基于激光红外成像系统的土壤微塑料分析技术与研究进展

梳理了激光红外成像系统分析土壤样品中微塑料的技术原理、前处理、样品转移、检测流程,归纳对比了物理分析和化学分析(显微镜分析、光谱分析、质谱分析)的技术应用与局限性分析,包括主要检测方法的技术流程、适用领域以及优缺点。在以上分析的基础上,归纳总结了激光红外成像系统在土壤样品微塑料检测中的适用性和先进性,方法能够在土壤环境中微塑料研究以及污染防控领域发挥重要作用。

以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统的构建及应用

目的构建以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统,为抗结肠癌药物筛选提供新的技术手段。方法首先选取细胞系并确定系统的技术参数,构建以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统,设计实验验证筛选系统的有效性;而后将构建的筛选系统初步应用,筛选化合物库Z183593-L1200,并对筛选结果进行验证,验证筛选系统的可行性。结果完成筛选系统构建后,通过筛选系统(in-cell Western blot)测得的Hce8693和T47D细胞的KRAS表达差异与普通Western blot一致,筛选系统测定的siRNA系统的敲低效率与普通Western blot亦一致,筛选系统的有效性得到初步验证。筛选激酶抑制剂化合物库Z183593-L1200后,选取活性最好的化合物PF-04691502进行验证;浓度梯度实验显示,随着PF-04691502浓度升高则KRAS胞内含量降低,KRAS胞内含量对PF-04691502浓度呈梯度依赖性;细胞增殖实验结果显示PF-04691502对Hce8693细胞的半数有效浓度(IC50)为3.546μmol/L,进一步验证了系统的可行性。结论所构建的以KRAS为靶标的抗结肠癌药物筛选系统具有一定有效性和可行性,能够用于以KRAS蛋白为药物靶点的药物高通量筛选,为抗结肠癌的药物研发提供了新的筛选方法。

用于研究人凝血因子Ⅷ重链抗原表位的双色荧光免疫印迹分析法

目的:寻找更简便精确的方法来检测人凝血因子Ⅷ的抗原表位。方法:采用PCR技术从人凝血因子Ⅷ的克隆载体pENTR223.1/FⅧ上克隆出FⅧ重链(FⅧ-N)的cDNA。将cDNA插入原核载体pET21 a构建重组表达载体pET21 a-FⅧ-N,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达H is-FⅧ-N融合蛋白。以表达产物免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗FⅧ-N的抗血清。接着在重组表达载体pET21 a-FⅧ-N中引入内参F lagotag。对FⅧ-N进行定点突变,构建两个突变克隆N1和N2,对二者以及原FⅧ-N进行双色荧光免疫印迹分析。用双色红外激光成像系统进行扫描和定量分析,以绿荧光与红荧光的光密度比值表示突变克隆抗原性的大小。结果:双色荧光免疫印迹分析表明,突变克隆N1,N2的抗原性与原FⅧ-N相比均有显著下降(P<0.05)。FⅧ A2区的三个氨基酸残基Arg484,Arg489,Arg593对FⅧ-N抗原性起着重要的作用。结论:成功建立了人凝血因子Ⅷ重链抗原表位检测的双色荧光免疫印迹分析法。