成年大鼠脊髓损伤后Slit2的表达及免疫荧光激光共聚焦定位

目的:观察神经生长导向因子Slit2在大鼠急性脊髓损伤后表达变化和分布情况,探讨轴索再生导向机制。方法:成年SD大鼠用Allen’s方法制作脊髓挫伤(SCI)模型,分别于挫伤后第2,4,7,14天取材,半定量RT-PCR分析Slit2 mRNA的表达变化,免疫荧光激光共聚焦扫描观察Slit2蛋白在脊髓损伤区的分布。结果:RT-PCR显示SCI后出现Slit2转录上调,表达量持续增高并于伤后第7天达到顶峰,之后逐步下降;免疫荧光则显示Slit2阳性颗粒先后出现在脊髓损伤区灰质胶质细胞中及神经元胞膜上,以前角、中央管及中线周围和后角较为聚集。结论:成年大鼠脊髓急性损伤后存在Slit2表达一过性上调并在损伤区灰质内广泛分布,可能对再生轴索的导向性生长发挥重要作用。

人CAP1蛋白与PIF1解螺旋酶及其剪接体蛋白的相互作用

目的在细胞水平及体外验证腺苷酸环化酶相关蛋白1(CAP1)蛋白与PIF1解螺旋酶及其剪接体是否存在相互作用。方法采用激光共聚焦免疫荧光实验,通过细胞内蛋白共定位确定蛋白质间的相互作用关系;GST Pulldown实验在体外验证CAP1与PIF1及其剪接体是否存在直接的相互作用。结果激光共聚焦免疫荧光实验显示,CAP1与PIF1全长蛋白及其剪接体BC018978没有共定位,但与剪接体AF108138C存在共定位。GST Pull-down未检测到CAP1与PIF1全长及其剪接体的相互作用。结论 CAP1与PIF1剪接体蛋白可能存在非直接相互作用。

吗啡处理后原代培养的海马神经元CREB_1蛋白的改变

目的研究急、慢性吗啡处理后原代培养的海马神经元cAMP反应元件结合蛋白(CREB1蛋白)的改变。方法取原代培养7d的成熟海马神经元,随机分为吗啡急性作用组、纳洛酮急性戒断组、吗啡慢性作用组、纳洛酮慢性戒断组和空白对照组,每组6皿细胞。采用细胞免疫荧光染色法检测CREB1蛋白相对含量。结果吗啡急性作用组和纳洛酮急性戒断组原代培养的海马神经元内CREB1蛋白表达没有影响,而吗啡慢性作用组海马神经元内CREB1蛋白表达明显增强(P<0.01),且纳洛酮慢性戒断组免疫荧光强度进一步增加(P<0.01),但与吗啡慢性作用组比较差异无统计学意义。吗啡慢性作用组海马神经元内CREB1蛋白较吗啡急性作用组表达明显增强(P<0.01),纳洛酮慢性戒断组较急性戒断组CREB1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论慢性、多次使用成瘾药物才引起CREB1蛋白表达增加,其机制可能是多次使用吗啡通过反复对细胞内信号转导途径的影响引起神经元细胞核CREB1蛋白的改变。

CD147/Basigin在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及其与肿瘤进展的相关性研究

目的研究CD147在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达状况及其与肿瘤进展的相关性。方法运用激光扫描共聚焦免疫荧光方法检测CD147在54例上皮性卵巢肿瘤组织中的表达,研究其与肿瘤复发、组织病理学分型等预后相关指标的关系。结果 33例卵巢上皮细胞癌组织和21例良性上皮性肿瘤组织中检测到CD147蛋白表达,卵巢上皮细胞癌组织的荧光强度远高于良性上皮性肿瘤,而Ⅳ、Ⅲ期的表达明显高于Ⅱ、Ⅰ期(P<0.05);表达强度与肿瘤组织病理学分期有关(P<0.05),良性肿瘤的表达明显低于恶性肿瘤(P<0.05)。结论 CD147在卵巢上皮细胞癌中高表达,且表达强度与卵巢上皮细胞癌的分期相关;CD147蛋白的表达对卵巢上皮细胞癌患者的发生、发展可能起重要促进作用,可以作为预测卵巢上皮细胞癌恶性程度及预后的指标。

混合型肝癌的肝脏祖细胞起源研究

目的混合型肝癌同时具有肝细胞癌和胆管细胞癌的成分和特征,是较为少见的肝脏上皮性恶性肿瘤。研究肝脏祖细胞标志物在混合型肝癌中的免疫表型特征,以进一步了解混合型肝癌的细胞起源和发病机理。方法采用免疫组织化学和激光共聚焦免疫荧光双标染色研究HepParl,AFP,CK19,OV-6和c-kit在12例手术切除混合型肝癌标本组织中的表达。结果12例混合型肝癌均表达HepParl、CK19和OV-6,其中8例（8/12,66.7%）的移行区域肿瘤细胞共表达HepParl/CKl9,10例（10/12,83.3%）表达c-kit,其中7例（7/10,70%）共表达OV-6/c-kit。而作为对照的单纯肝细胞癌和肝内胆管细胞癌组织中免疫荧光双标染色均为阴性。结论混合型肝癌具有肝脏祖细胞的免疫表型特征,可能起源于肝脏祖细胞的恶性转化。