应用激光电泳技术对MA737小鼠乳腺癌细胞膜表面电荷特性的研究

本工作应用激光多普勒电泳技术对ＭＡ７３７小鼠乳腺癌细胞膜表面电荷特性及高温（４２．５℃）对癌细胞的热效应进行了深入的研究。结果发现，ＭＡ７３７癌细胞的电泳迁移率（ＥＰＭ）明显高于相应正常细胞的ＥＰＭ（约２０％），表明癌细胞表面负电荷增高；实验发现唾液酸可能是ＭＡ７３７癌细胞膜表主要负电基团的来源之一。研究还发现，ＭＡ７３７癌细胞的热敏性比相应的正常细胞强，随高温受热时间的延长，癌细胞的ＥＰＭ呈下降趋势。

MA737小鼠乳腺癌细胞的激光电泳行为

细胞表面负电荷增高是恶性细胞重要的膜特征之一。采用激光电泳散射技术测定了MA737小鼠乳腺癌及其正常乳腺细胞的电泳迁移率(EPM)结果示:MA737乳腺癌的多普勒频移高于正常乳腺细胞,二者频移的加权平均之比值为1.18,且前者较后者的谱峰展宽,同时发现,肿瘤细胞的C值大于正常细胞一个数量级,自相关函数的衰减速度也观察到明显不同。由此进一步表明,肿瘤与正常细胞膜表面特征的差异性,主要取决于细胞表面负电荷的影响。

激光电泳测量条件及影响因素

研究激光电泳测量条件及影响因素发现：在实体瘤制备单细胞过程中，胶原酶消化获得的单细胞其电泳迁移率高于机械消化法，但在正常组织中胶原酶消化与机械消化法所得细胞的电泳迁移率并无差异。因此，消化酶的使用影响细胞表面电荷的测定。在细胞预处理过程中，醛化与未醛化细胞其电泳迁移率一致，醛化不影响细胞表面电荷的测定。改变细胞浓度，其电泳迁移率随浓度的升高而下降，红细胞浓度＞２×１０７／ｍｌ，其电泳迁移率存在一饱和值，肝素抗凝影响红细胞的电泳迁移率。因此，对激光电泳生物定标选择不加肝素抗凝的人全血，细胞浓度为３×１０７／ｍｌ。在２４℃、３７℃测量细胞电泳迁移率无改变，故激光电泳在此温度范围内其电泳迁移率具有温度稳定性。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定细胞中谷胱甘肽

谷胱甘肽(GSH)在抵抗氧化应激和重金属解毒过程中发挥着重要作用,建立灵敏、准确的GSH定量分析方法对于研究细胞重金属毒性机制具有深远意义。该研究以肝癌细胞(HepG2)为研究对象,以活性基团为芳香邻二醛的2,3-萘二甲醛(NDA)为标记试剂,建立了一种高灵敏度的测定细胞中GSH含量的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法(CE-LIF)。实验考察了缓冲溶液的种类、pH、添加剂等对GSH与NDA的反应速率和NDA-GSH检测灵敏度的影响。比较了pH为7.4和9.2的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲溶液、pH为9.2的硼砂和Tris缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度和反应速率,结果显示在pH为9.2的硼砂缓冲溶液中NDA-GSH的灵敏度最高且反应速率最快。进一步比较了4种添加剂对NDA-GSH灵敏度的影响,结果显示以β-环糊精(β-CD)作为添加剂效果最好。在最优的实验条件下,GSH与NDA可以在5 min内达到反应平衡,3 min内检测到NDA-GSH电泳信号。采用外标法对细胞中的GSH进行定量分析,方法线性范围为0.01~20.00 mmol/L,GSH的检出限和定量限分别为0.006μmol/L和0.020μmol/L,加标回收率和标准偏差分别为95.7%~112.6%和3.8%~5.0%(n=3)。通过建立的方法对HepG2细胞中的GSH进行定量分析,并研究了As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)刺激细胞后胞内GSH的变化情况。结果表明,在研究剂量水平下,As(Ⅲ)、As(Ⅴ)和Cr(Ⅲ)不会影响HepG2细胞中GSH的含量,而高剂量Cr(Ⅵ)会导致GSH含量显著降低。结合元素毒性数据,说明HepG2细胞内GSH含量与细胞毒性相关,GSH含量会随着细胞毒性增大而降低。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定人血浆中的富马酸比索洛尔

建立了毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIFD)技术测定人血浆中富马酸比索洛尔含量的新方法。选用荧光素异硫氰酸酯(FITC)为衍生化试剂,当缓冲溶液为25mmol/LNa2B4O7(pH9.2)、分离电压25kV、柱温20℃、电动进样(10kV×8s)、以峰面积内标法定量、于激发波长/发射波长=488/520nm柱上检测时,富马酸比索洛尔得到较好分离。在选定的电泳条件下,对其线性范围(20～1000μg/L)、检出限(10μg/L)、重现性(日内和日间精密度分别小于4.44%和5.59%)和回收率(96.19%～101.80%)进行了测定。结果表明:迁移时间的重现性<1.58%;峰面积之比的重现性<6%。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定缺氧缺血新生大鼠脑组织中氨基酸

建立了新生儿缺氧缺血性脑病(H IE)发生时脑组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量的高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的新方法。方法的最佳条件为:40 mmol/L硼砂溶液,分离电压20 kV,压力进样5 s,λem=488 nm、λex=560 nm。随机分为假手术组、新生儿缺氧缺血性脑病(H IE)组,小剂量地塞米松(DXM)组和大剂量DXM组的新生大鼠脑组织中EAA的含量测定,结果表明:假手术组EAA含量较低,H IE组EAA含量显著升高,大、小剂量DXM预处理后,EAA含量较H IE组有不同程度的降低。

毛细管电泳激光诱导荧光法优化量子点-转铁蛋白偶联体系及用于细胞标记

利用毛细管电泳激光诱导荧光(CE-LIF)表征了偶联剂N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)及NHS和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)混合偶联剂对CdTe量子点活化效果的差异,优化了CdTe与转铁蛋白(Trf)的偶联条件,比较了CdTe-Trf,CdTe-BSA偶联物及CdTe量子点对Hela细胞的标记效果。结果表明:NHS活化后的量子点性能优于混合偶联剂EDC-NHS。31.2μmol/L Trf与CdTe形成的偶联物CdTe-Trf对Hela细胞的标记效果最佳。CdTe-Trf在4℃孵育20 min可快速标记在Hela细胞的表面;在37℃孵育7 h后,可进入Hela细胞内。说明所制得的CdTe-Trf偶联物具有Trf的生物功能,它可通过特异性识别并结合细胞膜表面的Trf受体而转入Hela细胞。而CdTe-BSA偶联物的标记不具特异性,CdTe则不能用于Hela细胞的标记。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定抗癫痫药加巴喷丁

建立了毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)测定抗癫痫药加巴喷丁的方法。加巴喷丁经4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-Cl)衍生化后,采用10mmol/L硼砂-10mmol/L十二烷基硫酸钠(pH9.75)的缓冲体系,加巴喷丁在6min内实现高效基线分离。方法的线性范围为0.01～10mg/L(r=0.999 7),检出限为2μg/L,定量限为10μg/L。方法的平均回收率为100.2%～103.1%,相对标准偏差为0.15%～1.00%(n=3)。该方法灵敏、快速、准确和可靠,已用于加巴喷丁药物制剂的质量控制。

毛细管电泳-激光诱发荧光法检测大鼠PAG脑片灌流液中谷氨酸和天门冬氨酸的含量

目的 建立毛细管电泳 激光诱发荧光法 (CZE LIFD)检测大鼠中脑导水管周围灰质 (PAG)脑片灌流液中谷氨酸 (L Glu)和天门冬氨酸 (L Asp)含量的方法。方法 灌流液中Glu和Asp用NDA衍生标记 ,电泳条件为 :BECKMAN毛细管 ,长度 6 7cm ,内径 75 μm ,激激发波长 4 88λ/nm ,发射波长 5 2 0λ/nm ,分离电压 2 5kV ,分离时间 10min。结果 L Glu的回归方程为Y =2 0 0 9+4.0e-9X ,r =0 .9996 ,平均回收率为 99.8% ;L Asp的回归方程为Y =3384 6 +4.4e-9X .,r=0 .9970 ,平均回收率为 99.2 % ,Y为峰面积 ,X为浓度 (mol·L-1)。该方法能够检测大鼠PAG脑片灌流液在高钾刺激前后的L Glu和L Asp含量。结论 毛细管电泳 激光诱发荧光法可用于脑片灌流液内微量L Glu和L Asp的测定。

毛细管电泳-激光诱导荧光鞘流检测系统优化研究及在基因分析中的应用

对自组装的毛细管电泳 激光诱导荧光鞘流检测装置进行了系统的优化。探讨了鞘流速度、激光功率和检测的位置对检测信号的影响以及鞘流速度与峰面积和理论塔板数的关系。在优化的条件下 ,对荧光素检测的线性范围为 1× 1 0 - 8～1× 1 0 - 1 0 mol L;检出限为 7.5×1 0 - 1 1 mol L(S N =3 )。使用聚N ,N 二甲基丙烯酰胺 (PDMA)为双功能非胶筛分介质 ,将毛细管电泳 激光诱导荧光鞘流检测系统成功地用于DNA片段及基因PCR扩增产物分离检测。

毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定卡托普利和N-乙酰-L-半胱氨酸

建立了一种高效、快速的毛细管电泳分离-激光诱导荧光(CE-LIF)检测卡托普利(CAP)和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的分析方法。采用1,3,5,7-四甲基-8-溴甲基-二氟二硼-二吡咯甲川(TMMB-Br)为柱前衍生试剂,在50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=8.5)中,40℃下进行衍生反应10min。以荧光素为内标,25mmol/L硼酸盐缓冲溶液(pH=9.5)为电泳背景电解质,14min内达到基线分离。CAP和NAC的检出限分别为0.65nmol/L、0.76nmol/L。将该方法应用于人体尿液和血清中这两种物质的测定,回收率在97.0%~105.7%之间。

旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳

研制了一种新型毛细管阵列电泳仪———旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳。采用圆形毛细管阵列 ,激光扫描共聚焦荧光检测方式 ,利用了高速直流电机旋转反射镜来进行激光扫描 ,并且加快了采样速率 ;采用旋转编码器获得毛细管的绝对位置并对数据采集系统触发来采集信号 ,并利用研制的 8通道毛细管阵列电泳对酪氨酸、赖氨酸、谷氨酸及天冬氨酸的混合物进行了分离分析 ,获得了良好的分离效果。

毛细管电泳-激光诱导荧光用于肌肽类生物活性肽的分离检测

肌肽类生物活性肽是一类含组氨酸的二肽,广泛分布在脊椎动物体的骨骼肌以及神经组织中,具有抗氧化及保持生物体酸碱平衡等重要生物学功能.生物体液中这类物质的含量大小可以作为临床上诊断某些代谢疾病的依据[1,2].本文以3-(4-羰基苯甲酰基)-喹啉-2-羰醛(CBQCA)为柱前衍生试剂,对肌肽(Car)、鹅肌肽(Ans)和高肌肽(Hcar)进行了柱前衍生,建立了高效、灵敏的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法.……

毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测巴氯芬和加巴喷丁

采用新合成的6-氧-(N-琥珀酰亚胺乙酸酯)-9-(2'-甲氧羰基)荧光素(SAMF)作为柱前衍生试剂,用甘氨酸做内标,毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测血清中的巴氯芬(baclofen)和加巴喷丁(gabapentin).研究表明,在磷酸盐缓冲溶液(pH=8)介质中,25℃下15 min即可完成衍生反应.以pH=5的30 mmol/L的磷酸盐缓冲溶液作为电泳介质,衍生产物在16 min内达到电泳基线分离,检出限为4×10-10 mol/L.将新建立的方法用于血清中巴氯芬、加巴喷丁的分析测定,回收率为95.5%～102.01%,结果令人满意.

毛细管电泳—激光诱导荧光法分离四种神经递质类氨基酸的条件优化

目的探讨毛细管电泳分离神经递质类氨基酸的影响因素。方法采用毛细管电泳法分离4种神经递质类氨基酸的荧光素异硫氰酸酯(FITC-AAs)衍生物,分析电泳缓冲液、表面活性剂以及衍生条件对分离的影响。结果电泳缓冲液的组成、浓度、pH值、表面活性剂以及衍生条件对4种FITC-AA衍生物分离有很大影响,在以75 mm ol/L,pH 9.42硼酸盐含100 mm ol/LSDS为电泳缓冲液,50 mmol/LpH 9.8硼酸盐为衍生缓冲液,4种FITC-AA衍生物20 min内得到很好分离。结论通过条件优化,毛细管电泳-激光诱导荧光技术分离神经递质类氨基酸的分离效果能得到很大提高。

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定基因工程人细胞生成素的N-连接糖谱

目的 建立重组人红细胞生成素 (EPO)中影响体内生物学活性的含唾液酸和去唾液酸的N 连接糖的糖谱。方法 用肽糖苷酶F释放EPO中与天冬酰胺连接的寡糖 ,再用唾液酸酶脱去糖末端的唾液酸 ,采用荧光试剂APTS标记后 ,以毛细管凝胶电泳 激光诱导荧光法分离和检测糖的各种形态。结果 EPO样品含有大致相同的N 连接糖谱 ;去唾液酸后的N 连接糖组分的保留时间延长 ;体内生物学活性不同的样品 ,其N 连接糖也有差异。 结论此法可用于判断EPO产品的来源及批间差异 ,与肽图相结合可作为EPO的指纹鉴别图谱 。

分散固相萃取结合毛细管电泳-激光诱导荧光法测定血清中甲基化精氨酸

介绍一种分散固相离子交换萃取方法,结合毛细管电泳-激光诱导荧光检测法,测定血清样品中不对称二甲基精氨酸、对称二甲基精氨酸和单甲基精氨酸。将提取甲基化精氨酸的树脂粒加入到4-氯-7-硝基苯并呋喃乙腈溶液和碱性硼酸钠溶液(pH=10.5)的混合溶液中,于60℃水浴中衍生化。在80 mmol/L磷酸盐溶液(pH=2.0)分离电解质和20 kV分离电压条件下,这3种衍生物在熔融石英毛细管中获得基线分离。根据FDA生物分析方法验证指南,进行方法验证,结果满意。利用该方法测定了当地医院血清样品中的3种甲基化精氨酸含量。

双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分

目的 建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法 针对转基因大豆基因组中被导入的 35 S启动子、NOS终止子和 CP4 - EPSPS抗草甘膦基因等外源基因 ,自行设计了两对引物 ,采用双重 PCR同时扩增上述基因 ,用 8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质 ,在 5 0 cm× 10 0μm i.d.涂壁毛细管中 ,于 - 10 k V电压下用激光诱导荧光 -毛细管电泳检测转基因大豆的 PCR扩增产物。结果 在优化的 PCR反应和毛细管电泳条件下 ,本法可以同时检测出转基因大豆样品中三种外源基因 ,双重 PCR扩增产物经测序证实与原基因序列完全一致 ,表明本研究设计的引物合理 ,扩增结果可靠。毛细管电泳进样量仅需 5 nl,分析时间为 2 4 min,迁移时间的相对标准偏差≤ 3.2 %。结论 本方法较常规琼脂糖凝胶电泳特异性高 ,分析时间短 ,重现性好 ,检测灵敏 。

毛细管电泳分离脑脊液中神经递质类氨基酸及其临床应用

目的建立快速测定人脑脊液中神经递质类氨基酸的方法。方法用高效毛细管电泳-激光诱导荧光法检测了40例正常脑脊液、38例病毒性脑炎病人脑脊液、42倒脑出血病人脑脊液神经递质类氨基酸。结果在20rain内分离出4种氨基酸，线性范围为0．1～50μmol／L，峰的迁移时间RSD0．56％～2．06％，峰面积RSD2．24％～3．79％；回收率为98％以上。结论高效毛细管电泳-激光诱导荧光法具有快速、准确、灵敏的特点，可作为临床检测脑脊液标本中的神经递质类氨基酸的方法。

中药多糖及人血清中糖蛋白N-糖链的毛细管电泳指纹图谱研究

该文建立了激光诱导荧光毛细管电泳(CE-LIF)检测中药多糖和人血清糖蛋白中N-糖链的分析方法。利用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸钠(APTS)为柱前荧光衍生试剂,结合CE分析,可在15 min内同时测定7种中性单糖。该方法应用于中药制剂和药物植物中单糖组成和含量的测定,加标回收率为88.0%~102%,相对标准偏差(RSD)小于3.0%。该方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适合于监控中药制剂中糖类物质的种类和含量。同时,基于毛细管凝胶电泳方法(CGE)建立了人血清中糖蛋白的N-糖链指纹图谱。利用中性涂层聚乙烯醇(PVA)有效地抑制电渗流,增加分离时间,实现了糖链异构体的有效分离。对5μL人血清进行毛细管电泳分析,共分离得到17个组分。这为进一步研究复杂生物体系血清蛋白的糖基化变化提供了可能性。