龙葵茎叶中澳洲茄碱及澳洲茄边碱的超声辅助提取工艺优化

以龙葵茎叶提取物为原料,考察提取时间、料液比、乙醇浓度、水解酸种类及浓度等因素对澳洲茄碱、澳洲茄边碱提取率的影响。结果表明:以乙醇为提取溶剂,超声辅助提取,最佳提取工艺为,乙醇浓度80%、提取时间60 min、提取温度40℃、料液比1∶20,在此条件下,龙葵茎叶中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量分别为0.229%、0.141%;以10%硫酸乙醇作为提取溶剂,在料液比1∶20、提取时间60 min、提取温度80℃条件下,澳洲茄碱与澳洲茄边碱提取率分别为0.275%、0.168%,与乙醇提取相比,提取率分别提高1.2、1.19倍。实验证明:酸水解可提高龙葵茎叶中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的提取率。

澳洲茄碱对肺癌A549细胞生物活性、瘤体抑制及MAPK/ERK1/2的影响

目的澳洲茄碱对肺癌A549细胞生物活性、瘤体抑制及MAPK/ERK1/2信号的影响。方法将人肺癌细胞株A549分为空白组、低剂量澳洲茄碱组、中剂量澳洲茄碱组、高剂量澳洲茄碱组及顺铂组,分别加入浓度为0、15、20、25μmol/L的澳洲茄碱及2μg/mL顺铂培养。MTT检测活性;流式细胞仪检测凋亡率;Transwell法检测侵袭;划痕试验检测划痕愈合率。25只裸鼠分为空白组、低剂量澳洲茄碱组、中剂量澳洲茄碱组、高剂量澳洲茄碱组及顺铂组,皮下注射0.3 mL的0、15、20、25μmol/L的澳洲茄碱及2μg/mL顺铂共培养A549细胞,观察瘤体质量及抑瘤率。结果澳洲茄碱组降低A549细胞活性,凋亡率升高,侵袭、划痕愈合率、MAPK、p-MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平降低(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制肺癌细胞增殖、侵袭及转移,并加快凋亡,作用呈现剂量依赖性且高剂量效果最佳,研究机制可能与抑制MAPK/ERK1/2信号表达相关。

澳洲茄碱的抗肿瘤活性及其机制研究进展

澳洲茄碱(SS)是一种天然来源的生物活性小分子化合物,已经被证实具有抗菌、抗炎和抗肿瘤等功效。在抗肿瘤作用方面,SS可以通过多种机制在不同类型肿瘤中有效发挥抗肿瘤作用,其作用机制包括诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、诱导肿瘤细胞铁死亡、调控肿瘤相关非编码RNA、调节免疫和炎症反应、削弱肿瘤细胞的侵袭和转移能力、抑制糖酵解进程和肿瘤干细胞的产生等,涵盖了肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胆管癌、膀胱癌、胰腺癌、白血病、骨肉瘤等多种癌症类型。阐明SS在不同类型肿瘤中的抗肿瘤活性及其作用机制,为促进SS抗肿瘤作用机制的进一步研究和开发更有效安全的抗肿瘤药物提供了重要的理论基础。

澳洲茄碱抗肿瘤作用及机制研究进展

综述澳洲茄碱(solasonine)抗肿瘤作用及其机制的研究进展。澳洲茄碱对于肝癌、胃癌、肺癌、白血病、胰腺癌和大肠癌等疾病具有抗肿瘤作用,可以抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡、抑制癌细胞迁移侵袭、诱导铁死亡、抑制糖酵解和降低癌细胞耐药性,可以调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)通路、Hh信号通路、核因子-κB(NF-κB)通路、丝裂原活化蛋白激酶(AMPK)通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路等的信号转导。

澳洲茄边碱诱导胶质母细胞瘤U251细胞凋亡的机制研究

目的 探讨澳洲茄边碱(SM)对胶质母细胞瘤U251细胞凋亡的影响及作用机制。方法 用SM(0,2,4,6,8μmol/L)处理细胞24 h,即溶剂对照组和SM 1组、2组、3组、4组。采用CCK-8法和克隆形成实验分别检测细胞活力和增殖能力,并计算细胞存活率和克隆形成率;采用Annexin V-FITC/PI双染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测凋亡相关蛋白表达水平;采用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和JC-1荧光探针分别检测U251细胞中活性氧水平和线粒体膜电位。结果 与溶剂对照组比较,U251细胞存活率和克隆形成率随SM浓度的增加均呈降低趋势(P <0.05),细胞凋亡率呈升高趋势(P <0.01);经SM处理后,细胞剪切多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶、剪切胱天蛋白酶3蛋白表达水平及细胞内活性氧水平均呈升高趋势(P <0.05),线粒体膜电位呈降低趋势(P <0.01)。结论 SM可能通过激活线粒体介导的细胞凋亡通路,从而抑制胶质母细胞瘤U251细胞活性。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

不同产地龙葵药材中澳洲茄碱量的分析研究

目的 测定龙葵中澳洲茄碱的量以评价不同产地龙葵药材质量。方法 采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），以乙腈-1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，柱温30℃，检测波长205nm。结果6个不同地区龙葵茎叶中澳洲茄碱的平均量在0．5445～1．5049mg／g；果实中澳洲茄碱的平均量在O．8555～3．4408mg／g。连云港灌南地区龙葵茎叶和果实中澳洲茄碱的量最高，分别为1．5049、3．4408mg／g；南京栖霞地区茎叶中量最低，为0．5445mg／g，南京江宁地区果实中量最低，为0．8555mg／g。结论 同一时期、不同产地龙葵药材茎叶和果实中澳洲茄碱量差异较大。

龙葵果保鲜技术对澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响

目的:研究龙葵果保鲜技术对其抗肿瘤成分澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响。方法:采用独特的龙葵果保鲜技术保存龙葵鲜果,并采用高效液相色谱法对龙葵干果和保鲜处理的鲜果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱进行含量测定,比较保鲜技术对其抗肿瘤有效成分含量的影响。结果:经保鲜技术处理的龙葵鲜果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量要比龙葵干果的含量高80%以上。结论:龙葵果保鲜技术可以明显提高龙葵药材中抗肿瘤有效成分的含量,值得推广使用。

龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞侵袭及MMPs/TIMPs表达的影响

目的探讨龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞侵袭的影响及对基质金属蛋白酶(MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)表达的影响。方法以人肺癌细胞H1299细胞为研究对象,使用0、3、6、9、12、15μmol·L^(-1)浓度的澳洲茄碱作用于肺癌细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖情况。用0、3、6、9μmol·L^(-1)浓度的澳洲茄碱作用于肺癌细胞24 h,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,实时定量PCR检测细胞MMP-2、MMP-9、EMMPIN、TIMP-1、TIMP-2、RECK mRNA表达,Western blot检测PI3K、pPI3K、Akt、pAkt蛋白表达。结果 15μmol·L^(-1)澳洲茄碱作用于肺癌H1299细胞后,细胞存活率明显下降(P<0.05),12μmol·L^(-1)以下浓度的澳洲茄碱则无明显细胞毒性。不同浓度(3、6、9μmol·L^(-1))澳洲茄碱作用于肺癌细胞后,细胞迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。6、9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,MMP-2、MMP-9、EMMPIN mRNA表达明显下降(P<0.05);9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,TIMP-1、TIMP-2、RECK mRNA表达明显上升(P<0.05)。9μmol·L^(-1)澳洲茄碱处理后,pPI3K和pAkt蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制肺癌细胞侵袭,其机制可能与调控MMPs和TIMPs表达有关。

24个产地龙葵中澳洲茄碱的含量测定

目的:对来自10个省市、24个产地的不同生境、生长周期的龙葵中澳洲茄碱进行分析。方法:采用HPLC,AgilentTC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);以乙腈-0.5%磷酸水溶液作为流动相,梯度洗脱;检测波长为203 nm;体积流量:0.9mL/min;柱温为30℃。结果:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大。尤以生境及生长周期对澳洲茄碱的含量影响最为显著。结论:龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大,因此控制龙葵药材的来源及最佳采收期,以保证龙葵药材的质量。

龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定

目的:寻找可以作为评价龙葵药材质量的指标成分,提高龙葵药材的质量标准。方法:采用柱层析方法分离化学成分,应用光谱法进行结构鉴定,用高效液相色谱法测定其在龙葵药材不同部位的含量。结果:从龙葵药材中分离并鉴定了2个含量较高的甾体类生物碱苷澳洲茄碱(solasonine)和澳洲茄边碱(solamar-gine);建立了龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的HPLC含量测定方法。结论:这两种生物碱在龙葵药材中含量较高,可用于龙葵药材的质量控制。

澳洲茄碱诱导胆管癌QBC939细胞凋亡及作用机制

研究澳洲茄碱对人胆管癌上皮细胞系QBC939凋亡的诱导与作用机制。采用MTT法检测不同浓度澳洲茄碱对QBC939细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测澳洲茄碱对QBC939细胞的凋亡诱导情况;Western blot检测澳洲茄碱对QBC939细胞中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase3、caspase7、PARP、cleaved PARP)的表达影响。结果发现澳洲茄碱以浓度依赖方式能够抑制QBC939细胞的增殖;澳洲茄碱能够显著诱导QBC939细胞的凋亡;澳洲茄碱可以上调Bax、caspase3、caspase7和cleaved PARP蛋白表达,下调Bcl-2和PARP蛋白表达。表明澳洲茄碱能够通过改变凋亡相关蛋白表达,诱导胆管癌QBC939细胞的凋亡,这对于研发和治疗胆管癌相关药物具有一定的潜在价值。

澳洲茄边碱对前列腺癌细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的研究澳洲茄边碱(solamargine,SM)对人前列腺癌激素非依赖细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法用不同浓度SM(0、1、2、4、6、8、10μmol/L)处理DU145和PC3细胞,MTT法检测SM对细胞生长的影响,Western blot检测SM对相关信号通路蛋白p38 MAPK、ERK1/2 MAPK、MUC1表达的影响。结果 6μmol/L SM作用24h后DU145和PC3细胞活力分别为(52.53±9.05)%、(56.28±2.36)%,并具有时间和剂量依赖;10μmol/L SM作用24h后细胞活力分别为(27.36±2.72)%、(32.07±2.53)%。流式细胞术分析显示不同浓度SM(0、4、6、8μmol/L)处理PC3细胞能引起PC3细胞阻滞在G1期,G1期细胞比例分别为(52.61±0.50)%、(52.96±1.49)%、(66.16±2.84)%和(69.03±2.38)%。且能激活MAPK信号通路减少下游蛋白MUC1的表达。结论 SM能明显抑制DU145和PC3细胞生长,该作用可能与MAPK信号通路的激活以及下游MUC1蛋白表达下调有关。

甾体生物碱澳洲茄胺的研究进展

澳洲茄胺是来源于茄属植物的一种甾体生物碱,具有多重药理活性,特别是较强的抗肿瘤活性。综述近年来有关其药理活性、作用机制及其合成研究的进展,并对该类化合物作为抗肿瘤药物的开发潜力和发展前景进行展望。

pH梯度法制备澳洲茄边碱脂质体

目的:研究制备澳洲茄边碱脂质体的最佳工艺,并建立起包封率的测定方法。方法:采用pH梯度法制备澳洲茄边碱脂质体,以包封率为指标进行工艺优化,通过SephadexG-50葡聚糖凝胶柱分离脂质体,高效液相色谱法测定澳洲茄边碱的包封率。结果:制备澳洲茄边碱脂质体的最佳条件,药物与卵磷脂的质量比为1∶30,胆固醇与卵磷脂质量比为1∶4,脂质体外水相pH值最终调至6.5,孵育温度为55℃,此时的包封率可以达到70%以上。结论:用pH梯度法能制备包封率较高的澳洲茄边碱脂质体。

澳洲茄碱对黑色素瘤细胞的抑制作用

目的:研究澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤细胞的抑制作用及其机制。方法:采用MTT法检测了澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤B16细胞株的抑制效果;以稍高于半致死剂量的澳洲茄碱处理B16细胞48h后,进行荧光定量PCR,分析药物及其溶媒对B16细胞中p53通路的激活情况。结果:澳洲茄碱对小鼠黑色素瘤B16癌细胞有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖性;其48h IC50约为35μg/m L;SYBR绿色荧光定量PCR数据显示,澳洲茄碱的处理显著提高了癌细胞中p53通路的下游因子Puma基因的表达水平(P﹤0.05)。结论:澳洲茄碱能明显抑制黑色素瘤B16癌细胞的生长,并能显著激活p53通路,这很可能是导致黑色素瘤细胞死亡的主要原因。

澳洲茄碱和澳洲茄胺抑制肺癌细胞的构效比较

目的:探讨澳洲茄碱及其水解苷元澳洲茄胺对肺癌细胞抑制的构效关系。方法:MTT法检测澳洲茄碱及澳洲茄胺对A549和LLC细胞抑制作用;以20μg/m L的澳洲茄碱和8μg/m L澳洲茄胺分别处理A549细胞24h,观察细胞形态,并经定量PCR检测p53靶基因Bax和Puma表达水平。结果:对A549和LLC细胞,澳洲茄胺的24h IC_(50)大约都为7.5μg/m L,澳洲茄碱的大约都为19μg/m L。形态学观察表明澳洲茄胺和澳洲茄碱处理的A549细胞都呈现细胞膜皱缩的垂死形态。定量PCR数据显示,与溶媒相比澳洲茄碱及澳洲茄胺都显著提高了p53通路Puma基因表达水平(P<0.001和P<0.05)。结论:澳洲茄碱及澳洲茄胺对癌细胞抑制量效模式相同,有效部位是苷元,作用机制是诱导细胞死亡,分子机制可能是通过上调Puma表达而激活p53信号通路。

反相高效液相色谱法测定龙葵果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量

利用反相高效液相色谱法快速测定龙葵果中2种甾体生物碱的含量。采用Agilent Extend-C 18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.5%磷酸为流动相,流速1.0 mL/min,进样量5μL,柱温30℃,在203 nm条件下检测,以等度洗脱方式在30 min内分离了澳洲茄碱、澳洲茄边碱2种生物碱。结果表明,澳洲茄碱含量测定的线性范围为1.7~8.5μg(r=0.9996);澳洲茄边碱含量测定的线性范围为1.84~9.19μg(r=0.9999),平均回收率分别为100.18%和99.08%。该方法简便快速、准确度高,可用于龙葵药材的质量评价。

基于网络药理学探讨澳洲茄碱抗肿瘤机制

目的基于网络药理学,构建澳洲茄碱抗肿瘤的“靶点-通路”网络,探讨澳洲茄碱抗肿瘤的作用机制。方法通过TCMSP及Pharm Mapper收集澳洲茄碱潜在靶点,OMIM及Genecards数据库收集肿瘤疾病靶点,将澳洲茄碱潜在靶点与肿瘤疾病靶点交集,获得澳洲茄碱-肿瘤共同靶点。运用String数据库结合Cytoscape 3.7.2绘制澳洲茄碱-肿瘤共同靶点的蛋白相互作用网络图(PPI),筛选核心靶点。最后,基于R3.6.0软件用Bioconductor生物信息软件包,对澳洲茄碱-肿瘤共同靶点进行进行GO功能与KEGG通路富集分析。结果澳洲茄碱-肿瘤共同靶点79个,核心基因3个:IGF1R、MAP2K1、CHEK1。通路分析显示澳洲茄碱参与多条肿瘤相关通路的调控,主要涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、Ras信号通路等经典肿瘤信号通路。结论澳洲茄碱调控多个靶点,同一个靶点参与多个生物学过程和信号通路,澳洲茄碱可能通过多靶点、多通路发挥抗肿瘤作用。

澳洲茄碱通过MAPK/ERK信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨澳洲茄碱对肝癌细胞增殖活性的影响及对丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调节作用。方法:取对数生长期的HepG2细胞随机分为对照组、澳洲茄碱组(以50μmol/L澳洲茄碱处理细胞)、激活剂组[以20μmol/L异丙肾上腺素(ISO)处理细胞]和激活剂+澳洲茄碱组(20μmol/L ISO处理细胞24 h后,以50μmol/L澳洲茄碱处理),24 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell试验检测细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹法检测磷酸化ERK(p-ERK)、ERK、丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MEK)和磷酸化MEK(p-MEK)蛋白相对表达量。结果:与0μmol/L澳洲茄碱比较,10、20、30、40及50μmol/L澳洲茄碱均可降低细胞存活率,差异均有统计学意义(P<0.05),且具浓度依赖性。与对照组比较,澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数减少;激活剂组细胞划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与澳洲茄碱组比较,激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。与激活剂组比较,激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率,p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:澳洲茄碱可降低肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过抑制MAPK/ERK信号通路发挥调控作用。