应用激光扫描细胞仪分析GRP78在食管癌各级病变中的表达情况

目的探索应用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果的可行性、客观性及准确性,了解葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白在食管癌各级病变中的表达情况。方法应用激光扫描细胞仪对食管癌组织芯片中GRP78免疫组化结果进行分析,对激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果的相关性进行分析。结果激光扫描细胞仪扫描整张组织芯片后获得选定组织区域的虚拟图及阳性像素点百分比;正常食管组织、中-重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的GRP78阳性率分别为0%(0/8),90.4%(19/21)、83.3%(5/6)和47.4%(18/38)。GRP78在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌3组中表达的差异有显著性意义(P<0.01)。激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01))。结论激光扫描细胞仪用于免疫组化结果的分析具有高通量、高度客观、准确的优点。GRP78在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中可能扮演了重要角色。

应用激光扫描细胞仪分析食管癌中HP1-γ蛋白的表达

目的了解异染色质相关蛋白1-γ(heterochro-Matin-associated protein 1,HP1-γ)在食管癌发生发展各阶段的表达情况,并初步探讨利用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果较传统光镜下评分方法的优势。方法选用含各级别食管癌病变组织的组织芯片,采用免疫组化方法检测其中HP1-γ的表达,并通过激光扫描细胞仪对免疫组化结果进行定量分析。将激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果进行相关性分析。结果HP1-γ蛋白主要表达于胞核。在正常食管组织、中-重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的阳性率分别为37.5%(3/8),100%(21/21)、100%(7/7)和23.7%(9/38),且在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01)。结论HP1-γ蛋白可能在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中起到了一定的抵抗作用。与传统人工评分方法相比,激光扫描细胞仪在分析免疫组化结果时具有高通量、高度客观、准确的优点。

用膜滤过联合激光扫描细胞仪检测恶性肿瘤患者循环肿瘤细胞

目的建立用膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)联合激光扫描细胞仪(LSC)检测循环肿瘤细胞(CTC)的方法。方法将不同数量的乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞分别混入健康血标本中,用ISET联合LSC自动扫描分析,以建立稳定的检测方法,同时验证该方法肿瘤细胞回收率、敏感性及特异性。结果建立了用ISET(用8μm孔径的聚碳酸酯滤膜)联合LSC,并用CK8抗体、CD45抗体分别作为肿瘤上皮细胞的阳性和阴性选择标记来检测CTC的方法;该方法肿瘤细胞回收率为(10.34±1.15)%,在混入60～600000个肿瘤细胞范围内回收率保持稳定(P>0.05);达到可检测到1ml血中一个肿瘤细胞的敏感性,相同条件下空白对照组均未检出肿瘤细胞。结论用ISET联合LSC检测恶性肿瘤患者CTC方法简便、敏感性高、特异性强,有望进一步应用于临床。

CHO细胞微核的激光扫描细胞仪自动化检测方法

运用激光扫描细胞仪,采用FITC和PI两种荧光染料,结合细胞胞质分裂阻断微核技术,对环磷酰胺(CP)诱导的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞微核进行了检测,并将该方法与传统微核显微镜检法进行了比较,旨在探索CHO细胞体外微核的激光扫描细胞仪自动化检测方法.结果表明,激光扫描细胞仪方法能够准确识别胞质阻滞的双核细胞及双核细胞中的微核,环磷酰胺(CP)处理浓度与其诱导的双核细胞微核率成正相关,激光扫描细胞仪法与传统显微镜检法获得的微核率具有良好的相关性.激光扫描细胞仪检测方法能简便、经济、快速、高效地检测CHO细胞微核,适于体外培养细胞尤其是贴壁细胞微核的高通量检测.

微核技术研究进展

微核试验作为检测染色体损伤最常用而有效的细胞遗传学检测方法之一,经济、简便、快速,在敏感性、特异性和准确性方面,与经典的染色体畸变分析方法基本相当。主要综述国内外微核检测技术的最新研究进展,尤其是微核的自动化检测技术。其中流式细胞仪自动化检测和激光扫描细胞仪自动化检测,以及微核试验高内涵筛选方法由于其特有的优势,应用和发展前景广阔。

微核实验的自动化检测研究进展

评价各种物理的(如多种射线、微波、电磁辐射等)、化学的(废水、废气、废渣 ,简称“三废”)以及生物因子(如多种细菌、霉菌及其生物毒素)的遗传毒性是毒理学研究的重要组成部分。在一系列遗传毒性实验中 ,微核实验(micronucleitest,MNT)具有试验结果可信度高 ,操作相对简单 ,可同时对多个遗传学终点进行检测等特点而成为必做实验之一[1]。然而 ,随着工业化的不断发展 ,需要运用MNT检测的有害因子越来越多。依赖于人工显微镜计数的传统MNT愈发满足不了实际工作的需要 ,实现MNT的自动化检测就成了MNT进一步发展的关键。本文拟重点论述流式细胞仪在MNT的自动化检测中的应用 。

LSC分析脑肿瘤DNA及其临床应用

激光扫描细胞仪(Laser Scanming Cytometer,LSC)是kamentsky等开发的一种新的细胞分析仪,它同时具有流式细胞仪和图像细胞仪的功能。恶性肿瘤自身内在的基因不稳定性可以导致肿瘤发展过程中基因异常的增加,基因不稳定性可分为两类:微卫星不稳定性和染色体不稳定性,目前研究已经证实染色体不稳定性与DNA非二倍体这间有密切关系。在本研究中,我们主要观察肿瘤恶性程度与LSC分析结果的相关性。方法:应用LSC分析脑肿瘤细胞的DNA指数(DI)和增殖指数(PI),使用流式细胞仪(FCM)对脑肿瘤细胞系进行DNA分析,同时对肿瘤标本进行冰冻切片病理检查,与LSC的分析结果进行比较。结果:DNA指数和增殖指数反映了肿瘤的恶性程度。结论:应用LSC进行脑肿瘤DNA分析结合病理学检查对决定术中胶质瘤切除面积是非常有意义的,具有一定的临床应用价值。

P53和Bcl-2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的通过检测P53、Bc1-2蛋白在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达,探讨其表达的临床意义。方法应用免疫组化法检测组织芯片中P53、Bc1-2蛋白在88例胰腺导管腺癌和11例正常胰腺组织的表达情况。应用人工读片和激光扫描细胞仪两种方法检测分析其相关性及临床意义。结果 P53和Bcl-2蛋白在正常胰腺组织的阳性率分别为0和100%(11/11),胰腺癌组织中的阳性率分别为63.6%(56/88)和54.5%(48/88),两种蛋白在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的阳性率差异均具有统计学意义(均P<0.05);两者表达与原发性胰腺导管腺癌临床分期、病理分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。经Spearman秩相关检验,P53蛋白和Bc1-2蛋白相关系数为-0.2254,成负相关表达(P<0.05)。Cox风险分析提示,P53蛋白、Bc1-2蛋白阳性表达患者生存时间明显缩短(P<0.05),生存单因素分析胰腺癌的病理分级、临床分期及有无淋巴结转移、P53蛋白和Bc1-2蛋白表达有关(P<0.05)。结论 P53、Bc1-2蛋白在胰腺癌的发生发展中可能起着重要的作用,P53、Bc1-2蛋白表达的联合检测有助于胰腺癌的预后判断。