小肠镜联合探头式共聚焦激光显微内镜对小肠疾病的观察研究

目的 探索小肠疾病在探头式共聚焦激光显微内镜(pCLE)图像中的特有表现,以揭示其在小肠疾病实时诊断中的潜在应用价值。方法 纳入2023年2月~2023年6月我院接受小肠镜和pCLE检查的小肠疾病患者48例。结合组织病理学图片特征,分析小肠疾病在pCLE图像中的特殊征象。结果 回顾性分析采集的pCLE图像,可清晰观察到与小肠疾病病理诊断相符的一系列特殊征象,包括但不限于上皮细胞脱落、杯状细胞增多、腺体间距增宽、上皮连续性中断或缺失、腺体结构破坏、隐窝结构异常、荧光素钠渗漏、血管增粗迂曲等。结论 pCLE技术在小肠疾病的诊断中与病理特征具有一致性,其图像中观察到的特有表现可为小肠疾病的实时诊断提供依据,有一定的应用潜力。

制样方法对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响

[目的]研究不同固定剂及切片制样方式对菊花花蕾激光显微切割样品RNA提取质量的影响。[方法]以丙酮和乙醇冰醋酸2种试剂固定菊花花蕾,采用石蜡和冰冻切片2种方式制作样本,显微切割并收集最外两轮小花原基,提取RNA后比较提取质量。[结果]石蜡和经梯度蔗糖保护的冰冻切片均能很好地保存花蕾组织形态,就石蜡切片而言,乙醇冰醋酸固定组织切割样品的RNA降解明显低于丙酮固定样品;而2种固定剂的冰冻切片切割样品RNA提取质量无明显差异。与石蜡切片相比,冰冻切片显微切割样品RNA质量更高。切割时收集管盖加入RNA提取缓冲液可明显缓解RNA降解。显微切割的不同品种菊花花原基与花发育有关的基因表达水平存在差异,表明切割获得的材料可用于下一步研究。[结论]植物组织经乙醇冰醋酸固定、梯度蔗糖保护后冰冻切片进行显微切割效果较佳,可富集特异组织或细胞并从中获得较高质量的RNA。

基于共聚焦激光显微内镜的海水淹溺肺损伤大鼠肺通透性的实时活体评价

背景急性肺损伤是临床常见急危重症,其核心病理特征是气血屏障的破坏,目前对肺损伤中气血屏障结构及功能改变进行活体评估的研究甚少。目的使用共聚焦激光显微内镜实现大鼠肺的在体可视化成像和海水淹溺肺损伤大鼠肺通透性的实时动态活体评估。方法10只SD大鼠随机分为对照组和海水淹溺(seawater drowning,SW)组,每组5只;SW组通过气管滴注人工海水建立海水淹溺肺损伤模型,造模后3 h进行肺活体观察窗开窗手术,4 h时经股静脉推注0.2 mL异硫氰酸荧光素-葡聚糖(10 mg/mL);对照组不进行海水滴注,其余操作同SW组。使用共聚焦激光显微内镜对右肺下叶进行30 min活体观察,对成像0 min、10 min、20 min、30 min时的共聚焦图像进行染料渗漏指数及荧光分布均匀程度的分析;成像结束后处死大鼠,取肺组织、外周血及肺泡灌洗液,进行组织病理学检查、FITC-Dextran渗漏量检测、肺泡灌洗液蛋白含量检测及肺组织湿/干比测定。结果经静脉给予FITC-Dextran后,共聚焦激光显微内镜下可观察到肺微循环和肺泡结构的实时图像;对照组血管及肺泡结构较清晰,未出现血管外空间荧光强度的明显增加,而SW组血管结构随时间推移逐渐模糊,各时间点SW组的渗漏指数均高于对照组(P<0.05),10 min、20 min、30 min时荧光分布的变异系数均低于对照组(P<0.05);SW组的染料渗漏量、肺泡灌洗液蛋白含量及肺组织湿/干比均高于对照组(P<0.05)。结论海水淹溺造成大鼠肺组织结构破坏,肺通透性增加;利用共聚焦激光显微内镜可实现大鼠肺组织结构的在体可视化成像,通过对共聚焦图像的定量分析,还可实现大鼠气血屏障通透性的实时活体评估。

常规染色联合激光显微切割技术在子宫内膜癌MSI检测中的应用

近年随着对肿瘤分子机制深入研究,研究者们已逐步从传统的组织病理学转向探索子宫内膜癌更为精准的分子分型特征,而通过对子宫内膜癌患者进行错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白及微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)状态检测,有利于Lynch综合征的筛查和免疫治疗的选择[1-2]。目前,PCR+毛细管电泳法(PCR capillary electrophoresis,PCR-CE)是国内公认的MSI检测金标准,也是MSI检测方法中灵敏度最高的方法[3]。然而,在临床工作中经常遇到肿瘤样本不足以进行PCR-CE检测,以及MMR与MSI检测结果不一致等问题,其原因复杂多样,技术层面考虑可能是肿瘤细胞含量不足、样本质量欠佳、肿瘤组织的异质性及结果判读的主观性等因素。激光显微切割(laser microdissection,LMD)技术是在显微镜直视下从组织切片中获得单一类型细胞群,并通过结合不同染色技术精准识别目的细胞或组织的形态或功能,通过提取目的DNA进一步研究肿瘤基因组学[4]。

共聚焦激光显微内镜在早期胃癌诊断中的应用进展

胃癌因早期没有特异的临床表现,大多数无法早期诊断,错过最佳治疗期,因而生存率较低,据2020年全球数据统计,胃癌是发病率第五、死亡率第四的癌症[1],在中国,据2022年发布的中国恶性肿瘤流行情况分析,胃癌的发病率位列第五,死亡率位列第三[2]。早期监测可明显改善胃癌5年生存率(HR=0.56,95%CI:0.48~0.66,P<0.0001)[3],但白光内镜(white light endoscopy,WLE)作为胃癌的常用检测方法在准确识别病变方面仍存在欠缺,漏诊率4.6%~25.8%[4]。

1例共聚焦激光显微内镜检查术患者的护理配合体会

本文总结1例行共聚焦激光显微内镜检查术患者的护理配合要点,包括术前准备、术中配合以及术后常规护理、不良反应护理、心理护理等针对性护理措施,以减轻患者不适症状,保障患者共聚焦激光显微内镜检查的顺利完成。

探头式共聚焦激光显微内镜对胃底腺息肉的诊断价值

目的探讨探头式共聚焦激光显微内镜(probe-based confocal laser endomicroscopy,pCLE)在胃底腺息肉诊断中的价值。方法纳入2023年6-12月于陆军军医大学第一附属医院消化内科内镜中心行普通白光内镜(white light image,WLI)提示胃息肉患者63例,收集患者临床资料、白光内镜图像、窄带成像内镜(narrow band imaging,NBI)图像、pCLE内镜图像以及术后组织病理,统计验证胃底腺息肉在pCLE内镜下特点,分别计算不同内镜诊断的灵敏度、特异性、准确度、一致性。结果胃底腺息肉在pCLE内镜下主要表现为胃小凹开口拉长,“手牵手样”胃小凹开口,小凹开口周围血管规则,无荧光素渗出。WLI的灵敏度、特异度、准确度、一致性分别为:72.73%、75.00%、73.13%、0.343(胃底腺息肉),81.82%、71.43%、71.64%、0.354(增生性息肉);NBI的灵敏度、特异度、准确度、一致性分别为87.27%、83.33%、86.57%、0.673(胃底腺息肉);81.82%、85.71%、85.07%、0.554(增生性息肉);pCLE的灵敏度、特异度、准确度、一致性分别为92.73%、91.67%、92.53%、0.769(胃底腺息肉),90.91%、94.64%、94.03%、0.797(增生性息肉)。pCLE的灵敏度、特异度等均优于WLI和NBI,与病理诊断的一致性较好。结论pCLE可用于胃底腺息肉的诊断。

共聚焦激光显微内镜在胃癌鉴别诊断及预后评估中的研究进展

我国胃癌早期检出率仅为5%~20%,每年新发病例及死亡病例却较高。因此,早期发现对于改善胃癌患者预后及生存率意义重大。共聚焦激光显微内镜(CLE)能够将上皮黏膜放大1000倍,最大程度防止随机活检存在的误诊漏诊,无需病理学活检,基本等同于病理显微镜,存在较高的诊断价值。本研究则从胃癌患者的内镜诊断、CLE工作原理、CLE在胃疾病中的应用、CLE在胃癌患者中的优势与不足以及前景展望等方面进行论述,为临床提供一定参考价值。

共聚焦激光显微内镜在胰腺疾病中的应用进展

近年来,共聚焦激光显微内镜(CLE)在胰腺疾病中的应用越来越广泛。应用19 G微型探针的针式CLE(nCLE)检查能够实时观察胰腺囊壁,在胰腺病变的临床应用中展现出广泛潜力。CLE在明确胰腺囊性病变良恶性诊断中尤为关键,且对于确诊后制订治疗方案至关重要。传统的超声内镜引导下细针抽吸技术可能无法明确诊断或识别病变性质,但CLE显著提高了胰腺囊性病变的诊断准确率,并建立了基于nCLE的新诊断标准,验证了其可行性,未来nCLE诊断胰腺实性病变良恶性的准确性仍有待提升。

激光显微取样技术在川东北飞仙关组鲕粒白云岩碳氧同位素特征研究中的应用

显微取样碳氧同位素分析技术利用高聚焦激光束与碳酸盐岩样品作用,是一种在显微薄片下对岩石特定组构产生CO2的有效方法,其空间分辨率20～50μm,δ13C和δ18O的最好分析精度可达±0.22‰(σ),可以为碳酸盐岩碳氧同位素提供“高分辨率、原位”数据,微区分析是同位素测试发展的重要方向。用该技术对川东北飞仙关组鲕粒白云岩地球化学特征进行的研究表明,它可避免样品不纯带来的解释上的误差,为解释鲕粒白云岩成因提供了较为准确的地球化学信息,可进一步认识川东北飞仙关组鲕粒白云岩的成因问题。各种产状白云石的δ13C‰(PDB)值均大于当时海水值,说明白云石化流体没有淡水注入;而δ18O‰(PDB)分布较为离散,伴随白云石晶体大小增加,δ18O‰(PDB)值明显偏负,说明白云石化作用过程经历了埋藏加深、温度升高的过程,并且白云石化流体远离卤水源,其咸化程度减弱,为鲕粒白云岩的卤水渗透回流成因提供了有力的证据。

医用钛表面激光显微加工工艺参数的优化

为了改善医用钛的表面性能,增强植入物与骨组织之间的结合强度,采用400 WNd:YAG激光器,在压缩空气辅助条件下,对纯Ti进行激光微加工试验,并研究了激光加工工艺参数对微孔形状的影响.实验结果表明,随着激光辐照脉冲能量、脉冲宽度、脉冲次数的增加,微孔的孔径和孔深增加.激光辐射脉冲频率增加,微孔孔径加大,而孔深基本不变.采用优化的激光微加工工艺参数,对纯钛样品进行激光显微加工,可获得表面排布有规律的微孔,从而有利于扩大医用钛的临床应用范围.

激光显微探针￣（40）Ar／￣（39）Ar定年方法研究

实验结果表明，在激光探针￣（４０）Ａｒ／￣（３９）Ａｒ年龄和常规￣（４０）Ａｒ／￣（３９）Ａｒ年龄之间有较好的吻合性，多次测定ＢＳＰ－１角闪石国际标样年龄值大部分在２０２０－２０９０Ｍａ之间，多次测定周口店花岗岩中ＺＢＨ－２５国内标样年龄值大部分在１３０－１３５．９Ｍａ。分析区域可小到３０μｍ以下（激光束本身可被聚焦到１０μｍ以下）。研究表明，激光显微探针技术在下述工作中将是一个极有前途的工具：①测定不易大量获取的样品年龄，②研究遭受多期地质历史事件作用因而有复杂Ａｒ状态的岩石年代；③研究在岩石样品中填充在不同结构位置上的矿物年龄，进行每一个晶体颗粒内部和不同颗粒之间的数据比较；④测定年轻富钾样品￣（４０）Ａｒ／￣（３９）Ａｒ年龄。可以看出，激光法测年在构造年代学、变质岩年代学、矿床年代学研究方面能发挥独特作用。

CO_2激光显微手术联合中药口服、布地奈德雾化吸入治疗喉癌前病变临床观察

目的观察CO2激光显微手术联合中药口服、布地奈德雾化吸入对喉癌前病变患者喉功能的改善作用和疗效。方法经电子喉镜检查及病理检查确诊的喉癌前病变74例,随机分为观察组38例和对照组36例。观察组采用CO2激光显微手术联合术后口服自拟中药汤剂及布地奈德雾化吸入等治疗。对照组施行CO2激光显微手术,术后使用抗生素2 d。分别于治疗前及治疗后2、4周进行电子喉镜检查、嗓音声学分析、电声门图检测。术后1年记录病变复发及恶变情况。结果两组术后2周声带形态学评分与术前相比,P<0.05;嗓音声学、电声门图参数手术前后相比,P均>0.05。两组术后4周声带形态学评分及嗓音声学、电声门图参数相比,P均<0.05。随访1年,观察组复发率为5.26%(2/38)、恶变率为0%(0/38),对照组分别为13.9%(5/36)、5.6%(2/36),两组复发率及恶变率相比,P均<0.05。结论 CO2激光显微手术联合中药口服、布地奈德雾化吸入治疗喉癌前病变近期疗效较好,喉功能得到改善,并有助于降低远期复发率和恶变率。

激光显微切割分离细胞的微量RNA质量鉴定体系的建立

探索一套激光显微切割(Laser capture microdissection,LCM)分离细胞后获得的微量RNA质量鉴定标准操作流程。选取3个低温保存的胃癌旁组织样本,冰冻切片进行甲酚紫染色和病理学检查,利用激光显微切割技术分离非癌上皮细胞,提取RNA并以Agilent 2100生物分析仪鉴定RNA的纯度和完整性。同时,选择高、中、低3种不同表达丰度的6个基因(EF1A,ACTB,GAPHD,B2M,MED1,CK20),在每个基因的5′和3′端设计引物,RT-PCR扩增。以3个培养细胞制备的高质量RNA和3个有降解的胃癌旁组织样本RNA作对照,RT-PCR扩增结果与Agilent 2100生物分析仪的结果高度一致。结果显示冻存组织进行冰冻切片结合病理学检查后,LCM获取细胞提取微量RNA采用RT-PCR进行质量鉴定是一种操作简单的稳定方法,可以作为肿瘤基因组研究的有效和常规方法。

共聚焦激光显微内镜对非糜烂性反流病微观变化的诊断价值

目的探讨非糜烂性反流病(NERD)患者电镜下微观结构的改变,研究食管下端黏膜的微观变化及其与反流的关系,为NERD的诊断及治疗提供依据。方法选取具有烧心、反酸≥3个月、反流性疾病问卷(RDQ)≥12分的患者纳入本研究。据内镜下表现将无黏膜破损者定为NERD患者组。选择同期的健康志愿者作为对照组。用共聚焦激光显微内镜(CLE)测量上皮乳头内毛细血管襻(IPCLs)数目、直径及鳞状上皮细胞间隙等,并与病理学资料相比较。同时行24 h食管多通道腔内阻抗-pH监测。按照反流物的组成成分(液体、混合及气体反流)及反流物的pH值(酸、弱酸及无酸反流)分别分析。结果共有67例患者纳入CLE检查,其中NERD患者46例[平均年龄(48.9±13.6)岁,男24例,女22例],对照者21例[平均年龄(35.0±12.3)岁,男11例,女9例]。NERD组IPCLs的数目、直径(μm)均大于对照组(8.29±3.52 vs 5.69±2.31,P=0.010)(19.48±3.13 vs 15.87±2.21,P=0.041),对于鳞状上皮细胞间隙,NERD组的平均值(μm)明显大于对照组(3.40±0.82 vs 1.90±0.53,P=0.042);ROC曲线显示两组间IPCLs数目的最佳工作点为6.0/FOV(AUC 0.722,95%CI:0.592~0.853),IPCLs直径的最佳工作点为17.20μm(AUC0.847,95%CI:0.747~0.947),细胞间隙的最佳工作点为2.40μm(AUC 0.935,95%CI:2.895~0.995)。IPCLs数目增多、扩张与存在DIS诊断NERD的敏感性最高,为100%。酸反流与IPCLs数目增多(β=0.059,t=2.017,P=0.030)及IPCLs扩张(β=0.047,t=2.236,P=0.045)有关。按照体位分析,则以卧位下明显,酸反流与IPCLs数目增多和扩张的β值、t值及P值分别为0.063、2.895、0.038和0.156、1.023、0.040。Bland-Altman plot分析结果显示CLE与透射电镜测得的细胞间隙数值有良好的一致性。结论CLE可清晰地观察到食管黏膜IPCLs形态、管径的变化及细胞间隙增宽,CLE在体测得的DIS与透射电镜一致,CLE可以作为快速、方便诊断NERD微观变化的实用工具。

激光显微切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进展

激光显微切割技术是20世纪90年代后期发展,由现代物理学和生物学相结合的精确取材技术。该技术可以在显微镜下利用微激光束直接从不同的组织(包括活体组织)快速切割、分离和纯化生物体的目标组织、细胞及其组分,用于细胞和分子生物学的研究。笔者结合开展激光显微切割技术研究遇到的问题,从制片技术的改进、基因表达、DNA和蛋白质分析等方面,对激光显微切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进行了综述。

采用激光显微拉曼光谱仪研究山羊绒、羊毛纤维的结构

采用激光显微拉曼光谱技术对山羊绒、羊毛纤维的结构进行了研究 ,表明了该技术能有效、方便地相对定量比较和研究山羊绒、羊毛纤维的二硫键含量、蛋白质分子链的二级结构及聚集态结构等 ,指出山羊绒纤维胱氨酸二硫键含量低于羊毛 ,约为羊毛的 6 0 % ,而其大分子排列规整性高于羊毛 ,有序α

西藏邦铺斑岩型钼铜多金属矿床含钼铜脉石英的激光显微探针^(40)Ar/^(39)Ar年龄及地质意义

采用激光显微探针40Ar/39Ar微区定年方法,对西藏邦铺钼铜多金属矿床中含矿脉石英进行微区年代测定,获得等时线年龄为13.9 Ma±0.9 Ma(MSWD=29),其下限(13 Ma)代表了成矿年龄。该年龄略晚于二长花岗斑岩结晶年龄(13.9 Ma±0.3 Ma,MSWD=3.05),表明邦铺矿床成岩成矿作用是一个连续的岩浆作用过程。同时对冈底斯斑岩铜矿带成岩-成矿年龄进行统计学研究,获得冈底斯斑岩铜矿带成岩-成矿作用高峰期为15 Ma,成岩-成矿年龄线性方程为Y岩=1.291X矿+7.785(R2=0.291),充分说明邦铺矿床与冈底斯斑岩铜矿一样,是一次大规模爆发成矿的过程,成矿事件发生具有高度的统一性与集中性。

内镜黏膜下剥离术诊治高度可疑结直肠癌或癌前病变及共聚焦激光显微内镜在随访中的价值

目的探讨内镜黏膜下剥离术(Endoscopic submucosal dissection,ESD)治疗和诊断高度可疑或早期结直肠癌和癌前病变的有效性和安全性,比较整块活检病理与内镜活检病理对早期癌诊断意义及共聚焦激光显微内镜在随访中的价值。方法对于内镜下高度可疑早期结直肠癌或早期结直肠癌及癌前病变的19例患者行ESD治疗,术后评价ESD治疗相关的一次性整块切除率、组织学治愈性切除率、手术并发症;比较术后整块病理与术前内镜活检诊断符合率;在术后随访时用共聚焦激光显微内镜检查(1、3个月)以指导活检并观察局部复发情况。结果 19处病灶一次性整块切除率为94.7%(18/19),组织学治愈性切除率为84.2%(16/19);病变平均大小(2.3±0.5)cm,平均手术时间(70±19.4)min;术后腹痛2例,延迟性出血1例,内镜下钛夹止血成功,其余病例未发生急性或延迟性出血以及穿孔;术后病理:黏膜内癌7例,癌前病变10例,黏膜下癌2例,其中2例黏膜下癌均进一步补充开腹手术,术后切除病变肠段未发现癌组织残留和周边淋巴结转移;所有病例术后平均随访(24.6±8.0)个月,局部未见残留、复发及异时病灶发生;其中7例黏膜内癌ESD术后1、3个月采用共聚焦激光显微内镜检查以指导活检进行随访未见癌组织残留及复发。19处病灶ESD术后大块组织病理诊断符合率为100%,而术前活检病理诊断符合率仅为57.9%,有统计学意义(P<0.01)。结论 ESD具有较高一次性整块切除率和组织学治愈性切除率,是一种治疗和诊断高度可疑或早期结直肠癌病变或癌前病变的安全有效的方法。共聚焦激光显微内镜可能对早期结直肠癌的术后随访具有一定的价值。