580、TGF-β1+SS,24 h后收集细胞进行后续检测。结果本研究成功制备心肌纤维化小鼠模型。与AB组相比,AB+SS组的LVEF及LVFS水平明显升高(P<0.05),LVEDD水平明显降低(P<0.05);AB+SS组间质和血管周围胶原沉积程度高于AB组(P<0.05),AB+SS组的COL-1、COL-3和TGFβmRNA相对水平显著低于AB组(P<0.05);AB+SS组的p38 MAPK磷酸化水平低于AB组(P<0.05);体外细胞实验结果显示,TGF-β1+SS组和TGF-β1+p38 MAPK特异性抑制剂(SB203580)组的COL-1、COL-3、TGF-βmRNA水平显著低于TGF-β1+PBS组(均P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制p38 MAPK的磷酸化,进而改善压力超负荷诱导的小鼠心肌纤维化。