基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对非结核分枝杆菌的鉴定与分型

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS),对非结核分枝杆菌菌株实施鉴定并对其分型。方法 通过收集2018-2023年从临床分离不同感染部分的菌株展开分析,提前需要确认培养物自身的抗酸阳性,然后开始培养可疑样本,采用 MALDI-TOF MS对罗氏培养基上的新鲜菌落进行鉴定。结果 在本次通过应PCR鉴定结果作为金标准,其中经鉴定能力进行显示,本次通过对鉴定结果进行比较中,其中对NTM鉴定符合成功率为90%,鉴定失败率为10%。通过对数据库进行不同分枝杆菌鉴定菌种率的变化比较,DB-164-Mycobacteria Library 5.0平均分值,经比较,和Bruker MBT-DB5989平均分值具有统计学差异(p<0.05)。结论 对NTM鉴定中采用DB-164-Mycobacteria Library 5.0能够进行快速鉴定,同时也是不可或缺的实验方法,同时也需要其他方法进行辅助鉴别。

表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术对肝细胞癌诊断价值的系统评价

目的系统评价当前研究表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术（surfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry，SELDI—TOF—MS）诊断肝细胞癌文献的质量，了解SELDI—TOF—MS技术对诊断肝细胞癌的准确性.方法采用计算机和手工全面检索收集当前研究SELDI—TOF—MS对肝细胞癌诊断的文献，并根据诊断性研究质量评价工具（qualityassessmentofdiagnosticaccuracystudies，QUADAS）质量评价标准评价符合纳入标准的文献的质量，根据可供分析的资料，进行Meta分析.结果共检索到相关文献134篇，符合纳入标准的文献10篇，其中中文文献7篇、英文文献3篇.在合并分析中综合灵敏度、特异度和优势比（DOR）分别为87．00%，94．00%和196．42，SROC曲线下面积为0．98.结论SELDI—TOF—MS技术对肝细胞癌具有较好的诊断价值.

运用激光解析电离飞行时间质谱技术检测肺腺癌的血清蛋白表达

目的运用激光解析电离飞行时间质谱技术(ClinProt技术)寻找肺腺癌相关蛋白,以期对肺癌的早期诊断、治疗效果及预后等做出判断。方法应用ClinProt技术对10例患者及10例正常人进行质谱分析寻找差异蛋白,观察差异蛋白在肺腺癌患者术后1周的变化。结果正常人与肺腺癌患者血清比较,发现6个差异蛋白峰,其中相对分子质量为2661、2991的蛋白在肺腺癌组表达增高且术后继续呈增高趋势,相对分子质量为4091、4210、4644、5336的蛋白在肺腺癌组表达降低且术后继续呈降低趋势。结论肺腺癌患者与正常人之间的差异蛋白可能成为潜在的肺腺癌血清标志物。发现差异蛋白在术后的变化,可能有助于治疗效果的检测及预后的判定。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在临床微生物检测中的应用

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术可以对临床样本中分离的细菌、真菌等进行快速鉴定。与传统的表型鉴定及分子生物学技术相比,该技术具有高通量、低成本、快速、准确的优势,而且可以直接从血培养、尿等临床标本中鉴定细菌。在细菌的耐药性检测方面也已获得阶段性进展。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在尿标本微生物快速鉴定中的应用

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在尿液标本微生物快速鉴定中的临床应用价值。方法收集苏州大学附属第二医院2016年10-12月住院和门诊送检的中段尿标本进行差速离心沉淀后经MALDI-TOF MS技术检测,同时进行尿常规和有形成分分析,并与传统尿培养鉴定结果进行比较,计算质谱的鉴定率。结果 212例尿培养阳性标本中MALDI-TOF MS技术鉴定出病原菌168例,总鉴定率为79.2%,大肠埃希菌鉴定率最高,为92.0%,其他肠杆菌科细菌、肠球菌属、非发酵菌科鉴定率分别为79.4%、66.5%、66.7%,假丝酵母菌属、链球菌属、其他革兰阳性菌标本量少,鉴定率分别为58.3%、50.0%、44.4%。其中140例标本菌落计数大于105 CFU/mL,鉴定率为92.9%。结论 MALDI-TOF MS技术直接检测尿液标本中的微生物具有简单快速、准确性高等优点,可以弥补传统方法的不足,有效缩短检验时间,优化实验室流程,准确快速地为临床提供检验结果,结合尿常规和有形成分分析等辅助手段具有较高的临床应用价值。

表面增强的激光解析电离飞行时间质谱技术在肝细胞癌血清学诊断中的应用

目的:检测HBV感染携带者与肝细胞癌(HCC)患者血清蛋白质的差异性表达,以发现HCC的肿瘤诊断标志物.方法:用表面增强的激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测27例HCC患者,27例HBV感染携带者,25例健康对照血清中的蛋白质谱,并用Biomarker Patterns System 5．0软件分析,建立诊断模型．结果:检测HCC患者与HBV感染携带者。正常对照与HCC患者,正常对照与HBV感染携带者的差异性蛋白分子,据此构建分类模型,得到的灵敏度和特异度分别为93％,85％; 96％,96％;84％,89％．其中相对分子质量为8141 Da的蛋白峰在HCC组明显高于HBV感染组(p<10-5);相对分子质量为3448 Da的蛋白峰在HCC及HBV感染携带组表达均较正常组显著增高(P<10-5),而在HCC-HBV组无明显差异(P>0．05),提示其可能为HBV感染的一种标志蛋白;相对分子质量为777) Da的蛋白峰在3组中均有差异性表达．结论:SELDI蛋白芯片技术检测血清蛋白质谱法诊断HCC具有较高的灵敏度和特异度,操作简单快捷,临床应用前景广阔,为HCC诊断提供了新的血清学方法．

表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术在结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌差异蛋白分析中的应用

目的对比分析结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白、分泌蛋白指纹图谱,评价表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在结核病快速诊断中的价值。方法结核分枝杆菌和胞内分枝杆菌标准菌株经BACTEC960仪培养30d,灭活菌株,离心沉淀物提取菌体蛋白,上清液提取分泌蛋白。利用SELDI-TOF-MS进行蛋白质/多肽谱分析。结果结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白指纹图谱存在差异,有33个差异蛋白峰;结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌分泌蛋白指纹图谱存在差异,有51个差异蛋白峰;结核分枝杆菌有其特征性蛋白峰。结论结核分枝杆菌与胞内分枝杆菌菌体蛋白、分泌蛋白指纹图谱有明显的差异蛋白峰,应用SELDI-TOF-MS技术可以早期、快速、简便地诊断结核病。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原微生物鉴定中的应用

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术最早由田中耕一于1987年提出[1-2],之后逐渐发展并应用于病原微生物的鉴定[3]。MALDI-TOF MS技术凭借其简单快速、高效准确等优点[4],已广泛应用于食品[5]、水产[6]、人类及兽医临床[7-8]等多个领域的病原微生物鉴定工作,在细菌、真菌和病毒鉴定方面,展现了巨大的应用潜力[9]。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在病原菌鉴定中的应用

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在快速鉴定血流感染病原菌的应用价值,并分析MALDI-TOF MS方法鉴定病原菌的准确性。方法收集321例血流感染患者的血液标本进行血培养,微生物室细菌培养结果均为阳性。从血培养阳性瓶中取病原菌至分离胶促凝管中,应用MALDI-TOF MS对富集的病原菌进行菌种鉴定。同时,对血培养瓶中的阳性标本进行常规培养,获得的纯菌落采用VITEK 2 COMPACT微生物分析系统进行检测,并将MALDI-TOF MS检测结果与VITEK 2 COMPACT结果进行对比。若检测结果有差异,则进一步进行基因测序法予以确定。结果321例阳性血培养标本中共分离出180株革兰阴性杆菌,MALDI-TOF MS鉴定准确率为97.78%,无鉴定错误,但4株无鉴定结果;分离出的141株革兰阳性菌中,主要以革兰阳性球菌为主,MALDI-TOF MS鉴定准确率为84.39%,1株蜡样芽胞杆菌误鉴定为大肠埃希菌,出现了菌属水平鉴定错误,其余为种类鉴定错误。结论与传统血培养及生化鉴定比较,MALDI-TOF MS在血流感染中的鉴定符合率较高,且鉴定方法简便、迅速。

运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分析分枝杆菌液体培养管污染菌菌群特征

目的了解分枝杆菌液体培养时产生的污染菌菌群特征,分析产生污染的原因,寻找降低污染的方法。方法收集广西壮族自治区胸科医院2023年5月10日至8月25日送检的痰液和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本进行分枝杆菌液体培养,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术对分枝杆菌液体培养后产生的污染菌进行鉴定,将鉴定出的菌种进行统计归类,分析污染菌的菌群特征。结果6090份呼吸道标本中分枝杆菌阳性标本864份,培养阳性率14.19%(864/6090),污染标本71份,污染率为1.17%(71/6090)。71份污染标本中共分离出74株污染菌,主要菌属为芽孢杆菌和曲霉菌,分别占31.08%(23/74)和24.32%(18/74)。其中灌洗液标本1429份,培养出分枝杆菌阳性标本279份,培养阳性率19.52%(279/1429),污染13株,污染率0.91%(13/1429);痰标本4661份培养出分枝杆菌585株,培养阳性率12.55%(585/4661),污染标本58份,污染率1.24%(58/4661);两种标本培养的阳性率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=43.68,P<0.05),污染率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.06,P>0.05)。结论分枝杆菌液体培养时产生的污染菌菌群复杂,以芽孢杆菌、曲霉菌为主,因此,必须规范标本的采集和运送,采用有效的前处理方法,以达到降低液体培养污染率的目的。

霍乱弧菌基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术谱库的构建

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAIDI-TOF MS)技术构建霍乱弧菌谱库。方法选取56株有代表性的霍乱弧菌,在相同环境下培养,通过生化、分子生物学及血清型鉴定,利用MAIDI-TOF MS对56株霍乱弧菌进行质谱数据采集,建立数据库。另选取10株野生霍乱弧菌及104株非霍乱弧菌用自建数据库进行MAIDI-TOF MS检测及评价。结果自建数据库对10株野生霍乱弧菌鉴定,阳性率为100%,对104株非霍乱弧菌鉴定,均无误判,菌种鉴定结果可靠。56株霍乱菌株的聚类分析发现,MALDI-TOF-MS分型与血清型抗原分类之间无相关性,不同血清型间的质谱数据差异不明显,不能用于区分血清型别。结论本研究建立的霍乱弧菌谱库对霍乱弧菌的鉴定准确性高,适用于实际检测。本研究结果填补了谱库中缺失的霍乱弧菌谱库,建立了霍乱弧菌的MAIDI-TOF MS检测鉴定平台,同时也为其他细菌建立或补充完善谱库提供了很好的方法借鉴。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在空气细菌鉴定中的应用

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)对空气中细菌进行鉴定。方法按质谱操作手册对公共场所空气中细菌进行鉴定,并与MYLA指纹数据库中的图谱进行验证和比较。结果此技术对空气细菌的鉴定率达77.1%(27/35),100.0%可鉴定到种水平。鉴定出的凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)达6种。结论MALDI-TOF MS质谱技术高效、准确且操作简便,可实现对空气中细菌的鉴定。

基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法快速测定米饭和乳制品中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素Cereulide

建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)法分析蜡样芽孢杆菌呕吐毒素Cereulide的快速检测方法。分析了Cereulide标准物质的裂解规律,考察基质种类、点靶方式、基质溶剂和用量、激光强度等对Cereulide的质谱信号强度的影响,并进行方法学验证和实际样品检测。结果表明,选择以α-氰基-4-羟基肉桂酸为基质,均匀分散在50%乙腈-水(含0.1%三氟乙酸)中,采用先点基质再点样品的点样方式,反射线性正离子模式下选择激光强度70%进行食品中MALDI-TOF MS筛查时,可检测到Cereulide的[M+Na]^(+)和[M+K]^(+)目标离子峰,此质谱信号稳定、强度高、响应重复性好。方法学验证结果表明,Cereulide的[M+Na]^(+)和[M+K]^(+)目标离子峰在5~100 ng/mL范围内线性好,相关系数(r)>0.99;方法的检出限分别为3.0 ng/g和5.0 ng/g;对米饭和牛乳样品的加标回收率为73.3%~118.2%,相对标准偏差为0.3%~10.9%(n=6)。本方法分析速度快、准确性高、灵敏度好、抗干扰能力强、无需内标即可实现对米饭和乳制品中Cereulide的批量筛查和检测。

半夏炮制过程中毒性凝集素蛋白的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)受灵敏度和重复性的影响,对完整蛋白的定量分析存在困难。本研究采用纤维素纳米晶体(CNC)辅助MALDI-TOF MS,结合内标法定量分析半夏炮制过程中半夏凝集素(PTL),通过优化CNC辅助样本制备的时长和比例,以麦胚凝集素(TVL)为内标,直接分析不同炮制程度半夏各炮制品及其浸泡上清液中PTL含量。结果表明,CNC辅助MALDI样本制备有效提升了MALDI-TOF MS定量分析的线性和重复性。随着炮制时间的延长,姜半夏、清半夏和法半夏炮制品的PTL含量逐渐下降,浸泡上清液中PTL含量逐渐上升。其中,由于pH值的改变,法半夏炮制品浸泡上清液中PTL含量呈先上升后下降的趋势。此外,将该方法应用于不同饮片生产企业的多批次半夏炮制品饮片中,均未检出PTL。该方法操作简便,可有效分析半夏炮制过程中PTL含量的变化,为研究半夏炮制过程对PTL的影响提供了参考。

激光溅射电离飞行时间质谱快速定量分析钛合金中的氢

本研究使用自行搭建的激光溅射电离飞行时间质谱(LAI-TOF MS)对钛合金标准样品进行检测,建立了钛合金中氢的直接定量分析方法,得到氢元素标准曲线的线性关系良好,线性相关系数0.9913,检出限低至0.0004%,计算得到氢元素的原子化和离子化效率约为13.4%。将该方法应用于其他钛合金样品中氢元素的分析,氢测定值相对标准偏差(RSDs)均小于14%;将该测定结果与惰性气体熔融-红外法测定值进行对比,相对误差均在5%以内。同时,通过分析LAI-TOF MS谱图,可实现钛合金样品中Be、C、Al、Si、P、Ca、Cr、Fe、Zr、Mo、Pd、In、Sn等微量元素的定性和半定量检测。结果表明,基于LAI-TOF MS建立的钛合金中氢定量检测方法几乎无需样品前处理、操作简便、分析时间短、灵敏度高,可用于钛合金中氢元素的快速直接定量检测。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪微生物鉴定准确度快速评价参考品的研制

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF MS)技术,简称飞行质谱技术,可在短时间内完成对微生物种属水平的鉴定[1]。基本原理是使用已知菌种的蛋白质图谱建立数据库,利用不同菌种核糖体蛋白(2~20 kD)大小的差异,将未知样本的检测图谱与数据库中的微生物参考图谱进行比对,鉴定结果[2-3]。与传统的微生物表型和生理生化检测方法相比,质谱鉴定的分子量范围大、扫描速度快、操作通量高,且对样品纯度要求不高[4]。除了可鉴定常见细菌和真菌,对临床厌氧菌、苛养菌、丝状真菌以及分枝杆菌等疑难微生物和相对复杂样品的鉴定能力也更强,同时对耐药微生物的鉴定准确性相对较好[5]。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在食源性致病菌鉴定中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)作为近年来发展的新型食源性致病菌鉴定技术,具有灵敏、准确、检测速度快等优点,该技术为食品病原微生物靶标性监测和食品安全事件应急检验提供了一种高效的鉴别技术参考,在保障民众生命健康和经济社会发展上发挥了重要作用。本文检索了近年来国内外MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测中的相关研究案例,简要综述了MALDI-TOF MS检测原理、工作流程,影响鉴定结果的主要因素,介绍了MALDI-TOF MS技术应用于食源性致病菌检测中的实际案例,在此基础上分别从参考菌株数据库建设、标准化程序规范等方面对MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测领域的未来研究方向进行展望,以期为后续食品安全检测及快速监管食源性致病菌污染提供技术支持。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在快速鉴定真菌中的临床应用研究

目的总结基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)应用于临床真菌鉴定的特点,为评估其在真菌快速鉴定方面的重要性及临床应用价值。方法采用VITEK MS鉴定仪对2013年1月-2014年9月临床检出真菌进行鉴定,获取真菌全细胞蛋白(主要是核糖体蛋白)质谱,通过与数据库中已知菌质谱进行比较、分析,获得鉴定结果并对数据进行统计分析。结果共鉴定出真菌1 254株,质谱技术鉴定真菌共1 198株,占95.53%,未鉴定出真菌占4.47%;应用质谱技术鉴定的真菌中以假丝酵母菌属为主,共1 125株占93.91%。结论 MALDI-TOF MS技术鉴定真菌种类多,操作流程简单、快速,而且还具有很好的可重复性和准确性,是传统真菌鉴定方法的有力补充,为真菌鉴定提供了新的选择。

表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术的质量控制与标准化

表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDITOFMS)技术是近年兴起的蛋白质组学研究前沿技术,其标准化和质量控制是其顺利应用到临床的关键。我们对SELDITOFMS检测样本采集与制备、试剂的选择与保存、实验仪器的校准与维护;实验结果重复性验证与分析;数据处理与分析的标准化方法的选择、SELDITOFMS技术系统标准化进行探讨和评价。

基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法测定α/β-二羰基类化合物与标准瓜氨酸化肽段之间的衍生化反应活性

蛋白质瓜氨酸化是一种由生物酶调控的不可逆翻译后修饰,其与免疫相关疾病、癌症、神经系统性疾病和老年痴呆症等重大疾病的发生和发展密切相关。蛋白质的瓜氨酸化修饰丰度低、缺乏亲和标签、m/z变化小且易受同位素及脱酰胺化作用干扰,因此对蛋白质的瓜氨酸化修饰进行质谱分析面临着巨大挑战。通过对瓜氨酸侧链脲基进行化学衍生反应,可以提高瓜氨酸化肽段的m/z差值,引入亲和富集标签,可有效提高瓜氨酸化分析的灵敏度和精准度。本研究以标准瓜氨酸化肽段为研究对象,以基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)为检测手段,对一系列二羰基类化合物与瓜氨酸化肽段之间的化学反应活性进行测定。在对α-二羰基类化合物的考察中发现,苯乙二醛、丙酮醛、1,2-环己二酮和1,10-邻二氮杂菲-5,6-二酮对瓜氨酸化肽段的衍生化效率很高,并且能够生成单一的衍生化产物;2,3-丁二酮、乙二醛与瓜氨酸化肽段之间的反应效率也很高,但会生成一系列副反应产物。在对β-二羰基类化合物的考察中发现,1,3-环己二酮、2,4-戊二酮在与瓜氨酸化肽段进行反应后,均可以产生单一的衍生化产物,但反应效率很低,不适用于瓜氨酸化肽段的化学衍生反应。实验结果表明,α-二羰基结构是实现高效、特异性瓜氨酸化肽段化学衍生反应的基础,α-二羰基类化合物中不同的侧链结构又决定了衍生化产物的结构、衍生化效率及副产物的生成。通过进一步合成含有亲和标签的α-二羰基类化合物,可以实现瓜氨酸化肽段的特异性富集和精准鉴定,有助于瓜氨酸化蛋白质及其位点鉴定的新方法开发。