猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

血清β_(2)微球蛋白和免疫球蛋白G及C肽联合检测对2型糖尿病的诊断价值

目的探讨血清β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、免疫球蛋白G(IgG)、C肽(C-P)联合检测对2型糖尿病的诊断价值。方法选取2022年4月至2023年4月医院收治的61例2型糖尿病患者作为试验组;另选取医院同期的61名健康体检者作为对照组。检测并比较两组血清β_(2)-MG、IgG、C-P水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清β_(2)-MG、IgG、C-P单独及联合检测对2型糖尿病的诊断价值。结果试验组血清β_(2)-MG、IgG、C-P水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC分析结果显示,血清β_(2)-MG、IgG、C-P单独及联合检测诊断2型糖尿病的曲线下面积(AUC)均>0.70,有一定的诊断价值,且联合检测诊断价值最高。结论血清β_(2)-MG、IgG、C-P联合检测对2型糖尿病的诊断价值高于各项指标单独检测。

类风湿关节炎诊断与预后判断中血清免疫球蛋白G型类风湿因子检验的临床价值

评估血清免疫球蛋白G型类风湿因子检测在识别和预测类风湿关节炎病情中的实用意义。方法 选取2022年1月至2024年1月期间在我院接受治疗的类风湿关节炎患者作为研究组(n=60),同期选择进行健康检查的个体作为对照组(n=40)。我们分析了患者的血清免疫球蛋白G型类风湿因子阳性率,并对比了患者群体与健康体检者的血清免疫球蛋白G型类风湿因子水平,以及血清免疫球蛋白G型类风湿因子阳性和阴性的患者关节受累程度。结果 60名类风湿关节炎患者中有25名呈现血清免疫球蛋白G型类风湿因子阳性,35名为阴性,阳性率占41.67%(25/60)。阳性组和阴性组的血清免疫球蛋白G型类风湿因子水平均高于对照组,差异显著(P<0.05),阳性组水平较阴性组更高,差异有统计学意义(P<0.05);阳性组骨侵蚀及关节畸形发生率较阴性组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RA病人的血清中存在着大量的RAG基因,通过其检测可以很好地反映RA的病情和关节病变,是一种非常有意义的检测方法。

血清抑制性G蛋白α亚基-2在2型糖尿病合并不同分级高血压患者中的变化及意义

目的探讨血清抑制性G蛋白α亚基-2(Giα-2)水平在2型糖尿病合并不同分级高血压患者中的改变及临床意义。方法选取197例2型糖尿病患者作为研究对象,分为单纯2型糖尿病(DS)组45例,2型糖尿病合并高血压1级(DH1)组47例,2型糖尿病合并高血压2级(DH2)组51例,2型糖尿病合并高血压3级(DH3)组54例,另选取40例健康人作为健康对照(NS)组。应用酶联免疫吸附法测定血清Giα-2水平。多元线性回归法分析Giα-2水平与各影响因素的相关性。结果 DS组Giα-2水平较NS组降低,DH1、DH2、DH3组Giα-2水平均高于DS组,随着血压增加,Giα-2水平逐渐增加,其中DH3组最高(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示Giα-2水平与收缩压呈正相关(r=0.54,P<0.05),进一步多元回归分析提示收缩压是Giα-2水平的独立影响因素。结论 Giα-2可能对2型糖尿病合并高血压的发生有一定的影响。

O型血孕产妇产前血清免疫球蛋白G抗体效价与新生儿溶血病的关系研究

目的 探讨O型血孕产妇产前血清免疫球蛋白G(IgG)抗体效价分布情况及其与新生儿溶血病(HDN)的相关性,以期为临床预防与治疗HDN提供参考。方法 回顾性分析2018年3月至2022年3月于常州市第七人民医院进行产检并正常分娩的302例适龄O型血孕产妇的临床资料,所有孕产妇均进行血清IgG抗A(B)抗体效价检测,比较夫妻血型及产前血清IgG抗A(B)抗体效价的水平变化情况;统计HDN发生情况,分析HDN发生与孕产妇产前血清IgG抗A(B)抗体效价的相关性。结果 302例不同血型孕产妇中,夫妻血型为O-A、O-B、O-AB的孕产妇中,血清IgG抗A(B)效价<1∶64占比显著高于1∶128、1∶256及>1∶256,且夫妻血型为O-AB的孕产妇血清IgG抗A(B)效价<1∶64的占比显著高于1∶64的占比;夫妻血型为O-AB的孕产妇血清IgG抗A(B)效价<1∶64的占比显著高于O-A血型,夫妻血型为O-B的孕产妇血清IgG抗A(B)效价>1∶256的占比显著低于O-A血型;随着妊娠次数增多,血清IgG抗A(B)效价<1∶64的孕产妇占比逐渐降低,1∶128和>1∶256的孕产妇占比逐渐升高,且妊娠≥2次孕产妇血清IgG抗A(B)效价<1∶64的占比显著低于妊娠1次,妊娠≥2次与妊娠2次孕产妇血清IgG抗A(B)效价1∶128的占比显著高于妊娠1次,妊娠>2次孕产妇血清IgG抗A(B)效价>1∶256的占比显著高于妊娠1次、妊娠2次;302例孕产妇中发生HDN有41例(13.58%),且随血清IgG抗A(B)效价的升高,HDN发生率逐渐升高;经Pearson相关系数分析显示,O型孕产妇IgG抗A(B)效价与HDN发生率呈正相关(r=0.428,均P<0.05)。结论 O型血孕产妇产前血清IgG抗A(B)效价与新生儿溶血发生率呈正相关,随着O型血孕产妇血清IgG抗体效价升高,HDN发生概率增加,通过对O型血孕产妇血清IgG抗A(B)效价指标变化进行监测,有助于预测HDN的发病情况,对临床上的诊断及后续治疗有一定指导意义。

尿白蛋白和免疫球蛋白G以及β2微球蛋白检验对老年糖尿病的诊断价值

目的探讨在老年糖尿病患者中开展尿白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)、β2微球蛋白检验的应用价值。方法选择济南市中西医结合医院2023年1月—2024年1月收治的120例老年2型糖尿病患者作为研究对象,根据患者是否合并糖尿病肾病分为糖尿病肾病组(31例)和单纯糖尿病组(89例);另外选择该院同期100例健康体检者纳入健康对照组。采集各组受检者的尿液和血液标本进行生化检验,采用尿液分析仪检测尿白蛋白、尿IgG,采用β2微球蛋白检测试剂盒测定血清β2微球蛋白。比较各组受检者上述指标水平差异。采用Spearman相关性分析法,分析尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白与糖尿病肾病发生的相关性;比较尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白单独与联合检测对糖尿病肾病的诊断结果。结果糖尿病肾病组的尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白水平均显著高于单纯糖尿病组和健康对照组〔尿白蛋白(mg/L):41.57±9.20比29.03±5.62、18.74±2.95;尿IgG(mg/L):174.57±25.60比146.43±20.17、103.05±14.29;血清β2微球蛋白(mg/L):3.78±0.96比2.09±0.54、1.40±0.36;均P<0.05〕,且单纯糖尿病组的尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白水平均显著高于健康对照组(均P<0.05)。尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白与糖尿病肾病的发生均呈正相关(r值分别为0.854、0.832、0.879,P值分别为0.003、0.004、0.002)。尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白联合检测诊断糖尿病肾病的敏感度和阴性预测值分别为96.77%、98.82%,均显著高于各项指标单一检测,而联合检测的特异度、准确度、阳性预测值分别为94.38%、95.00%、85.71%,与单一检测比较差异均无统计学意义。结论尿白蛋白、尿IgG、血清β2微球蛋白水平在老年2型糖尿病患者中普遍升高,尤其是在糖尿病肾病患者中升高更明显,各指标联合检测对糖尿病肾病具有较高的诊断价值。

组织蛋白酶G在1型糖尿病免疫发病机制中作用的研究进展

组织蛋白酶G(CatG)作为广泛存在于溶酶体中的蛋白质水解酶,在中性粒细胞活化后释放,具有加工多种细胞受体、诱导多种细胞浸润参与炎症反应、活化或灭活多种细胞因子和趋化因子等作用。1型糖尿病(T1DM)是多基因及环境因素共同影响下由T淋巴细胞介导的促炎性自身免疫性疾病,免疫炎症细胞在T1DM发病机制中发挥着至关重要的作用。CatG通过水解活化细胞因子诱导胰岛β细胞凋亡,从而调控T1DM的发生发展,并通过加工胰岛素原影响其抗原呈递过程,从而对T1DM产生影响,为探寻TIDM的发病机制提供了新方向。

血清人巨细胞病毒免疫球蛋白G与原发性闭角型青光眼的相关性研究

目的 探讨血清人巨细胞病毒(HCMV)免疫球蛋白G(IgG)水平与原发性闭角型青光眼(PACG)的相关性。方法 采用回顾性病例对照研究。收集2019年6月—2020年6月于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院确诊为PACG的患者66例作为病例组,同时收集与病例组年龄、性别匹配的正常体检者88例作为对照组。根据视野平均缺损(MD)大小,将PACG患者分为轻度组(MD≤6 dB)、中度组(612 dB)。采用全自动电化学发光法免疫分析仪对血清HCMV IgG抗体含量进行检测分析。结果 PACG组HCMV IgG水平(M=508.00,四分位数:313.40,780.75)显著高于对照组(M=318.80,四分位数:164.33,498.40),差异有统计学意义(P<0.001)。Spearman相关分析显示,PACG组HCMV IgG水平与眼压(r=0.28,P=0.025 3)呈正相关,与平均光敏感度(r=-0.25, P=0.049 3)及MD(r=-0.24, P=0.034 2)呈负相关。轻度PACG组HCMV IgG水平显著低于中度和重度PACG组(P值均<0.05)。Logistic回归分析发现,HCMV IgG水平升高是PACG发病的独立危险因素(P<0.001, OR=1.003, 95%CI为1.002~1.005)。结论 PACG患者血清HCMV IgG水平显著升高,并与眼压及MD呈正相关,提示HCMV IgG水平与PACG疾病进展相关。

G蛋白抑制性多肽-27药动学测定方法的建立

目的建立测定小鼠血浆中G蛋白抑制性多肽-27(GCIP-27)浓度的放射性核素(125I)示踪测定法。方法125I-GCIP采用Iodogen法标记,血浆中GCIP的浓度采用同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法或低相对分子质量SDS-PAGE电泳法测定,并比较其测定结果。结果TCA沉淀法和电泳法同时对照测定60份GCIP血浆样品,结果呈良好的相关性,r=0.9554。2种方法最低检测浓度均为2.0μg.L-1,日内、日间RSD均小于10%,血浆在3.75～480μg.L-1内均呈良好的相关性,相关系数分别为r=0.9977和0.9964,血浆中GCIP的平均回收率分别为(92.72±4.55)%和(91.77±5.21)%。结论同位素示踪法与沉淀法或电泳法结合,方法稳定、可靠、灵敏度较高,两法相辅相成,适于GCIP-27血药浓度测定。

三七皂苷对烫伤大鼠心肺组织抑制性G蛋白α-mRNA表达的抑制作用

目的:研究三七皂苷对严重体表烫伤大鼠心肺组织抑制性G蛋白(Gi)α-mRNA表达的影响。方法:采用大鼠30％体表面积Ⅲ度烫伤模型,烫伤前20 min给以不同剂量的三七皂苷,观察其对烫伤后3 h心肺组织Gi2α-,Gi3α-mRNA表达的影响;以半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定mRNA相对含量。结果:大鼠烫伤后3 h,Gi2α-mRNA含量在心肌增加178.0％(P<0.05),在肺组织增加263.0％(P<0.01);Gi3α-mRNA含量在心肌中增加236.0％(P<0.01),在肺组织中增加222.0％(P<0.05)。三七皂苷200 mg·kg^(-1)使烫伤3 h大鼠心肌Gi2α-mRNA含量减少46.0％(P<0.01);三七皂苷50,100,200 mg·kg^(-1)使烫伤3 h大鼠肺组织Gi2α-mRNA含量分别减少35.8％,44.4％和60.6％(P<0.05或P<0.01),使烫伤3 h大鼠心肌Gi3α-mRNA含量分别减少33.9％,30.1％和42.9％(P<0.05或P<0.01),使肺组织Gi3α-mRNA含量分别减少34.5％,54.7％和55.6％(P<0.05或P<0.01)。结论:三七皂苷对严重体表烫伤大鼠心肺 组织Gi2α-,Gi3α-mRNA表达增加具有抑制作用。

IL-6、PCT、IgG儿童激素敏感型PNS细菌感染性肺炎易感性及复发的评估价值

目的探讨白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)、免疫球蛋白G(IgG)对儿童激素敏感型原发性肾病综合征(PNS)细菌感染性肺炎易感性及复发的评估价值。方法选取2019年1月至2023年3月该院收治的150例儿童激素敏感型PNS患儿作为研究对象。根据随访3个月内是否并发细菌感染性肺炎分为并发组、未并发组,比较两组基线IL-6、PCT、IgG水平,采用Logistic回归分析影响细菌感染性肺炎易感性的因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析IL-6、PCT、IgG评估PNS细菌感染性肺炎易感性的价值及PNS复发风险。结果并发组IL-6[(7.84±2.49)pg/mL]、PCT[(0.39±0.11)ng/mL]高于未并发组[(4.75±1.56)pg/mL、(0.29±0.09)ng/mL],IgG[(3.82±1.25)g/L]低于未并发组[(5.92±1.97)g/L],差异均有统计学意义(P<0.05);细菌感染性肺炎易感性的Logistic回归方程显示,随着IL-6、PCT升高及IgG降低,细菌感染性肺炎易感性逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);IL-6、PCT、IgG评估PNS细菌感染性肺炎易感性的AUC依次为0.792、0.744、0.677,IL-6、PCT联合IgG评估PNS细菌感染性肺炎易感性的AUC为0.929,大于IL-6、PCT、IgG单独评估(P<0.05);IL-6高水平患者PNS复发的风险是低水平的7.054倍,PCT高水平患者PNS复发的风险是低水平的6.750倍,IgG高水平患者PNS复发的风险是低水平的0.079倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-6、PCT、IgG是儿童激素敏感型PNS细菌感染性肺炎的影响因素,三者与PNS复发有关,临床可根据IL-6、PCT、IgG水平评估患儿并发细菌性肺炎易感性及病情复发风险,从而为预防性临床干预提供指导。

炎症信号通路对肺肿瘤抑制基因G蛋白偶联受体C型家族5A表达的抑制作用

目的·探究炎症信号通路对G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein-coupled receptor class C group 5 member A,GPRC5A)表达的调控作用。方法·给予核因子κB(NF-κB)启动子驱动荧光酶转基因小鼠腹腔注射细菌内毒素脂多糖(LPS),诱导肺组织炎症,活体动物可见光成像系统下观察小鼠肺部NF-κB信号通路激活情况。在C57BL/6J小鼠,腹腔注射LPS,Western blotting检测肺组织GPRC5A表达情况。体外实验中,对人肺癌细胞Calu-1、H322,人胚胎肾细胞HEK293T给予肿瘤坏死因子α(TNF-α)或转染p65表达质粒,而后用Western blotting、RT-PCR、荧光素酶报告基因实验、免疫荧光等方法检测分析炎症对GPRC5A表达的影响。结果·小鼠腹腔注射LPS可以诱导NF-κB炎症信号通路激活,并抑制肺组织中GPRC5A的表达。炎症因子TNF-α可明显抑制Calu-1细胞GPRC5A的蛋白和mRNA表达。在HEK293T细胞,转染p65表达质粒后,可以抑制GPRC5A启动子驱动的荧光素酶报告质粒的表达。被转染并表达绿色荧光蛋白-p65的H322细胞中几乎没有GPRC5A的表达。结论·NF-κB信号通路可以抑制GPRC5A启动子的转录活性,抑制其mRNA和蛋白的表达。

G蛋白偶联受体119激动剂在2型糖尿病治疗中的应用

在世界范围内,糖尿病已经逐渐成为威胁人类健康与生命的慢性代谢性疾病,其中2型糖尿病占90％.2型糖尿病主要病理表现为胰岛素抵抗和由胰岛功能细胞功能失调所致的胰岛素分泌相对不足[1],形成持续高血糖,并可产生多种严重并发症[2].目前,临床使用的抗糖尿病药物均具有不同程度的不良反应,作用于新靶点、且对胰岛β细胞具有保护作用的新型抗糖尿病药物可避免传统抗糖尿病药物的不良反应,其中G蛋白偶联受体119（GPR119）为抗糖尿病治疗的新靶点,为临床糖尿病治疗提供了新方向,现综述如下.

表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。

应用m_5AChR-G_(11α)融合蛋白鉴别M_5受体亚型的特异性药物

目的采用Sf9细胞系统表达m5AChRG11α融合蛋白,通过检测GDP与m5AChRG11α融合蛋白的亲和力大小来鉴别m5AChR的特异性激动剂和拮抗剂。方法用两步PCR反应重组m5AChRG11α融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达m5AChR受体蛋白和m5AChRG11α融合蛋白,通过[3H]QNB结合饱和实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP与m5AChRG11α融合蛋白的亲和力。结果m5AChRG11α融合蛋白表达水平是(47.6±3.2)nmol·g-1膜蛋白。不同配体的存在使融合蛋白中G11α与GDP的亲和力发生变化。ACh、YM796、Oxotremorine、Methixene、Dextimide及atropine存在以及无配体存在时,GDP的IC50值分别是128.0,72.1,68.5,16.2,14.9,9.7和20.8μmol·L-1。结论Sf9细胞系统表达的m5AChRG11α融合蛋白具备M受体配体结合的特性和组分间偶联功能。m5AChRG11α融合蛋白对GDP的亲和性决定于M受体配体的性质。对于m5AChRG11α融合蛋白,ACh是m5AChR完全激动剂,YM796和Oxotremorine是部分激动剂;atropine,Methixene和Dextimide是拮抗剂。

免疫球蛋白G在游离型腰椎髓核再吸收过程中的分布及其再吸收的机制

目的探讨游离髓核组织再吸收或缩小的可能机制,为临床保守治疗某些类型腰椎间盘突出症提供新的思路和依据。方法25只健康成年狗,制作成游离型腰椎间盘突出模型。于术后第2,4,6,8,12周,各处死一组动物,切取、观察移植的髓核组织,用免疫组化方法对髓核组织中IgG沉积分布的特点进行了检测;另取同一动物的正常髓核组织作组织学对照。结果(1)肉眼可见术后不同时期移植的髓核组织出现不同程度的皱缩、变小乃至消失。(2)所有标本髓核组织中可见呈片状、带状或丝状分布的IgG沉积,且随时间推移沉积程度呈现增高趋势。(3)正常髓核组织中可见有微量IgG沉积。结论游离型腰椎间盘突出中的髓核组织,通过引发免疫应答,从而导致IgG的沉积,产生自体免疫反应,因此导致了突出髓核组织再吸收的自然过程。

猪血G型免疫球蛋白稳定性研究

研究了酸性环境和加热对猪血IgG活性的影响。结果显示：猪IgG热变性的温度范围为70．265—72．162℃，吸热量为338．4J／g。室温时，pH降低到4以下IgG开始变性，其活性损失随pH的下降而增加。pH为7时．60℃后IgG开始变性，随温度升高活性损失越来越大。酸性条件下免疫球蛋白对于温度更为敏感，较低的温度就会造成IgG的变性。

G蛋白偶联受体激酶4对内皮素B型受体的异常调节在原发性高血压发生中的作用

目的探讨G蛋白偶联受体激酶4（G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4）对内皮素B型受体（endothelin receptor B,ETB）的异常调节在原发性高血压中的作用及机制。方法选用12～14周龄,体质量300 g左右的雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHRs）及其对照鼠（Wistar-Kyoto,WKY）各10只,通过无创鼠尾测压仪测定血压,采用右肾上腺静脉插管灌注ETB受体特异性激动剂BQ3020后观察尿流速及尿钠排泄率,荧光定量PCR检测大鼠肾脏GRK4 mRNA水平,Western blot测定大鼠肾脏GRK4及ETB受体的蛋白表达差异,免疫共沉淀法检测ETB受体磷酸化情况,在动物水平观察高血压状态下ETB受体的功能情况。结果 ETB受体激动剂BQ3020对WKY大鼠有明显利尿排钠作用,且这种利尿排钠作用可以被ETB受体抑制剂BQ788阻断,但在SHR大鼠BQ3020的利尿排钠作用受损[尿流速：（11.23±2.16）vs（3.49±1.32）,P〈0.05];尿钠排泄率：[（1 551.43±393.47）vs（601.16±128.15）,P〈0.05];在SHR大鼠肾皮质GRK4的蛋白水平及mRNA水平均较WKY大鼠高[蛋白：（1.38±0.10）vs（0.85±0.07）,P〈0.05];mRNA：[（2.23±0.15）vs（0.78±0.16）,P〈0.05],SHR大鼠ETB受体总蛋白水平与WKY大鼠相比差异无统计学意义（P〉0.05）,但ETB受体磷酸化水平增高。结论 GRK4可能通过对内皮素B型受体的异常调节,参与了原发性高血压发生与发病。

Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G基因片段的克隆表达及初步鉴定

通过计算机分析Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G的氨基酸序列 ,筛选出HSV1 gG蛋白中优势抗原决定簇位点 ,用PCR技术扩增克隆含强抗原决定簇较集中的基因片段。将该段基因克隆至质粒表达载体pGEX 4T 2内 ,转化大肠杆菌TG1 ,构建成功了高效表达Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G基因的工程菌。用纯化的表达蛋白HSV1 gG GST作抗原ELISA分析证实有较好的抗原性和特异性 。