应用激光扫描细胞仪分析GRP78在食管癌各级病变中的表达情况

目的探索应用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果的可行性、客观性及准确性,了解葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白在食管癌各级病变中的表达情况。方法应用激光扫描细胞仪对食管癌组织芯片中GRP78免疫组化结果进行分析,对激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果的相关性进行分析。结果激光扫描细胞仪扫描整张组织芯片后获得选定组织区域的虚拟图及阳性像素点百分比;正常食管组织、中-重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的GRP78阳性率分别为0%(0/8),90.4%(19/21)、83.3%(5/6)和47.4%(18/38)。GRP78在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌3组中表达的差异有显著性意义(P<0.01)。激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01))。结论激光扫描细胞仪用于免疫组化结果的分析具有高通量、高度客观、准确的优点。GRP78在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中可能扮演了重要角色。

应用激光扫描细胞仪分析食管癌中HP1-γ蛋白的表达

目的了解异染色质相关蛋白1-γ(heterochro-Matin-associated protein 1,HP1-γ)在食管癌发生发展各阶段的表达情况,并初步探讨利用激光扫描细胞仪分析免疫组化结果较传统光镜下评分方法的优势。方法选用含各级别食管癌病变组织的组织芯片,采用免疫组化方法检测其中HP1-γ的表达,并通过激光扫描细胞仪对免疫组化结果进行定量分析。将激光扫描细胞仪分析结果和传统光镜下评分结果进行相关性分析。结果HP1-γ蛋白主要表达于胞核。在正常食管组织、中-重度异型增生、原位癌、食管鳞癌的阳性率分别为37.5%(3/8),100%(21/21)、100%(7/7)和23.7%(9/38),且在正常食管、中-重度异型增生加原位癌、食管鳞癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。激光扫描细胞仪分析结果与传统光镜下评分结果具有高度相关性(P<0.01)。结论HP1-γ蛋白可能在食管正常细胞向恶性细胞转化的过程中起到了一定的抵抗作用。与传统人工评分方法相比,激光扫描细胞仪在分析免疫组化结果时具有高通量、高度客观、准确的优点。

激光蛋白细胞检测仪在葡萄膜炎中的应用价值

目的:探讨激光蛋白细胞检测仪(laser flare cell meter,LFCM)定量测定葡萄膜炎患者房水闪辉的临床应用价值。方法:选择2009-07/2010-07在我院就诊、复查的葡萄膜炎患者129例171眼,根据其临床特点将其分为前葡萄膜炎组87例87眼,中间葡萄膜炎组10例20眼,后葡萄膜炎组32例64眼;正常对照组50例100眼。应用LFCM(FM-600型)检测各期患者房水闪辉情况,检查前所有患者均经裂隙灯显微镜检查,并进行房水闪辉分级。结果:前葡萄膜炎患者裂隙灯检查前房闪辉48眼(1+),35眼(2+),2眼(3+),2眼(4+);LFCM检测1～2级房水闪辉的平均值分别为28.6±6.7pc/ms,144.3±28.1pc/ms,3～4级房水闪辉由于背景干扰大,检测结果显示警告或无法检测;前葡萄膜炎患者1～2级房水闪辉的裂隙灯显微镜检查与LFCM测定结果呈正相关(r=0.901,P<0.01);与对照组房水闪辉值比较(5.1±1.8pc/ms),差异具有统计学意义(P<0.05)。中间葡萄膜炎患者裂隙灯检查前房闪辉10眼(1+),10眼(2+),LFCM检测1～2级房水闪辉的平均值分别为31.7±5.0pc/ms,130.7±12.9pc/ms;中间葡萄膜炎患者1～2级房水闪辉的裂隙灯显微镜检查与LFCM测定结果呈正相关(r=0.867,P<0.01);与对照组房水闪辉值比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。后葡萄膜炎患者裂隙灯检查前房闪辉均为0级,LFCM检测房水闪辉的平均值为9.8±3.1pc/ms,高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LFCM(FM-600型)可确切判断葡萄膜炎患者轻、中度的血-房水屏障破坏,对判断眼前段炎性反应和指导临床治疗有重要意义。

iCys激光定量成像细胞仪对全心脏化学发光和荧光标记的定量分析

目的:利用iCys激光定量成像细胞仪(iCys research imaging cytometer,RIC)对小鼠全心脏切片中标记的化学发光或荧光信号进行大面积、高速度、高分辨率的扫描,根据所获得图像统计分析小鼠全心脏切片中荧光和化学发光的阳性细胞比例,并分群追踪分析对象的图像以排查假阳性。方法:利用血管紧张素II灌注小鼠,对心脏切片进行巨噬细胞特异性的mac-2抗体的免疫组化,通过光电二极管(photodiode,PD)检测器收集二氨基联苯胺法(DAB染色法)的化学发光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的巨噬细胞的阳性面积;利用小鼠心肌梗塞模型后心脏进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)标记,通过器光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器收集荧光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的细胞死亡率。结果:400倍放大时iCys激光定量成像细胞仪对小鼠全心脏切片的扫描花费大约20min,获得大约300张局部图片,软件自动拼合成全心脏切片图。通过对全心脏图片的统计分析显示:AngII灌注的全心脏中DAB染色法显示的mac-2抗体阳性巨噬细胞阳性面积为(2.36±0.7)%;全心脏的TUNEL标记后荧光阳性的死亡细胞比率为(32.3±4.1)%。结论:iCys激光定量成像细胞仪可以对病理切片样本中的化学发光以及荧光信号进行大面积、高速度、高清晰的扫描,分析软件可以进行后期的图像的定性定量分析,并且可以通过对分析对象的追踪图像显示以明确统计分析的正确性。

JGCG—1型激光细胞手术仪研制成功

在本院李嘉泳教授领导下，经物理系赵白副教授、张闻迪和生物系楼宝城等同志的努力钻研，JGCG-1型激光细胞手术仪已研制成功。

粘附式细胞仪测试高温对培养巨噬细胞DNA荧光强度的影响

将体外培养４－５天的小鼠腹腔巨噬细胞分成４组，分别置于３７℃、３９℃、４１℃、４３℃恒温环境再培养２ｈ。细胞用４，６－二脒基－２－苯基吲哚（ＤＡＰＩ）染色后，用ＡＣＡＳ５７０激光细胞仪进行测试和分析。以综合荧光量和平均荧光量作为判断高温对细胞中ＤＮＡ荧光强度影响的主要参数，结果显示，３９℃组细胞中ＤＮＡ荧光强度降低，但４１℃、４３℃组的又缓慢上升，形成弧形曲线。

流式细胞仪筛选环磷酰胺诱导骨髓嗜多染红细胞微核的技术方法

目的利用单一荧光试剂吖啶橙(acridine orange,AO)和简单的单激光流式细胞仪(FCM)计数骨髓嗜多染红细胞的微核率,达到了解化合物诱导微核作用的目的。方法分别以环磷酰胺(CP)处理雄性KM小鼠和SD大鼠,采用AO荧光染色和单激光流式细胞仪检测小鼠和大鼠骨髓含微核的嗜多染红细胞(MNPCE)及含微核的成熟红细胞(MNNCE)的微核率,并对结果进行比较分析。结果随着CP浓度的增高,骨髓中MNPCE和MNNCE也相应增多,呈良好的量效关系。实验结果同时和手工计数比较,没有显著差异。结论 AO_FCM自动化检测方法完全适用于小鼠和大鼠骨髓MNPCE及MNNCE微核率的检测。

第二节流式仪对红细胞微核的自动化检测

一、研究概况红细胞因为没有主核,因此其MN的检测要相对容易一些。早在1982年,法国癌症研究中心Hutter博士等就用单激光流式细胞仪做了红细胞MN自动化检测的尝试。他们用染色体损伤剂环磷酰胺（CP）和丝裂霉素C（MMC）诱导小鼠骨髓红细胞MN,选用二氨基苯茚酮（简称DAPI）荧光染料染DNA（主核和微核）,SRIOI染蛋白质成分,并将机检结果和镜检结果作了比较,两种MN检测结果相关系数为0.96,吻合很好。

房水闪辉和细胞的定量测量

激光蛋白细胞检测仪可快速、精确、定量测定房水蛋白浓度和细胞数量,评价各种眼内疾病、手术和治疗对血-房水屏障功能的影响,对疾病的诊断和疗效观察提供有利帮助,本文就其在临床上的应用作一综述。

肝细胞肝癌对机体细胞免疫的影响

目的 探讨原发性肝细胞肝癌(HCC )对机体细胞免疫机能的影响。方法 采用血常规检测,应用荧光标记抗体及三色激光流式细胞仪对5 1例肝细胞肝癌患者和17例对照样本术前、术后外周血的细胞免疫指标进行检测。检测项目包括:T辅助淋巴细胞(THL) ,细胞毒T淋巴细胞(CTL) ,NK细胞,单核细胞,并进行手术前后的对比分析。结果 原发性肝细胞肝癌(HCC)术后THL、CTL、NK和单核细胞百分比、单核细胞绝对值的平均值较术前分别增高0 .91% ,8.5 8% ,8.85 % ,3 1.45 % ,66.5 5 % ,手术前后有显著性差异(P <0 .0 5或P <0 .0 1)。良性对照组的术前与术后上述各项指标比较,均无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论 肝细胞肝癌(HCC)对机体的细胞免疫产生明显抑制作用,在肿瘤切除之后,这种抑制能力随之减弱,细胞免疫得到恢复。而良性对照组对机体细胞免疫的抑制不显著。综合分析细胞免疫的变化情况,对判断HCC的预后及肿瘤复发有重要的意义。

我校细胞生物实验室的开放管理模式

我校细胞生物实验室的开放管理模式上海第二医科大学贾建德，丁文彬，张怿我校的细胞生物实验室是医学基础性实验室，经重点学科的资助和扶植，在基础研究、应用研究、技术服务上逐渐形成了自身的特色，具有良好的实验条件。１９９２年起该实验室开始探索对外开放的途径和...

原位定量检测体外培养的尿道黏膜上皮细胞活性

目的解决在不透明载体上观察细胞生长状况的难题。方法取雄性新西兰幼兔1只,进行尿道黏膜上皮细胞的原代培养并传至第3代。将其接种于胶原-壳聚糖复合材料上,体外培养3、7、14和21d后,行6-羧基二乙酸甲酯荧光素与碘化丙啶荧光双染,并应用激光共聚焦细胞仪检测。结果尿道黏膜上皮细胞在胶原-壳聚糖复合材料载体上生长,增殖良好。培养3、7d,活细胞荧光强度值为(1.09±0.13)×108、(2.04±0.13)×108,培养14、21d活细胞荧光强度值分别为(0.55±0.09)×108、(0.47±0.03)×108,与培养3、7d比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各时间点死细胞荧光强度值差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用激光共聚焦细胞仪对不同波长荧光强度分别进行定量分析,可以在原位定量快速检测尿道黏膜上皮细胞活性,动态观察组织工程组织生长情况,解决无法在不透明载体上观察细胞生长状况的难题。

激光技术在生命科学中的地位

激光技术在生命科学中的地位许松林（上海第二医科大学）激光技术已深入到生命科学的各个领域，尤其在医学方面取得了广泛的应用。如眼科，激光改变了传统的手术治疗方法，提高了疗效；激光内腔镜的使用免除了病人开刀手术的痛苦；激光革新了传统的显微成像术；激光技术促...

基于FCM技术对喉癌细胞最佳X射线剂量的研究

目的:本文采用Annexin V-FITC/PI双染色、激光流式细胞术(Annexin V-FITC/PI-FCM)对经过不同剂量X射线(X-ray)辐照后的人上皮样喉癌细胞(Hep-2)继续培养48h时的凋亡情况进行了研究。观察受到不同剂量X-ray辐照后细胞活性的变化,探索Hep-2细胞的最佳X-ray放射剂量,进而为临床探索X-ray放射治疗喉癌的最佳剂量提供试验上的初步参考。方法:采用Annexin V-FITC/PI双染色、激光流式细胞术对受不同剂量X-ray辐照后的人上皮样喉癌细胞继续培养48h时进行研究,观察细胞形态、活性的变化,探索不同剂量组细胞的凋亡率。结果:试验结果表明,X-ray的辐照明显地引起了癌细胞的凋亡。总体上讲,细胞的凋亡率与X-ray的辐照剂量成一定的依赖关系,但并非线性。在所设定的剂量组中以12Gy剂量组细胞的凋亡率(20.793±1.133)%(P<0.01,n=5)为最高,2Gy～8Gy之间的剂量组Hep-2细胞凋亡率变化不够显著(P>0.05,n=5)。单位剂量凋亡率(凋亡率/辐照剂量)以2Gy组的(4.887±0.211)%(P<0.05,n=5)为最高。结论:经综合分析得出初步结论,对Hep-2细胞进行X-ray辐照,单次辐照剂量2Gy,周累计辐照剂量8Gy,对抑制Hep-2细胞的增殖效果有望更好。

用膜滤过联合激光扫描细胞仪检测恶性肿瘤患者循环肿瘤细胞

目的建立用膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)联合激光扫描细胞仪(LSC)检测循环肿瘤细胞(CTC)的方法。方法将不同数量的乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞分别混入健康血标本中,用ISET联合LSC自动扫描分析,以建立稳定的检测方法,同时验证该方法肿瘤细胞回收率、敏感性及特异性。结果建立了用ISET(用8μm孔径的聚碳酸酯滤膜)联合LSC,并用CK8抗体、CD45抗体分别作为肿瘤上皮细胞的阳性和阴性选择标记来检测CTC的方法;该方法肿瘤细胞回收率为(10.34±1.15)%,在混入60～600000个肿瘤细胞范围内回收率保持稳定(P>0.05);达到可检测到1ml血中一个肿瘤细胞的敏感性,相同条件下空白对照组均未检出肿瘤细胞。结论用ISET联合LSC检测恶性肿瘤患者CTC方法简便、敏感性高、特异性强,有望进一步应用于临床。

CHO细胞微核的激光扫描细胞仪自动化检测方法

运用激光扫描细胞仪,采用FITC和PI两种荧光染料,结合细胞胞质分裂阻断微核技术,对环磷酰胺(CP)诱导的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞微核进行了检测,并将该方法与传统微核显微镜检法进行了比较,旨在探索CHO细胞体外微核的激光扫描细胞仪自动化检测方法.结果表明,激光扫描细胞仪方法能够准确识别胞质阻滞的双核细胞及双核细胞中的微核,环磷酰胺(CP)处理浓度与其诱导的双核细胞微核率成正相关,激光扫描细胞仪法与传统显微镜检法获得的微核率具有良好的相关性.激光扫描细胞仪检测方法能简便、经济、快速、高效地检测CHO细胞微核,适于体外培养细胞尤其是贴壁细胞微核的高通量检测.

微核实验的自动化检测研究进展

评价各种物理的(如多种射线、微波、电磁辐射等)、化学的(废水、废气、废渣 ,简称“三废”)以及生物因子(如多种细菌、霉菌及其生物毒素)的遗传毒性是毒理学研究的重要组成部分。在一系列遗传毒性实验中 ,微核实验(micronucleitest,MNT)具有试验结果可信度高 ,操作相对简单 ,可同时对多个遗传学终点进行检测等特点而成为必做实验之一[1]。然而 ,随着工业化的不断发展 ,需要运用MNT检测的有害因子越来越多。依赖于人工显微镜计数的传统MNT愈发满足不了实际工作的需要 ,实现MNT的自动化检测就成了MNT进一步发展的关键。本文拟重点论述流式细胞仪在MNT的自动化检测中的应用 。