抗坏血酸对酵母蔗糖酶的激活动力学研究

采用甲苯自溶法从鲜酵母中提取了蔗糖酶，并用乙醇分级及ＤＥＡＥ－纤维素柱层析进行了纯化，用ＰＡＧ凝胶电泳作了纯度鉴定，在ｐＨ５．０，３０℃条件下进行了酶反应，用双倒数作图法测出其Ｋｍ＝２．１×１０－２ｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ＝０．２６（每分钟的光密度值）．在此系统中，加入不同浓度的抗坏血酸（Ｖｉｔ．Ｃ），发现其具有激活作用并存在量效关系．双倒数作图显示：酶的表观Ｖｍａｘ（Ｖｐ）随抗坏血酸浓度的增加而增大，但其表观Ｋｍ（Ｋｐ）不变（Ｋｐ＝Ｋｍ）．经实验结果分析，推论出抗坏血酸激活作用的酶促反应方程式。

看见精彩 激活动力--幼儿园教师培养策略初探

教师是幼儿园整个教育链条上的重要一环,是助推幼儿园发展的重要动力。每位教师都要发展,但不是一样的发展;每位教师都要合格,但不是相同的规格。我们坚持“以人为本”的管理理念,努力寻求教师个性化发展与团队建设的新路子,从年龄、学历、教学经验、教学技能水平等方面对教师建档立案,制定相应的培养目标与策略。

乡村振兴战略视域下传统村落内生动力的激活——基于记忆空间设计的视角

传统村落作为一个新兴的概念,近年来一直受到学术界的关注。传统村落作为重要的记忆空间,承载着历史、社会、文化等维度的价值,因此,保护传统村落是学界已经达成的共识。他者保护与自我保护是对待传统村落的两种立场,相应地出现了两种传统村落的设计范式:作为文化遗产的修旧如旧,作为生活场所的修旧如新。以"适度设计"为理念,以"在地"设计为方法,以传统村落"活化"为目标,是设计激活传统村落内生动力的可行性路径。

动力蛋白激活蛋白亚单位Dynamitin具有ATP酶活性的生物化学特征(英文)

动力蛋白激活蛋白(dynactin)是一个与胞浆内动力蛋白的功能相关的多亚基复合物.动力蛋白(dynein)为向微管负端运输的马达蛋白,其多种功能包括细胞核迁移、有丝分裂纺锤体定位以及细胞间期和有丝分裂的细胞骨架再组装.Dynamitin,是一个50 kD的动力蛋白激活蛋白亚单位,对于稳定动力蛋白激活蛋白复合物是非常重要的.为研究这种稳定性机制,分析了dynamitin的序列,并揭示dynamitin的一些DNA序列与ATP酶的Walker A和Walker B序列具有同源性.纯化的谷胱甘肽巯基转移酶标签蛋白dynamitin和无此标签的蛋白dynamitin都特异性显示了ATP酶活性.DNA序列Walker A的失活突变可废除dynamitin蛋白的ATP酶活性,而Walker B序列无此作用.因此,突变实验进一步证实dynamitin蛋白的ATP酶活性.ATP酶活性的动力学研究结果表明Km为125·78μmol/L和kcat为7·4 min-1·

激光激活BPD-MA光动力作用对人膀胱癌细胞株BIU-87DNA合成的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用3H -TdR掺入法检测激光光敏化BPD -MA后人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA的合成。结果 :实验前对照组的CPM值为 482 3 .5± 5 4.2 6,激光激活BPD -MA光动力显著抑制人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA的合成 (12 63 .7± 2 0 6.84VS 482 3 .5± 5 4.2 6,P <0 .0 5 )。而单纯光敏剂BPD -MA和假照射处理对人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA合成无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 :激光激活BPD -MA光动力抑制人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA的合成可能是其抑癌作用机制之一。

小鼠动力蛋白激活蛋白1-shRNA慢病毒载体的构建及在足细胞中的敲低效应

目的构建表达小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)特异性shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠足细胞dynactin-1的敲低效果。方法针对小鼠dynactin-1mRNA序列,设计合成3种shRNA,克隆到入门质粒pENTR/pTER中,再利用LR反应重组到pLenti X2Puro慢病毒目的质粒,经过酶切测序鉴定后,将慢病毒质粒和包装质粒共转染293FT细胞,包装得到病毒颗粒。各组shRNA病毒载体转染小鼠足细胞后,用嘌呤霉素抗性筛选细胞,利用蛋白质印迹法检测各组细胞中dynactin-1蛋白的表达水平。结果构建的各组shRNA入门质粒和慢病毒载体经酶切及测序鉴定正确;慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞,制备病毒颗粒,转染小鼠足细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达shRNA的足细胞系;蛋白质印迹检测结果表明转染dynactin-1-shRNA组的dynactin-1蛋白表达降低。结论构建的小鼠dynactin-1-shRNA慢病毒载体能有效降低小鼠足细胞中dynactin-1蛋白表达,为进一步研究dynactin-1在足细胞中的功能奠定了基础。

敲低动力蛋白激活蛋白1基因表达对足细胞分化的影响

目的:观察敲低动力蛋白激活蛋白1(dynactin1)基因表达对足细胞分化的影响。方法:用免疫荧光技术检测dynactin1在条件永生化小鼠足细胞中的表达;用RNA干扰技术抑制dynactin1的表达,用Western blot技术证实转染效率,用MTT法检测转染后细胞的生长速度,用RT-PCR技术检测转染后细胞分化标志蛋白synaptopodin的表达情况。结果:在足细胞分化过程中,细胞形态发生改变,dynactin1主要分布在核周及附近的胞浆区域;转染特异性siRNA后dynactin1蛋白表达下调,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调,细胞分化迟滞。结论:敲低dynactin1基因表达阻滞足细胞分化。

野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1真核表达载体的构建及其在小鼠足细胞中的表达

目的构建野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)真核表达载体,并观察其在小鼠足细胞中表达。方法以总RNA反转录合成的cDNA为模板,通过PCR扩增得到小鼠dynactin-1的全长cDNA,将该片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)-FLAG和pEGFP-N1;利用部位特异性突变插入方法构建突变型表达载体,经酶切和测序鉴定;各载体转染小鼠足细胞MPC5后,用蛋白质印迹分析法和免疫荧光显微镜法检测dynactin-1蛋白表达。结果 PCR扩增得到大小为3.8kb的小鼠dynactin-1片段,连接到载体后,酶切鉴定电泳结果分别显示pcDNA3.1(+)-FLAG(5.4kb)、pEGFP-N1(4.7kb)以及小鼠dynactin-1(3.8kb)片段,测序分析结果显示克隆的野生型和突变型小鼠dynactin-1序列与数据库序列相同;蛋白质印迹分析法检测到重组dynactin-1的蛋白条带;免疫荧光显微镜观察到dynactin-1主要表达在小鼠足细胞的细胞质。结论成功构建了野生型和突变型小鼠dynactin-1真核表达载体,并在足细胞中表达,为进一步开展细胞生物学研究奠定了实验基础。

在巧“借”中激活学生学习动力

数学学科核心素养的培养有助于激发学生的潜能,促进其全面发展,提升其整体素质。由此,在教学活动中,要以满足学生身心发展为目标,以促进学生全面发展、主动发展以及健康发展为核心,在教学中为学生努力营造一个良好的生活及学习环境,提高学生数学核心素养。本文从创设情境、借助提问、结合微课和网络实践四方面入手,优化小学数学教学方式,有效促进学生素养。

在体育教学中如何激活学生学习动力

从“快乐体育”,“终身体育”,“健身体育”的理念出发,结合多年从事体育教育体会到——学生喜欢体育,但不喜欢体育课的原因.从学生学习兴趣、丰富课的内容、开展多样化课的形式等几个方面来指导体育教学,不断提高教学质量.

原代培养猪冠状动脉平滑肌的电压依赖和钙激活钾通道(英文)

目的 :研究原代培养的猪冠状动脉平滑肌电压依赖性和钙激活外向钾通道的特性。方法 :离子通道电流采用膜片钳技术进行记录。结果 :在内面向外式膜片构型 ,当膜内外K+ 浓度梯度类似生理状态时 ,该通道单位电导值约为 10 0pS ,而当膜内外K+ 浓度为对称的 140mM浓度时 ,该通道单位电导值约为 2 70pS。其平均电流显示该通道具时间和电压依赖性激活特性 ,而无任何时间和电压依赖性失活特性。另外 ,通道的开放时间常数和开放概率随除极及胞内Ca2 + 的增加而显著增加。通过用EGTA降低胞浆内Ca2 + 浓度 ,可使外向电流抑制。动力学分析显示通道激活时存在一种开放状态和至少两种关闭状态。四乙胺 (TEA)可在胞外侧阻断该电流 ,但高达 15mM的 4-氨基吡啶 (4-AP)在胞内外都对通道无影响。在全细胞构型 ,对细胞膜进行除极可引出宏观外向电流。随着细胞的除极 ,该电流的激活时间常数逐渐缩短 ,并显示快速激活动力学特性。结论 :在原代培养的猪冠状动脉平滑肌上存在有电压依赖和Ca2 + 激活的K+ 选择性离子通道。该类通道具有非常高的单位电导值 ,除极时快速开放 ,对胞内Ca2 + 高度敏感 。

肿瘤的光动力治疗研究进展

肿瘤光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)是一种对恶性肿瘤细胞选择性杀伤并获得临床批准的非侵入性肿瘤治疗方法。该疗法主要原理是利用特定波长的光激发光敏剂,传递能量给氧气进而产生活性氧,造成肿瘤细胞死亡、微血管损伤以及诱导局部免疫等反应。本文针对目前光动力治疗存在的3个主要瓶颈——光动力光源的穿透深度较弱、光敏剂非特异性靶向导致的皮肤毒性以及肿瘤部位乏氧导致的光动力降低,对肿瘤光动力治疗的前沿研究进行综述。

钙激活氯通道密度调节Anoctamin 1电流作用的研究

目的研究钙激活氯通道(CaCCs)密度对CaCCs蛋白—Anoctamin 1(Ano1)电流特性的调节作用,探讨高表达Ano1促进肿瘤发生的机制。方法瞬时转染Ano1质粒到HEK293细胞,高密度CaCCs通过表达Ano1 24 h获得,低密度CaCCs通过表达Ano16 h获得。膜片钳方法检测钙离子激活的Ano1的全细胞电流。激活电流曲线以指数曲线拟合。结果 Ano1质粒表达6 h的电流密度显著低于表达24 h的电流密度(P<0.05)。在低CaCCs密度时,Ano1的激活电流曲线最适于用单指数拟合,τslow为(292.71±38.11)ms。在高CaCCs密度时,Ano1的激活电流曲线最适于用两指数拟合,τfast为(47.78±4.58)ms;τslow为(385.74±71.44)ms。高CaCCs密度下的Ano1电流比低CaCCs密度下的Ano1电流多了一个快速激活成分(τfast),而高CaCCs密度与低CaCCs密度比较Ano1的τslow差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 CaCCs的密度可调节Ano1激活的动力学变化;高表达Ano1可促进CaCCs的激活。

激活学生思维,使数学课堂“活”起来

教会学生思考是教学的根本目标。教师要激活教材提供的静态内容,并结合学生的数学思维发展水平,设计恰当的课堂教学情境和数学思维过程,以使课堂教学活动适合学生的认知发展规律,让数学课堂＂活＂起来。

锻造“两品一械”网格先锋 构建药械安全社会共治格局

漳州市高新技术产业开发区市场监管局组建由69人组成的网格员队伍,分布于69个行政村,服务人口达18万人,以“点”带面,进一步细化“两品一械”网格员工作实施方案,多维发力夯实网格员工作发展地基。更广泛吸纳网格员以打破人力限制,更细化升级资源库以消除效能壁垒,更贴心帮扶网格员以激活动力源泉,更优化监管观以蓄积发展潜力,实现观念入脑、监管入户、服务入心、成果入册,推进形成“两品一械”安全社会共治格局。

外阴鳞癌组织中DCTN2和HOXB7水平表达及与预后的价值研究

目的 探讨外阴鳞癌组织中动力蛋白激活蛋白2(dynactin2,DCTN2)和同源异型盒基因B7(homeobox gene B7,HOXB7)水平表达及与预后的价值研究。方法 收集2008年1月~2017年12月在江油市人民医院行手术治疗的132例外阴鳞癌患者的癌组织与癌旁健康组织,采用免疫组织化学法检测组织中DCTN2和HOXB7表达情况;采用Kaplan-Meier法分析外阴鳞癌患者癌组织DCTN2和HOXB7表达与五年生存率之间的关系;采用COX回归分析外阴鳞癌患者五年后生存情况的影响因素。结果 外阴鳞癌组织中DCTN2阳性表达低于癌旁健康组织(31.06%vs 71.21%),HOXB7阳性表达高于癌旁健康组织(65.91%vs 37.12%),差异具有统计学意义(χ^(2)=42.583,21.899,均P <0.05)。外阴鳞癌组织DCTN2和HOXB7表达与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移、淋巴结转移数量、分化程度和腹股沟淋巴结情况相关(χ^(2)=16.998, 19.144;6.983, 5.800;6.595, 7.244;6.076, 5.665;5.864, 6.493,均P <0.05)。Kaplan-Meier生存曲线表明DCTN2阳性表达外阴鳞癌患者生存率高于阴性表达患者(χ^(2)=14.878,P <0.001),HOXB7阳性表达患者生存率低于阴性表达患者(χ^(2)=14.824,P <0.001)。多因素COX分析结果显示,FIGO分期、淋巴结转移、淋巴结转移数量、分化程度和HOXB7表达均是导致外阴鳞癌患者五年死亡的危险因素(P <0.05),DCTN2表达为保护因素(P <0.05)。结论 外阴鳞癌患者癌组织DCTN2表达下调,HOXB7表达升高,其表达与患者五年生存预后密切相关。

基于和谐教学理念下的英语高效课堂构建

构建和谐高效英语课堂,是促进学生在宽松的氛围中以良好的心情更高效地学习,使英语学习的过程成为学生形成积极的情感态度、主动思维和大胆实践、形成自主学习能力的过程。营造和谐教学气氛,发掘学生创造潜能;激活和谐课堂动力,拓展学生思维空间;精心创设问题情境,促进学生自主学习;实施多种教学方法,打造和谐高效课堂是构建和谐高效课堂的主要元素。

乙酰胆碱对豚鼠外毛细胞的电压依赖性外向整流钾电流的影响

目的 观察乙酰胆碱（ＡＣｈ）对不同长度豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣ）电压依赖性外向整流钾电流的影响，分析 ＡＣｈ对钾电流激活动力学的影响。方法 全细胞膜片钳技术。结果１００μｍｏｌ／Ｌ的ＡＣｈ对短ＯＨＣ电压依赖性外向整流钾电流的影响较大，刺激电压为５０ｍＶ时，最大外向电流的幅度增加了３４．８％。ＡＣｈ对峰电流的影响大于稳态电流，改变了外向整流钾电流的动力学特征。ＡＣｈ将ＯＨＣ的零电流电位向超极化方向移位约５ｍＶ。1００μｍｏｌ／Ｌ的ＡＣｈ使ＯＨＣ电压依赖性外向整流钾电流的激活动力学发生改变，Ｖ（１／２）＝（－５２．３８±３．９８）ｍＶ，较作用前明显超极化，激活的电压敏感性也提高，Ｓ＝（４０±４．１４）ｍＶ（ｎ＝５）。结论ＡＣｈ增加了ＯＨＣ电压依赖性外向整流钾通道的电导，使通道的激活电压向超极化方向移位。ＡＣｈ的作用是使ＯＨＣ超极化。

让高校英语课堂教学“高效”起来——对独立学院英语课堂教学改革的几点思考

本文旨在探讨独立学院英语教师如何在新课改理念的倡导下打造自己的高效课堂。在课堂改革中,教师应从角色、观念上转变,处理好师生关系,精心"备"好每节课;要善于营造和谐课堂气氛,发掘学生创造潜能;激活课堂动力,充分调动学生积极性;精心创设问题情境,促进学生自主学习;充分利用多媒体,丰富课堂教学形式;深入挖掘教学内容,实施多种教学方法。只有这样,才能真正使英语课堂高效起来,同时也使学生获得高效发展。