凝血酶原复合物中影响激活凝血因子测定因素的探讨

含肝素的凝血酶原复合物 (PCC)用适量的硫酸鱼精蛋白中和后 ,作 1∶1 0和 1∶1 0 0稀释测定激活凝血因子。肝素影响激活凝血因子测定 ,不同活性单位的PCC对某些厂家生产的PCC激活凝血因子测定无影响 ,但对有的厂家生产的PCC激活凝血因子测定有影响。对国内 5家血制品生产单位生产的 1 5批PCC进行激活凝血因子测定 ,凝血酶活性通过者激活凝血因子也能通过。

生色底物连续速率法测定圆斑蝰蛇凝血因子X激活剂的活性

目的：采用生色底物连续速率法测定凝血因子X激活剂的酶学活性。方法：将凝血因子X激活剂与凝血因子X及生色底物同时加入反应体系,以1 min为间隔时间,连续监测凝血因子Xa的生色底物Suc-Ile-Gly（γP ip）G ly-Arg-pNA在405 nm波长下的吸收值变化。通过吸收值对时间平方作图所得直线的斜率,对凝血因子X激活剂的浓度进行线性回归从而测得供试品的活性。结果：该方法的线性范围为0.45-1.20 u·mL^-1,凝血因子X激活剂制剂与溶液的板间精密度（n=4）分别为6.2%及6.8%,板内精密度（n=3）分别为1.5%和1.8%。结论：本方法进行凝血因子X激活剂的活性测定,快速、准确、重现性良好。

圆斑蝰蛇泰国亚种(Vipera russe lli siamensis)蛇毒凝血因子激活剂的纯化及部分特性研究

目的 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血 因子 (F )激活剂并研究其部分特性。 方法 采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化 ,以血液凝固时间及发色底物 (S- 2 2 2 2 )进行活性鉴定和温度、p H值、蛋白酶抑制剂对活性的影响 ,SDS- PAGE进行分子量、等电点及纯度测定 ,苯酚 -硫酸法及间苯二酚 -盐酸法测定糖含量。 结果 所得促凝组分 1 能特异性地活化牛 F ,从而水解 S- 2 2 2 2酰胺键。SDS- PAGE呈现单一蛋白带 ,分子量为 6 1.1± 1.5 k D(还原 ) ,6 0 .4± 1.9k D(非还原 )。等电点为 p H=8.0 0± 0 .0 6。含中性己糖 12 .4 %±0 .5 % ,唾液酸 0 .12 %± 0 .0 2 %。在 5 0℃以下稳定 ,最适 p H为 7.0～ 8.2。可被金属蛋白酶抑制剂 EDTA- Na2 完全抑制 ,二硫苏糖醇 (DTT)及 L -半胱氨酸部分抑制 ,不受胰蛋白酶抑制剂抑肽酶抑制。 结论 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒分离纯化的 F 激活剂是一种碱性糖蛋白 ,属于 Ca2 + 依赖性的金属蛋白酶。

蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子Ⅹ激活物FⅤe-1的分离纯化与理化活性的研究(英文)

【目的】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子Ⅹ激活物FⅤe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性。【方法】应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,Edman降解法测定蛋白N末端氨基酸序列,发色底物法和SDS-PAGE等方法测定FⅤe-1的酶学特征和凝血活性。【结果】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的FⅤe-1为单体蛋白,相对分子质量为13 808,等电点4.6,0.5 mg FⅤe-1的凝血活性与1.5625 u的凝血酶或与54.93 ng RVVⅩ的凝血活性相当;可激活FⅩ,但对凝血酶和纤维蛋白原无作用;酶活性的适宜pH为6.5～7.5,适宜温度为25～60℃;为钙依赖性,凝血活性可被EDTA和DTT抑制;FⅤe-1的N端序列为NH2-N-L-Y-Q-F-G-E-M-I-N;具有呈剂量依赖性的促血浆凝固作用。【结论】从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出一种FⅤe-1是一个凝血因子Ⅹ的激活物,可激活凝血因子Ⅹ,但对凝血酶和纤维蛋白原的作用微弱。

广西圆斑蝰蛇毒凝血因子X激活物在实验鼠体内的促凝血作用研究

目的研究国产圆斑蝰蛇(Vipera russellii)毒中凝血因子X激活物(RVV-X)在实验动物体内的促凝血作用。方法对从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化出的具有止血作用的RVV-X单一有效成分进行了实验鼠促凝血作用的研究。主要测定的指标包括出血时间(BT)、全血凝固时间(CT)、血浆复钙时间(RT)、激活部分凝血激酶时间(APTT)、纤维蛋白原含量(FIB)、优球蛋白溶解时间(ELT)以及血小板数量(PLT)。结果该药物的促凝血作用很强,注射很小的剂量(0.000313u/kg)的RVV-X就可以显著地缩短小鼠出血时间,对大鼠也表现出明显的促凝血作用。结论从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化出的RVV-X在极低的剂量下就可以发挥其凝血、止血作用,安全范围很大。本试验为其将来开发研制成为一种全新的止血药提供了一些基础资料。

广西圆斑蝰蛇毒凝血因子X激活剂的分离纯化及其止血作用的研究

目的从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化凝血因子X激活剂(factor X activator of Russell’sviper venom,RVV-X)并研究其止血作用。方法应用阴离子交换色谱和凝胶过滤从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化RVV-X,以复钙化时间进行活性鉴定,以SDS-PAGE测定纯度和分子量。观察RVV-X对家兔肝脏创伤出血模型出血时间及出血量,家兔和肝素化小鼠凝血时间的影响。结果广西圆斑蝰粗毒经阴离子交换色谱获得六个蛋白峰,将RVV-X所在第V峰用凝胶过滤获得的组分A为RVV-X纯品,其凝血活性具有钙依赖性。SDS-PAGE非还原性条件下呈单一蛋白条带,分子量约为97.8kDa,还原性条件下呈二蛋白条带,为一条重链(约76.3kDa)和一条轻链(约21.5kDa)。RVV-X可显著减少家兔肝脏切口的失血量,缩短切口出血时间;能显著缩短家兔及肝素化小鼠凝血时间。结论用层析方法从广西圆斑蝰蛇毒中分离得到的凝血因子X激活剂具有较强的止血活性。

出凝血4项检测对肝病患者的临床意义

肝脏是多数凝血因子、凝血抑制剂和纤溶系统蛋白生成场所,也是许多已激活凝血因子和纤溶激活物的灭活之地,在凝血、抗凝系统保持动态平衡中起调节作用.肝硬化是指肝病造成的广泛的肝实质细胞的破坏和再生及纤维组织大量增生导致肝小叶实质结构和血管床的异常重建,病毒性肝炎是引起该病的主要原因,上消化道出血是肝硬化最常见的并发症.

大剂量静注蛇毒血凝酶注射液致深静脉血栓1例

目的提示临床重视大剂量静注蛇毒血凝酶注射液致深静脉血栓。方法回顾性分析1例结肠息肉术后大剂量静注蛇毒血凝酶注射液致深静脉血栓的病例,记录其年龄、性别、诊断、既往史、给药方法、静脉血栓形成不良反应的过程、形式及处理措施,并分析发生因素。结果患者术后静脉注射蛇毒血凝酶注射液1U预防术后出血,8h给药1次,用药3d。患者静脉血管由发青、发硬、疼痛等症状发展至血管变细、对热不敏感等,最终导致上、下肢深静脉血栓形成。结论血栓性病史患者术后大剂量静注蛇毒血凝酶注射液可致深静脉血栓,临床应用时应严格把握适应证并注意给药途径和剂量。

甲状腺乳头状癌合并D-二聚体升高1例

D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物。D-二聚体升高见于继发性纤维蛋白溶解功能亢进，提示机体处于高凝状态。在肿瘤因子的作用下，肿瘤细胞内物质激活凝血因子，从而引起继发性纤溶亢进，血浆D-二聚体水平升高。有资料显示，在常见的肿瘤中如肺癌、肝癌、大肠癌、卵巢癌均可发现D-二聚体异常升高，而在甲状腺癌患者上发现其持续升高的病例则鲜有报道。笔者特此讨论单侧甲状腺乳头状癌合并D-二聚体升高1例。

RNA能触发凝血的发现可能创造重大商机

德国Justus-Liebig大学Preissner等发现，受损细胞或微生物释放的RNA能通过激活凝血因子而启动凝血级联反应。此发现能产生新的抗血栓形成药物以及治疗脓毒病、癌症和心血管疾病的新方法。