大鼠心肌肥厚中磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶和磷酸化蛋白激酶B蛋白表达与心肌纤维化的关系

目的:研究异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚中磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达与心肌纤维化的关系,为探讨大鼠心肌肥厚中心肌纤维化的信号转导机制和改善心功能提供形态学资料.方法:健康成年SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素,造成心肌肥厚模型;取心肌组织,常规石蜡切片,Masson染色,观察心肌组织的成纤维细胞变化;免疫组织化学显色和免疫荧光显色,检测p-PI3K和p-Akt的表达及分布.利用图像分析软件对p-PI3K和p-Akt的表达结果进行定量分析.结果:大鼠实验组的心肌肥厚指标明显高于对照组;Masson染色结果显示实验组心肌细胞较对照组心肌细胞直径明显变大,细胞间距变大,细胞间纤维细胞增多,呈现区域性纤维化;免疫组织化学检测显示,实验组心肌组织p-PI3K和p-Akt蛋白表达面积和平均光密度较对照组高,两者差异有统计学意义;免疫荧光检测实验组心肌组织p-PI3K和p-Akt蛋白表达较对照组高.结论:p-PI3K和p-Akt蛋白表达增高可能在心肌纤维化的发生和发展过程中起重要作用.

外源性胆红素对缺血缺氧性脑损伤大鼠认知功能及海马组织中蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子与激活子3/B细胞淋巴瘤基因-2通路的影响

目的观察外源性胆红素对缺血缺氧性脑损伤大鼠认知功能及海马组织中蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子与激活子3(STAT3)/B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)通路的影响。方法将72只无特定病原体级7日龄雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松组及外源性胆红素低、中、高剂量组,每组12只。各组大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉,分离左侧颈总动脉,用丝线结扎颈外动脉(假手术组大鼠只穿线不结扎),模型制备4 h后,地塞米松组大鼠腹腔内注射10 mg·kg-1地塞米松,外源性胆红素低、中、高剂量组大鼠分别腹腔内注射5、10、15 mg·kg-1外源性胆红素,假手术组、模型组大鼠腹腔内注射等量的生理盐水,连续2周。采用水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法检测各组大鼠海马组织中细胞凋亡情况,采用Western blot法检测各组大鼠海马组织中p-JAK2、p-STAT3及Bcl-2蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验第1、2、3、4天逃避潜伏时间均显著延长(P <0. 05),穿越平台次数及探索平台速度均显著降低(P <0. 05),海马组织细胞凋亡率及海马组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2表达水平均显著升高(P <0. 05)。与模型组比较,地塞米松组和外源性胆红素低、中、高剂量组大鼠Morris水迷宫实验第1、2、3、4天逃避潜伏时间均显著缩短(P <0. 05),穿越平台次数及探索平台速度均显著增加(P <0. 05),海马组织细胞凋亡率及海马组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2表达水平均显著降低(P <0. 05)。与地塞米松组比较,外源性胆红素低、中剂量组大鼠Morris水迷宫实验第1、2、3、4天逃避潜伏时间显著延长(P <0. 05),穿越平台次数及探索平台速度均显著降低(P <0. 05),海马组织细胞凋亡率及海马组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2表达水平均显著升高(P <0. 05)。外源性胆红素高剂量组与地塞米松组大鼠Morris水迷宫实验第1、2、3、4天逃避潜伏时间、穿越平台次数及探索平台速度、海马组织细胞凋亡率及海马组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2表达水平比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。随着外源性胆红素剂量增加,外源性胆红素低、中、高剂量组大鼠Morris水迷宫实验第1、2、3、4天大鼠逃避潜伏时间呈缩短趋势,穿越平台次数及探索平台速度呈增加趋势,海马组织细胞凋亡率及海马组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2表达水平呈降低趋势,组间两两比较差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论外源性胆红素能够提高缺血缺氧性脑损伤大鼠的认知功能,抑制海马组织细胞凋亡,这一作用可能是通过调控JAK2/STAT3/Bcl-2通路的活性而实现。

磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系

目的分析磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在胃癌及癌旁组织中的表达及与其病理特征的关系。方法选取2018年2月至2019年4月商丘市第一人民医院收治的54例胃癌患者,检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平,对比p-PI3K、p-Akt在胃癌及癌旁组织中的表达情况和不同病理特征胃癌组织中的阳性表达率。结果p-PI3K胃癌组织阳性表达率[81.48%(44/54)]高于癌旁组织[22.22%(12/54)](P<0.05)。p-Akt胃癌组织阳性表达率[75.93%(41/54)]高于癌旁组织[20.37%(11/54)](P<0.05)。低分化、有淋巴结转移的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移的胃癌组织(均P<0.05);低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的胃癌组织p-PI3K阳性表达率高于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的胃癌组织(均P<0.05)。结论p-PI3K、p-Akt胃癌组织阳性表达率高,p-PI3K、p-Akt表达情况与分化程度、疾病分期、淋巴结转移密切相关,PI3K/Akt信号通路可能为临床药物治疗提供新靶点。

丙泊酚对神经元缺血再灌注损伤的保护与磷酸化蛋白激酶信号通路的关系

目的:探讨丙泊酚在脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)中的作用及可能机制。方法:采用氧糖剥夺再灌注(OGD/RP)法体外构建缺血/再灌注细胞模型,将细胞分为对照组、OGD/RP组和丙泊酚+OGD/RP联合组。采用MTT法检测皮质神经元存活率,Annexin V-PI检测细胞凋亡情况,RT-PCR方法检测碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)的m RNA表达,Western blot检测丙泊酚对皮质神经元内b FGF、磷酸化蛋白激酶B(p PKB)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p ERK1/2)表达。采用小干扰RNA构建b FGF沉默的细胞。结果:丙泊酚能够显著促进CI/RI后神经元的存活,抑制其凋亡,OGD/RP处理组神经元凋亡率为43.2%,以10 mg/L的丙泊酚预处理后细胞的凋亡率即降为19.5%(P<0.05)。与对照组(1.02±0.03)相比较,OGD处理后细胞中b FGF的含量(0.78±0.06)显著下调(P<0.05),丙泊酚处理的皮质神经元中b FGF含量(1.43±0.04)显著高于OGD处理组(P<0.05)。沉默的b FGF或者施加蛋白激酶B(PI3K-p PKB)以及p ERK1/2信号通路抑制剂都会导致细胞存活率显著下降(P<0.05),抑制PI3K-p PKB以及ERK1/2的激活。结论:丙泊酚可以通过上调b FGF的表达,激活PI3K-p PKB和ERK1/2的信号通路,减轻体外培养神经元凋亡/再灌注损伤,从而增加皮质神经元的存活。

磷脂酰肌醇-3-激酶参与过度机械通气诱导的核因子-κB激活

目的通过观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂(ly294002)对不同潮气量机械通气中NF-κB活性的影响,探讨机械通气肺损伤发生机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组(A组)、正常通气组(B组)、过度通气组(C组)、正常通气+ly294002组(D组)、过度通气+ly294002(E组),每组8只。分别采用Western blot测定磷酸化蛋白激酶B(Akt)的活性、免疫组化观察I-κBβ、NF-κB在肺细胞中的分布及表达;电泳迁移率测定NF-κB的DNA结合活性。结果C组大鼠肺组织中Akt的磷酸化水平较其他各组增加(P<0.05),NF-κB的DNA结合活性较A、D、E组显著提高(P<0.01),肺组织中I-κBβ表达显著降低,NF-κB表达增加,且主要表达于肺内巨噬细胞和肺上皮细胞。ly294002可明显抑制Akt磷酸化,降低NF-κB的活性及在肺组织中的表达。结论PI3K参与了过度机械通气导致的NF-κB激活。

基于PI3K/PKB信号通路变化探究清胰汤在急性胰腺炎相关性肺损伤治疗中的应用价值及作用机制

目的:基于磷脂酰肌醇3羟激酶(PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(PKB)信号通路变化探究清胰汤在急性胰腺炎相关性肺损伤治疗中的应用价值及作用机制。方法:选取2020年8月~2022年11月我院收治的98例急性胰腺炎相关性肺损伤患者,随机分为对照组与观察组各49例,对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组基础上加用中药清胰汤治疗,均治疗2周,比较两组患者的临床疗效,肠胃恢复状况(发热、腹胀腹痛、恶心呕吐及肠鸣音恢复时间),血氧指标[血氧分压(PaO_(2))、氧合指数(OI)水平],血清学指标[淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)、PI3K、PKB水平],生活质量[生活质量核心问卷(QLQ-C30)评分]以及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组患者的总有效率为91.84%高于对照组的73.47%(P<0.05);观察组患者恶心呕吐、腹胀腹痛、发热、肠鸣音等肠胃状况恢复时间均短于对照组(P<0.05);观察组患者的PaO_(2)、OI水平均高于对照组(P<0.05);观察组患者的血清AMY、LPS、PI3K、PKB水平均低于对照组(P<0.05);观察组患者的QLQ-C30评分低于对照组(P<0.05);两组患者均未见有明显严重不良反应发生,且两组间不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:清胰汤对急性胰腺炎相关性肺损伤有较好的临床治疗效果,可有效缓解患者症状,提高生活质量,用药安全性好,PI3K/PKB信号通路激活被抑制是其主要作用机制之一。

妊娠期糖尿病孕妇胎盘组织中微小RNA-508-3p磷酸化蛋白激酶B和血清趋化素表达及与胰岛素抵抗的关系

目的探究妊娠期糖尿病(GDM)孕妇胎盘组织中微小RNA-508-3p(miRNA-508-3p)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和血清趋化素表达及与胰岛素抵抗的关系。方法选取2020年6月—2021年5月天津市东丽医院收治的89例GDM孕妇作为观察组,同时期进行孕检的健康孕妇40例为对照组。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测两组孕妇胎盘组织中miRNA-508-3p表达情况,采用BCA法检测两组孕妇胎盘组织中p-Akt蛋白表达情况,采用ELISA法检测两组血清趋化素水平,计算两组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。依据HOMA-IR将观察组孕妇进一步分为胰岛素抵抗组(65例)与无胰岛素抵抗组(24例),并分析上述指标与胰岛素抵抗的关系。结果与对照组比,观察组miRNA-508-3p、趋化素以及HOMA-IR均更高,p-Akt更低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。胰岛素抵抗组miRNA-508-3p、趋化素水平均高于无胰岛素抵抗组,p-Akt水平低于无胰岛素抵抗组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。GDM孕妇胎盘组织中miRNA-508-3p和血清趋化素均与HOMA-IR呈正相关(r=0.707,0.544,均P<0.05),p-Akt与HOMA-IR呈负相关(r=-0.444,P<0.05)。miRNA-508-3p、p-Akt、趋化素联合检测GDM的灵敏度和特异度分别为83.15%和92.50%,ROC曲线下面积(AUC)为0.929(0.870~0.967),诊断效能优于miRNA-508-3p、p-Akt、趋化素单一指标检测(Z=3.995、2.348、3.593,均P<0.05)。结论GDM孕妇胎盘组织中miRNA-508-3p和血清趋化素表达升高,胎盘组织中p-Akt蛋白表达降低,与胰岛素抵抗密切相关。

子宫内膜癌组织中p-PKB及仅含BH3域蛋白的表达及其相关性

目的:研究子宫内膜癌组织中磷酸化PKB、磷酸化Bad及Bim蛋白及mRNA表达水平,并探讨其与子宫内膜癌发生的关系以及三者间表达的相关性。方法:采用免疫组化方法检测11例正常增殖期子宫内膜、13例非典型增生子宫内膜及55例子宫内膜癌组织中p-PKB、p-Bad及Bim蛋白表达情况,以及采用逆转录聚合酶链反应检测上述子宫内膜组织中PKB、Bad及BimmRNA表达水平。结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌及非典型增生组织中p-PKB及p-Bad蛋白表达阳性率明显增加(P=0.001;P<0.001);而Bim蛋白的表达则显著减少(P<0.001),差异有显著性;PKBmRNA及BadmRNA在正常子宫内膜、非典型增生内膜及子宫内膜癌之间表达的阳性率无明显差异(P>0.05),只有BimmRNA在正常子宫内膜组织中表达的阳性率明显高于非典型增生内膜及子宫内膜癌组织(P=0.006)。结论:PKB途径的激活与子宫内膜癌的发生密切相关。其激活后可通过多种机制作用于仅含BH3域蛋白,抑制其促凋亡活性,导致子宫内膜细胞过度增殖以及子宫内膜癌的发生。

丙泊酚通过上调纤维细胞生长因子的表达激活磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B和磷酸化细胞外信号调节激酶1／2信号通路抑制体外培养神经元缺血／再灌注损伤

目的探讨丙泊酚在脑缺血，再灌注损伤（ischemia／reperfusioninjury，I／RI）中发挥的作用及其具体机制。方法采用氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation／reperfusion，OGD／RP）法体外构建缺血／再灌注细胞模型，将细胞分为对照组、OGD／RP组、丙泊酚＋OGD／RP组。采用甲基噻唑基四唑（methylthiazolyl tetrazolium，MTF）法检测皮质神经细胞存活率，AnnexinV-PI检测细胞凋亡情况，即时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）方法检测碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）的mRNA表达情况，免疫印迹法（Westernblot）检测丙泊酚对皮质神经细胞内bFGF，磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated proteinkinaseB，pAkt）以及磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（phosphorylated extracellular signal-regulatedkinase1／2，pERKl／2）蛋白表达的影响；采用小干扰RNA构建bFGF沉默的细胞。结果OGD／RP处理组神经细胞凋亡率为43．2％，经10mg／L的丙泊酚预处理后，细胞的凋亡率降为19．5％。与对照组比较，OGD处理后，细胞中bFGF的含量显著下调（P〈0．05），丙泊酚处理的皮质神经元中bFGF含量显著高于OGD处理组（P〈0．05）。丙泊酚能够上调pAKT以及pERKI／2的表达，激活这两条信号通路。沉默bFGF或者施加磷酸肌醇3激酶．蛋白激酶B（phosphotylinosital3kinase-proteinkinaseB，P13K-Akt）以及pERK1／2信号通路抑制剂都会导致细胞存活率显著下降（P〈0．05），抑制P13K-Akt以及pERKl／2的激活。结论丙泊酚可以通过上调bFGF的表达，激活P13K-Akt和ERK1／2信号通路，增加皮质神经元的存活。

心肺复苏大鼠海马神经元磷脂酰肌醇-3-激酶、蛋白激酶B和磷酸化cAMP应答元件结合蛋白表达的变化及APP17肽的影响

目的探讨心肺复苏后大鼠海马神经元磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，P13K）、蛋白激酶B（protein kirmse B，PKB）、磷酸化cAMP应答元件结合蛋白（phosphorylation of cAMP response elementb inding protein，p-CREB）表达的变化，以及APP17肽对它们的影响。方法实验地点在宣武医院神经变性病学重点实验室。雄性Wistar大鼠21只，随机分3组，每组7只：假手术对照组（A组）、心肺复苏组（B组）、心肺复苏＋APP17肽组（C组）。自主呼吸循环恢复（return of spontaneous circulation，ROSC）标准为心电图出现正常的QRS波群，心室内压≥60mmHg，持续10min以上；夹闭气管制作大鼠心跳呼吸停止模型，行心肺复苏。当大鼠出现ROSC时，复苏组静脉注射生理盐水；APP17肽组静脉注射APP17肽10μg·（300g）^-1。对照组行假手术，静脉注射生理盐水。维持生命体征至2h，断头取脑，行冰冻切片。应用免疫组化法观察3组大鼠复苏2h后海马神经元P13K，PKB，p-CREB表达情况；三组中各取1只大鼠于ROSC后2h，分离海马；应用Westem-blot方法测定海马神经元PKB，p-CREB蛋白含量。数据以均数±标准差（x±s）表示，组间数据用方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果免疫组化法显示：B组P13K阳性细胞表达为（2．75±1．80），略高于A组（2．53±1．53），差异没有统计学意义；而C组为（5．85±2．83），较B组增加，差异具有统计学意义（P〈0．01）。B组PKB和p-CREB阳性细胞分别较A组明显减少[（2．45±1．36）VS．（5．22±2．50），（P〈0．05）；（2．41±1．11）VS．（8．314±3．02），P〈0．01]；C组PKB和p-CREB阳性细胞分别较B组增高[（9．66±4．32）VS．（2．45±1．36），P〈0．01；（14．18±3．96）VS．（2．41±1．11），P〈0．01]。Western-blot法测定PKB，p-CREB蛋白含量B组较A组明显减少；C组较B组明显增加。结论心肺复苏大鼠ROSC2h海马神经元PKB，p-CREB表达降低，APP17肽能恢复神经元P13K，PKB，p-CREB的表达，对心肺复苏后海马神经元损伤有保护作用。

磷脂酰肌醇3激酶和磷酸化蛋白激酶B在小儿血管瘤中的表达及意义

目的探讨P13K／Akt信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用。方法收集未经其他治疗、单纯手术切除并病理诊断为血管瘤的标本，结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原（PCNA）表达对血管瘤进行分类和分期，抽取增生期与消退期血管瘤各20例，免疫组化检测增生期血管瘤和消退期血管瘤组织中磷脂酰肌醇3激酶（P13K，p85）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达水平，其中液氮冻存的增生期和消退期血管瘤标本各11例，应用RT-PCR检测p85、p-Akt的mRNA表达情况，并分析其相关性。结果增生期血管瘤p85、p-Akt的表达率和表达强度均高于消退期血管瘤（P〈0．05，P％0．01）；增生期血管瘤p85、p-Akt的积分光密度分别为191．23±40．45、178．73±38．49，消退期血管瘤p85、p-Akt的积分光密度分别为46．63±13．08、64．93±21．22，差异有统计学意义（P〈0．01）；p85与p-Akt的表达之间呈正相关关系（r=0．5530，P％0．05）。增生期血管瘤p85mRNA、p-AktmRNA的相对表达值分别为0．0807±0．0136、0．0841±0．0137，消退期血管瘤p85、P-Akt的相对表达值分别为0．0203±0．0098、0．0324±0．0178，差异有统计学意义（P〈0．01）；p85mRNA、p-AktmRNA的表达之间呈正相关关系（r=0．5503，P％0．01）。结论d＇Jh增生期和消退期血管瘤组织中p85、p-Akt及其mRNA表达有差异，P13K／Akt信号通路可能在~l,Jh血管瘤的病理演变中发挥作用。

LAIR-1通过阻断JAK2 V617F突变的人HEL细胞JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)对Janus激酶2(JAK2)V617F突变的人急性髓系白血病HEL细胞JAK/信号转导子与转录激活子(STAT)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的调节作用,以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用反转录PCR和基因测序鉴定JAK2 V617F突变;应用免疫共沉淀和Western blot法鉴定LAIR-1募集的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)种类;采用CCK-8法检测HEL细胞的增殖;采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测HEL细胞的凋亡率;采用Western blot法检测JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白酪氨酸磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果在JAK2 V617F突变的HEL细胞中,LAIR-1与其配体胶原蛋白结合后可募集含Src同源域2磷酸酶2(SHP-2);LAIR-1可以下调HEL细胞JAK2、STAT1、STAT3、STAT5、AKT和mTOR的蛋白酪氨酸磷酸化水平,并能够显著抑制cyclin D1和Bcl2的表达,而对BAX的表达水平未见显著影响;LAIR-1能够明显抑制HEL细胞的增殖,促进HEL细胞凋亡。结论在JAK2 V617F突变的人白血病HEL细胞中,LAIR-1可通过募集SHP-2抑制JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路的活化,进而抑制HEL细胞的增殖,促进细胞凋亡。

乳腺浸润性导管癌组织IRS1、PRSS3蛋白表达与磷酸化蛋白激酶B表达和预后的关系研究

目的:探讨乳腺浸润性导管癌(BIDC)组织胰岛素受体底物1(IRS1)蛋白、丝氨酸蛋白酶3(PRSS3)蛋白表达与磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达以及预后的关系。方法:选择2017年1月至2018年12月我院收治的363例BIDC患者,采用免疫组化法检测经手术切除的BIDC癌组织和癌旁组织中IRS1蛋白、PRSS3蛋白以及p-AKT表达,比较BIDC不同病理特征IRS1蛋白、PRSS3蛋白表达差异。Spearman秩相关分析IRS1蛋白、PRSS3蛋白表达与p-AKT表达的相关性。术后定期随访,采用Kaplan-Meier生存分析、Cox风险比例回归分析IRS1蛋白、PRSS3蛋白表达与BIDC患者预后的关系。结果:BIDC组织中IRS1蛋白、PRSS3蛋白、p-AKT阳性表达率分别为68.87%、58.13%、68.04%,均高于对照组的46.56%、40.50%、41.60%(P<0.05)。IRS1蛋白表达、PRSS3蛋白表达与p-AKT表达均呈正相关(rs=0.805、0.796,P<0.05)。肿瘤直径>2 cm、低中度分化、AJCC分期为Ⅱ期的患者IRS1蛋白阳性表达率高于肿瘤直径≤2cm、高度分化、AJCC分期为Ⅰ期的患者(P<0.05),AJCC分期为Ⅱ期、HER-2阳性表达、Ki-67阳性表达的患者PRSS3蛋白阳性表达率高于AJCC分期为Ⅰ期、HER-2阴性表达、Ki-67阴性表达的患者(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示IRS1蛋白、PRSS3蛋白阳性表达者PFS生存率、OS生存率低于IRS1蛋白、PRSS3蛋白阴性表达者(P<0.05)。多因素COX风险比例回归结果显示AJCC分期Ⅲ期、IRS1蛋白阳性表达、PRSS3蛋白阳性表达是BIDC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论:BIDC癌组织中IRS1蛋白、PRSS3蛋白阳性表达率增高,IRS1蛋白、PRSS3蛋白可能通过调节p-AKT参与BIDC癌症进展过程。

Paget病皮损中p-Stat3，p-Akt，cyclinD1蛋白表达及其相关分析

目的探讨磷酸化细胞信号转导与转录活化因子3(p-Stat3)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在Paget病中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测p-Stat3,p-Akt和cyclinD1在21例Paget病(包括乳房及乳房外)、15例汗管瘤和10例正常人皮肤组织中的表达水平,利用图像分析技术测量阳性细胞的平均光密度值,并对这3种蛋白的表达进行相关性分析。结果 Paget病中p-Stat3,p-Akt和cyclinD1的平均光密度值均明显高于汗管瘤和正常人皮肤组织,差异均有统计学意义(P均<0.001),而汗管瘤和正常皮肤组织比较差异无统计学意义(P>0.05);乳房Paget病与乳房外Paget病比较,p-Stat3,p-Akt和cyclinD1蛋白的表达差异均无统计学意义(P均>0.05);p-Stat3与cy-clinD1的表达,p-Akt与cyclinD1的表达及p-Stat3与p-Akt的表达均呈正相关(r=0.809,0.776,0.516,P均<0.05)。结论 Paget病中存在p-Stat3,p-Akt和cyclinD1的高表达,p-Stat3,p-Akt可能通过JAK/Stat3信号转导通路及PI3K/Akt信号转导通路诱导cyclinD1的过度表达,促使肿瘤细胞的生长及增殖。

七氟烷后处理增加脑缺血再灌注损伤后磷酸化蛋白激酶B表达

七氟烷是一种新型的吸入全身麻醉药，已在临床广泛应用。以往的研究结果已经证明七氟烷后处理具有神经保护作用，但其具体的机制尚未清楚，可能与磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）途径有关。我们利用七氟烷后处理，观察在中动脉闭塞（MCAO）模型中不同再灌注时间对磷酸化Akt（p-Akt）的影响。

磷脂酰肌醇3-激酶和磷酸化蛋白激酶B在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)在人膀胱尿路上皮癌组织中的表达特征及临床意义。方法 2005年6月-2010年7月,采用免疫组织化学法检测40例膀胱尿路上皮癌组织及10例正常膀胱组织PI3K与p-Akt的表达,并对结果进行统计学分析。结果 PI3K和p-Akt在正常膀胱黏膜组织阳性表达率均低于膀胱尿路上皮癌组织中,差异均有统计学意义(P<0.05)。同一标本中PI3K和p-Akt的表达不具有相关性(r=0.051,P=0.747)。结论 PI3K、p-Akt在膀胱尿路上皮癌中高表达,两者在膀胱尿路上皮癌中共同促其发展,但其在膀胱尿路上皮癌的预后和进展中的作用尚不明确。

磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B在不同时间大鼠重症急性胰腺炎肠道损伤的表达

目的 用5％牛磺胆酸钠诱导大鼠重症急性胰腺炎（SAP）模型,观察磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）在其中的表达,并探讨制作该模型合适的时间点.方法 雄性SD大鼠59只,随机分为5组：正常对照组（n=12）、假手术组（CON组,n=12）、SAP组（n=36）、3、6、12 h组（n=12）.胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备SAP肠道损伤模型.在3、6、12h测定腹水量,血清淀粉酶、脂肪酶水平,光镜观察胰腺及回肠病理改变,免疫组织化学观察末端回肠蛋白激酶B（Akt）及p-Akt表达.结果 SAP组随着时间点的延长,血清淀粉酶、脂肪酶水平,胰腺和回肠的病理评分逐渐升高,并且p-Akt在SAP大鼠回肠中表达也逐渐增强,在12h达到高峰（P＜0.05）,且均高于CON组表达,Akt在SAP大鼠回肠中表达逐渐减少,12h最少（P＜0.05）,且均低于于CON组表达.结论 逆行注射5％牛磺胆酸钠12h后,可能是研究SAP大鼠肠道损伤最合适的时间点.

血管紧张素Ⅱ通过抑制AKT/蛋白激酶B磷酸化诱导肾小管上皮细胞凋亡

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在诱导肾小管上皮细胞凋亡的信号传导是否有磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-AKT信号系统的参与,及该系统在诱导细胞凋亡中的作用。方法大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-5mol/LAngⅡ共培养24h。用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。Western印迹检测PI3K及磷酸化AKT和总AKT蛋白表达,AKT的磷酸化水平用473位丝氨酸磷酸化AKT(AKT-ser473)水平与总AKT水平的比值表示。结果随着AngⅡ浓度的增加,10-6mol/LAngⅡ组与对照组相比,凋亡指数显著增加[(22.7±1.41)%比(3.0±0.75)%,P<0.01]。而10-9mol/LAngⅡ组与对照组相比,PCNA指数显著增强[(47.54±2.6)%比(22.63±2.5)%,P<0.01]。与对照组相比,PI3K-p85蛋白的表达随AngⅡ浓度增加表现为先激活后抑制。AKT的磷酸化具有明显的AngⅡ浓度依赖性,随AngⅡ浓度的增加而逐渐受到抑制,并与细胞凋亡指数呈显著负相关(r=-0.90,P<0.01)。结论AngⅡ可以诱导肾小管上皮细胞凋亡并抑制细胞的增殖,可能部分是通过抑制PI3K-AKT信号传导途径实现的。

PKB/Akt和GSK-3β在抗体介导的慢性排斥反应患者移植肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:观察磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖元合成激酶(GSK-3β)在抗体介导的慢性排斥反应(chronic active antibody-mediated reiection,ABMR)患者移植肾肾小管上皮细胞中的表达,探讨二者在移植肾小管上皮细胞转分化(EMT)中的作用。方法:38例移植肾穿刺标本经病理明确诊断为ABMR,按Banff 2009标准将其按间质纤维化/小管萎缩(IF/TA)程度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分为C1(n=12)、C2(n=14)、C3(n=12)组,用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测移植肾组织中p-Akt、GSK-3β、转化生长因子TGF-β_1、整合素连接激酶ILK、上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在各组中的表达面积,线性相关分别分析p-Akt、GSK-3β与转化生长因子TGF-β_1、整合素连接激酶ILK、E-cadherin和α-SMA表达的相关性及其与IF/TA病理分级之间的关系。9例正常肾组织作为对照组。结果:ABMR患者移植肾组织中p-AKt、GSK-3β、TGF-β_1、ILK和α-SMA的表达比正常肾组织明显增加(P <0. 001),并随(IF/TA)病理分级呈逐渐递增的趋势。E-钙黏蛋白在ABMR肾小管上皮细胞中的表达比正常肾组织明显减少(P <0. 001),组间呈递减趋势,移植肾组织中P-akt的表达与TGF-β_1、ILK和α-SMA呈正相关(r分别为0. 912、0. 871和0. 878,P <0. 001),而与E-cadherin的表达量呈负相关(r=-0. 849,P <0. 001);GSK-3β的表达与TGF-β_1、ILK、p-Akt和α-SMA呈正相关(r分别为0. 874、0. 793、0. 828、0. 781,P <0. 001),与E-cadherin的表达量呈负相关(r=-0. 781,P <0. 001)。p-Akt、GSK-3β、ILK、TGF-β_1和α-SMA的表达均与移植IF/TA程度呈正相关(r分别为0. 943、0. 863、0. 907、0. 964和0. 926,P <0. 001);而E-cadherin的表达与移植肾IF/TA程度成负相关(r=-0. 859,P <0. 001)。结论:P-Akt、GSK-3β作为TGF-β_1及ILK的重要下游细胞因子可能介导了ABMR所致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的发生、发展,p-Akt和GSK-3β在ABMR所致移植肾间质纤维化进程中可能发挥重要作用。

PI3K/Akt信号传导通路蛋白在晚期非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K),磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated Akt B,p-AKT)在晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung carcinoma,NSCLC)组织中的表达及其与预后的关系。方法:回顾性分析87例晚期NSCLC患者的临床资料,其中鳞癌组37例,腺癌组50例,并收集16例肺癌癌旁正常肺组织标本作为对照组。应用免疫组织化学方法检测PI3K和p-AKT蛋白在癌组织和正常组织中的表达,分析其与患者临床资料变量的关系及其对预后的影响。结果:PI3K和p-AKT在晚期NSCLC中的表达明显高于正常肺组织(P=0.001,0.005)。p-AKT表达与肿瘤的TNM分期呈正相关(P=0.016),而与肿瘤的性别、年龄、病理类型、分化程度、体力状态(PS)评分无关。PI3K表达与上述临床特征无关。PI3K阴性表达组的中位数生存时间明显优于阳性表达组[17.699月(95%CI 15.114-20.283)/13.426月(95%CI 11.832-15.021),P=0.004],p-AKT阴性表达组的中位数生存时间明显亦优于阳性表达组[17.134月(95%CI 14.927-19.341)/13.067月(95%CI 11.316-14.817),P=0.007]。多变量Cox回归分析显示PI3K(HR=2.128,P=0.009),p-AKT(HR=0.501,P=0.045),TNM分期(HR=4.808,P<0.001),PS评分(HR=3.277,P<0.001)是晚期NSCLC的独立预后因素。结论:PI3K、p-AKT与晚期NSCLC不良预后因素密切相关,PI3K、p-AKT是晚期NSCLC预后的独立不利因素。