激光共焦显微镜、角膜组织刮片检查诊断真菌性角膜炎的准确性比照观察

对比观察激光共焦显微镜、角膜组织刮片检查诊断真菌性角膜炎的准确率,分析两种检验方式在临床上的应用价值。方法 在2022年12月~2023年12月前共抽张家口市第四医院选出80例疑似真菌性角膜炎患者,对这80位患者展开临床对比研究。所有患者均接受激光共焦显微镜、角膜组织刮片检查,对比分析两组检验方式的准确性。结果 激光共焦显微镜检测准确性要高于角膜组织刮片检查结果(P<0.05);激光共焦显微镜误诊率,明显低于角膜组织刮片检查(P<0.05)。结论 真菌性角膜炎属于临床常见疾病,因此其诊断和评估显得尤为重要,本文当中的激光共焦显微镜或者角膜组织刮片,均能够在真菌性角膜炎的诊断当中起到作用,但是相比较而言,激光共焦显微镜技术的临床优势更为明显,而且激光共焦显微镜的微创性更高,检查舒适度的效果更为突出。

活体激光扫描共聚焦显微镜在睑缘蠕形螨检查中的应用

目的 对比活体激光扫描共聚焦显微镜(IVCM)与传统的光学显微镜对睑缘蠕形螨的检出阳性率,评价其临床应用价值。方法 收集2020年10月—2021年2月期间就诊于中国中医科学院西苑医院眼科门诊的患者93例(186只眼)。对同一患者分别使用IVCM法与光学显微镜法检测蠕形螨感染情况,记录不同方法检测出的蠕形螨的阳性率、漏诊率和检出蠕形螨数量的分布情况,比较光学显微镜检查法检测上、下睑缘的检出率。结果 (1)阳性率:2种方法检测蠕形螨均为阴性的患者8例(8.60%)。IVCM检测阳性83例(89.25%),高于光学显微镜检测阳性的56例(60.22%),差异有统计学意义(χ^(2)=20.755,P=0.000)。(2)上、下睑缘检出蠕形螨阳性率:光学显微镜法检出上、下睑蠕形螨均为阳性或均为阴性的患者84例(90.32%),不一致的患者9例(9.68%)。(3)漏诊率:IVCM法漏诊3例(3.23%),低于光学显微镜法漏诊24例(25.81%),差异有统计学意义(χ^(2)=19.107,P=0.000)。(4)蠕形螨数量的分布情况:2种检查方法检xu出不同数量蠕形螨的分布情况比较,差异有统计学意义(χ^(2)=42.809,P=0.000);对于同一患者IVCM法计数结果高于光学显微镜法2倍以上的患者达73例(86.90%)。结论 与传统光学显微镜法比较,IVCM对睑缘蠕形螨的检出的阳性率更高,漏诊率更低,定量更为准确,具有一定的临床应用价值。

反射式共聚焦激光扫描显微镜在会阴色素减退性疾病中的应用

目的探讨反射式共聚焦激光扫描显微镜(reflectance confocal microscopy,RCM)在会阴色素减退性疾病中的应用价值。方法回顾性分析2018年1月—2021年12月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科37例患者会阴色素减退性疾病的临床、RCM及组织病理学特征。结果37例患者中白癜风15例,硬化性苔藓13例,无色素痣2例,神经性皮炎4例,皮脂腺异位1例,非特异性炎症后色素减退2例。37例患者的皮损在RCM检测的同一部位进行组织病理检查,诊断均符合RCM。结论RCM有助于会阴色素减退性疾病的诊断及鉴别诊断,对白癜风及硬化性苔藓的分期也有辅助作用。

超高分辨率激光扫描共聚焦显微镜的成像技术与应用

超高分辨率激光扫描共聚焦显微镜在生命科学研究领域中的应用日益广泛。该文以Zeiss LSM 880 Airyscan with STEDYCON超分辨率激光共聚焦显微镜为例,介绍了Airyscan技术和基于受激发射现象的超分辨技术(STED)的原理、应用和参数设置,以期能够为科研工作者究竟采用哪种模式进行图像采集提供参考,以获得最佳的成像效果。

激光扫描共聚焦显微镜辅助诊断诺卡菌性角膜炎1例

患者,女,57岁,因无明显诱因出现右眼异物感、视力下降1个月余,于2020年1月至成都东区爱尔眼科医院就诊后收治入院。否认糖尿病病史。患者曾于外院诊断为角膜炎,于10 d前在外院行角膜激光扫描共聚焦显微镜检查,报告发现菌丝,给予常规抗细菌治疗无效转至本院就诊。眼科检查:视力右眼0.02(-2.00 DS/-0.50 DC×90°=0.15),左眼0.08(-3.50 DS/-2.00 DC×90°=1.0);右眼眼压12.4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),左眼眼压15.9 mmHg;右眼结膜混合充血(+),角膜中央瞳孔区可见一直径约2 mm灰白色圆形浸润灶,溃疡达浅基质层,溃疡底部较清洁,可见2个灰白色隆起针尖状病变(图1A),角膜中央直径2 mm荧光素钠染色阳性(图1B),右眼KP(-),Tyndall征(-),晶状体透明,玻璃体和视网膜未见明显异常。左眼前后节均未见明显异常。患者空腹血糖12.38 mmol/L。入院后立即行角膜刮片细胞学检查和细菌、真菌微生物培养,结果均为阴性。激光扫描共聚焦显微镜(HRT3,德国海德堡公司)检查在角膜浅基质层可见纤细分支、略微弯曲的高反光丝状结构,初次报告为“菌丝”(图2)。

高内涵分析系统联合激光扫描共聚焦显微镜观察细胞间隧道纳米管

目的隧道纳米管(tunneling nanotubes,TNTs)是存在于细胞间的膜管样结构,具有直接且远距离的生物信息交换功能。TNTs因结构易破坏、存在时间短以及形成后不稳定,故观察其动态形成与功能存在一定难度。而本研究采用高内涵分析系统(HCA)联合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)尝试观察TNTs形成的动态过程及其对囊泡物质的转运功能。方法荧光探针标记人肺腺癌A549及顺铂耐药A549/DDP细胞,分别利用HCA观察TNTs形成过程、LSCM观察TNTs三维结构、HCA联合LSCM分析TNTs囊泡物质转运功能。结果同种肿瘤细胞(A549或A549/DDP)间、不同亚型肿瘤细胞(A549与A549/DDP)间均可形成TNTs结构;与A549细胞相比,A549/DDP细胞间TNTs结构长且粗、形成指数高(A549和A549/DDP细胞TNTs长度、直径和形成指数分别为14.71μm、2.27μm、4和25.44μm、2.59μm、11);肿瘤细胞间通过细胞接触-膜融合-细胞反向易位-胞膜融合区拉长变细,以及细胞膜凸起-膜凸起丝状伪足样拉长-膜凸起与其他细胞膜/膜凸起融合两种方式形成TNTs;TNTs囊泡转运功能具有双向性,囊泡转运速率及数量因转运阶段和供体细胞不同而存在差异,A549/DDP细胞向A549细胞进行囊泡转运过程中表现为囊泡转运速率初始快、末期慢,A549作为供体细胞向受体A549/DDP细胞转运的囊泡数量和比例高于A549/DDP作为供体细胞的反向转运。结论HCA联合LSCM可有效观察、分析TNTs动态形成过程及囊泡物质转运功能。

针孔参数优化对激光扫描共聚焦显微镜荧光成像的影响

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是一种高分辨率的光学成像仪器,它利用“共轭成像”原理,获得的图片质量远超于普通荧光显微镜。LSCM有两组功能不同的针孔,即照明针孔和探测针孔,这是实现“共轭成像”的关键。由于照明针孔的大小和位置一般是固定的,LSCM主要通过调节探测针孔的大小来获得高质量的成像图片。然而,很多使用者对于LSCM中针孔大小与荧光成像质量的关联缺乏了解。因此,本文阐述了针孔在LSCM中的作用原理及其与显微镜分辨率的关系,并通过小鼠脊髓腹侧白质中的免疫荧光成像分析,发现针孔参数优化对提高LSCM荧光成像质量具有显著影响。这一发现将为LSCM成像分析提供重要参考。

激光扫描共焦显微镜结合裂隙灯显微镜检查对真菌培养阴性的常见丝状真菌性角膜炎诊断的可行性

目的探讨真菌性角膜炎（FK）主要致病菌——丝状真菌属不同菌种在激光扫描共焦显微镜和裂隙灯显微镜检查下的表现规律，评估其对临床上真菌培养阴性的FK患者进行快速菌种诊断和疗效判断的可行性。方法采用诊断性试验研究方法，于2013年9月至2014年1月在河南省立眼科医院收集993例已经确诊的FK患者，所有患者行角膜病灶真菌培养、角膜激光扫描共焦显微镜和裂隙灯显微镜检查，比较真菌培养不同结果的激光扫描共焦显微镜的FK诊断阳性率以及真菌培养法、角膜激光扫描共焦显微镜检查法发现的菌种分布；总结致病丝状真菌各菌种的裂隙灯显微镜和激光扫描共焦显微镜特征。结果993例FK病例中，真菌培养阳性率为43.20%，激光扫描共焦显微镜检查阳性率为82.07%，激光扫描共焦显微镜诊断阳性率明显高于真菌培养阳性率，差异有统计学意义（χ2＝45.323，P＝0.000）。429例真菌培养阳性病例中，激光扫描共焦显微镜诊断阳性率为92.31%；564例真菌培养阴性病例中，激光扫描共焦显微镜诊断阳性率为74.29%。429例真菌培养阳性病例中，曲霉菌属占比最高，占总检出率的50.12%，其次为镰孢菌属和链格孢菌属，分别占18.18%和10.49%。真菌培养与激光扫描共焦显微镜检查的真菌菌属分布特征一致，二者比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。裂隙灯显微镜和激光扫描共焦显微镜显示的FK患者不同致病真菌特征不同，裂隙灯显微镜下曲霉菌感染灶为羽毛状角膜溃疡，激光扫描共焦显微镜下可见呈高反光、粗细均匀、分枝少的细线状菌丝；裂隙灯显微镜下镰孢菌角膜感染灶呈牙膏样浸润，激光扫描共焦显微镜下可见高反光长棒状、长线状且分枝少的菌丝；裂隙灯显微镜下链格孢菌感染的角膜病灶为角膜白斑，激光扫描共焦显微镜下高反光、粗细不均的长棒状或串珠状、分枝少的菌丝。治疗后激光扫描共焦显微镜下可见菌丝断裂、变短、变细及反光变弱。激光扫描共焦显微镜下FK菌丝应与角膜神经纤维相鉴别，前者呈弥漫分布并相互交织，周围有高反光的炎症细胞，多位于角膜基质层；后者位于上皮下与角膜基质层间，神经纤维直径大于菌丝，周围的细胞结构清晰。结论激光扫描共焦显微镜对丝状真菌感染性FK的诊断阳性率明显高于真菌培养，激光扫描共焦显微镜结合病灶的裂隙灯显微镜下表现可对真菌培养阴性的丝状真菌进行菌种判断并对治疗效果进行动态监测。

激光扫描共聚焦显微分析技术表征页岩亚微米级孔隙中的含油性——以准噶尔盆地芦草沟组页岩为例

亚微米级孔隙及其含油性是页岩油勘探开发所需的重要信息。为应用激光扫描共聚焦显微镜有效观测亚微米级孔隙的含油性,修改了激光扫描共聚焦显微镜主分光器和检测器的前置滤光片配置,使之能较好地进行反射光和荧光联合扫描,消除矿物所发荧光的干扰,实现了亚微米级孔隙及其含油性的精确观测。该方法在准噶尔盆地吉木萨尔凹陷芦草沟组页岩油研究中进行了应用,发现了大量的亚微米级含油孔隙;页岩油多呈不规则形状、斑块状和星点状。这套页岩的有机质成熟度Ro为0.6%~1.1%,平均约为0.9%,但轻、重质组分的分布具有显著的非均一性,不完全受成熟度控制。在有些部位,轻质组分含量及其与重质组分的比值均较高,但在成熟度相近甚至稍高的邻近部位,却存在以重质组分为主的情况。页岩层系内部的油气运移也是一个重要的控制因素。页岩中的轻质和重质组分的观测与分布规律研究,对于页岩油勘探开发十分重要,激光扫描共聚焦显微新技术可成为重要的观测手段。

激光扫描共聚焦显微镜研究储层孔隙结构

这是一项首次应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)的激光荧光技术于油气储层的孔隙结构研究。供LSCM用的样品 ,用环氧树脂加入荧光剂后 ,经加压灌注 ,磨制成岩石薄片 ,在LSCM显微镜下观察孔喉的分布 ,可以测量面孔率 ,并可标出需要测量的每个孔喉的大小以及观察孔喉形状及分布状况。该法的优点 :1.可直接测量和观察到 2 μm左右大小的孔喉。 2 .在LSCM显微镜下可区分孔隙空间中的充填粘土杂基等 ,因此面孔率的测定较一般镜下统计和图像分析更为精确 ,因粘土矿物由于吸附染色剂后在颜色或灰度上有的不易区分。 3.岩石薄片中的微裂缝 ,在LSCM显微镜下可以更清楚地观察到。

激光共焦扫描显微镜在微机电系统中的应用

研究了激光共焦扫描显微镜(LSCM)在微结构分析中的应用,综述了该项应用的优势。LSCM的高分辨率和光强调节功能,使其可用于大角度测量;与图像处理系统相结合,便于微结构的定性和定量分析;而全自动样片台沿X轴和Y轴的自动扫描实现了图像的拼接功能。实验结果表明:运用LSCM测量的斜面最大角度至少可以达到50°;在悬臂梁的形貌分析中,可获得清晰的三维形貌,同时通过二维定量分析精确测得其形变为3.145μm;在100×物镜下,运用拼接功能获得384μm×288μm的视场面积,解决了高放大倍数下,在单帧显微图像中无法获取所观测对象全貌的问题。LSCM在微结构分析中的应用弥补了其它形貌分析设备测量功能上的不足,提升了微机电系统的测试水平。

共聚焦激光扫描荧光显微镜扫描系统研制

为适应三维光学微细加工及三维光学信息存储研究的需要,研制了共聚焦激光扫描荧光显微镜的工作台式扫描系统,扫描范围138μm×138μm。工作台采用压电陶瓷驱动器(PZTactuator)驱动的方式来获得高分辨率的位移,采用带柔性铰链的杠杆放大装置来获得较大的位移范围。描述了工作台的工作原理,并对其静态和动态性能进行了测试,实验表明这一扫描系统能很好的应用于共聚焦激光扫描荧光显微镜系统。

利用激光扫描共聚焦显微镜观察同源四倍体水稻胚囊的形成与发育

激光扫描共聚焦显微镜是研究植物胚囊的形成与发育过程以及胚囊变异的理想工具。同源四倍体水稻是二倍体水稻染色体加倍形成的。本文利用激光扫描共聚焦显微镜直接观察经透明处理的水稻子房,研究加倍的基因剂量对于四倍体水稻的胚囊形成与发育的影响。结果表明,广陆矮4号四倍体大部分的胚囊形成与发育的过程基本是正常的,一部分胚囊出现异常现象,在成熟胚囊时期异常频率为10 61%;L202四倍体的异常频率较高,成熟胚囊时期异常频率达到45 65%。

刮片镜检法联合激光扫描共焦显微镜快速诊断真菌性角膜炎的临床评价

背景 在真菌性角膜炎的临床诊治工作中,早期、快速诊断能够为患者争取治疗时间,降低致盲率.真菌培养法虽是真菌性角膜炎诊断的金标准,但由于培养周期较长,假阴性率较高,难以实现早期确诊和正确治疗. 目的 研究角膜刮片镜检法与激光扫描共焦显微镜诊断真菌性角膜炎的符合率,探讨两种检查方法联合应用在临床快速诊断中的应用价值. 方法 分别采用角膜刮片镜检法及激光扫描共焦显微镜对临床确诊的真菌性角膜炎患者167例167眼进行检查,所有患者均在裂隙灯显微镜下观察后行激光扫描共焦显微镜检查,观察图像特点,然后在角膜病灶处刮取标本,质量分数10％ KOH涂片后于光学显微镜下查找真菌菌丝或孢子. 结果 角膜刮片镜检可查见菌丝或孢子者125例,阳性率为75％ （125/167）,激光扫描共焦显微镜检查发现菌丝者152例,阳性率为91％ （152/167）,激光扫描共焦显微镜检查法的阳性率明显高于刮片镜检法,差异有统计学意义（x2=14.88,P=0.00）.两种检查方法结果均为阳性者114例,均为阴性者4例,两种检查的符合率为70.7％ （118/167）.刮片镜检法结果阴性的42例中,38例患者行激光扫描共焦显微镜检查后可发现菌丝,激光扫描共焦显微镜检查结果阴性的15例中,刮片镜检结果阳性者11例.结论 刮片镜检法和激光扫描共焦显微镜检查方法的联合应用能够提高真菌性角膜炎的快速诊断水平,降低漏诊率.

VC++环境下激光共焦扫描显微镜的成像实现

讨论激光共焦扫描显微镜在 VC++环境下的图像实现过程及处理方法。

激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及其使用技巧

介绍了激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)的原理和构造,分析了LSCM的优点和缺点,并以花粉为例,详细介绍了共聚焦针孔直径、光电倍增管检测器增益、激光强度、扫描速度、扫描方式和Z轴步距等重要参数设置对共聚焦成像的不同影响。探讨了正确使用LSCM的方法与技巧,如获取高质量的图像、图像保存及图像处理,以便为科技人员利用LSCM开展更多植物学与环境科学相关的研究提供参考。

激光扫描共聚焦显微镜

阐述了激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)的原理和构造,分析了LSCM的优点和缺点,如获得清晰的图像,可光学切片、三维重建,实时多通道荧光,ZOOM放大,局部光操作,检测过程快、效果更灵敏、定位更准确。探讨了LSCM扫描方式及应用,如研究多种荧光定位分析,需选择XY扫描;研究标本空间实际位置信息,样品三维图像信息,需选择XYZ扫描;用于研究活体标本随时间的变化,或在不同时间采取不同的处理方法观察标本的荧光变化研究,得选择XYT扫描。并针对目前管理该仪器设备上存在的问题提出一些建议,以期对高校实验室的开放共享提供有益参考。

飞秒激光和微型角膜刀制瓣LASIK术后共焦显微镜检查比较

背景飞秒激光制作准分子激光角膜原位磨镶术（LASIK）角膜瓣技术日渐成熟，术后角膜创伤愈合及神经纤维的再生成为关注热点。目的对比分析FEMTOLDV飞秒激光及Hansatome机械角膜刀制瓣对LASIK后角膜细胞的影响。方法采用前瞻性病例对照研究设计。纳人2010年3—7月在武警河南总队医院眼科连续收治的行LASIK的近视患者38例38眼，分为FEMTOLDV组20例20眼（采用FEMTOLDV飞秒激光制瓣）及Hansatome组18例18眼（采用Hansatome微型角膜刀制瓣），两组患者性别、年龄、术前等效球镜度等资料相匹配。分别于术前及术后1周、1个月、3个月应用共焦显微镜检测角膜中央及角膜瓣边缘的形态学变化，并比较两种制瓣方式术后角膜细胞形态学的异同。观察两组患者的术后视力、屈光度变化和裂隙灯下表现。结果本研究中两组术眼术后1个月最佳矫正视力均≥1．0。FEMTOLDV组平均等效球镜度为（＋0．21±0．48）D，Hansatome组为（-0．04±0．54）D，两组屈光度结果接近。FEMTOLDV组术后1周角膜上皮有增厚表现，但与术前比较差异无统计学意义（t＝1．63，P〉0．05）。FEMTOLDV组术后1周、1个月和3个月浅基质细胞密度较术前均明显减少，差异均有统计学意义（t=-27．99、-25．49、-28．87，P〈0．01）。Hansatome组术后1周角膜上皮厚度为（56．73±2．47）μm，较术前值（51．16±1．11）μm明显增加，差异有统计学意义（t=9．29，P〈0．05），3个月时接近术前厚度；Hansatome组术后1周、1个月和3个月浅基质细胞密度较术前明显减少，差异均有统计学意义（t=-17．57、-14．13、-19．63，P=0．00）。所有眼均可在切削面见到高反光颗粒，FEMTOLDV组术后1周、1个月和3个月切削面高反光颗粒密度均明显少于Hansatome组，差异均有统计学意义（t=-13．505、-11．900、-14．084，P〈0．01）。术后1周时两组均观察到角膜细胞形态改变，切削界面后见激活的基质细胞，3个月时激活细胞减少。FEMTOLDV组术后3个月可见完整的神经纤维，而Hansatome组神经纤维短小。术后3个月，FEMTOLDV组周边角膜基质高反光，并有不规则纤维化，而Hansatome组角膜瓣边缘基质反光较弱。结论与Hansatome机械角膜刀制瓣LASIK比较，FEMTOLDV飞秒激光制瓣LASIK术后神经纤维再生较早，角膜瓣边缘瘢痕化改变较明显，显示出较强的愈合过程。

共焦激光扫描显微镜及其在钢铁相变原位观察中的应用

介绍了宝钢研究院共焦激光扫描显微镜(Confocal Laser Scann ing M icroscopy,CLSM)的结构及其工作原理,在此基础上通过Fe-C二元合金凝固、奥氏体不锈钢凝固、低碳钢中高温铁素体(δ)奥氏体(γ)相变界面稳定性、AISI304不锈钢加热过程中δ相的形核与生长、AISI304不锈钢冷却过程中δ→γ相变等典型实例描述了CLSM在钢铁相变原位观察中的应用情况。表明CLSM在研究钢铁材料的凝固、固态相变、夹杂运动等方面具有无与伦比的优势与应用前景。