补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。

巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

目的观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组,采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2 w后开始给药,给药3个月后观察各组大鼠骨密度(BMD),骨钙、骨磷含量,RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的BMD和骨钙、磷的含量,上调OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用,其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达,降低RANKL/OPG值有关。

抗风湿颗粒对胶原诱导关节炎大鼠骨保护素、核因子-κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:观察抗风湿颗粒(Kangfengshi Granules,KFSG)对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)mRNA表达的影响,探讨KFSG治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)治疗组和KFSG治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠予以皮下注射Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。治疗4周后,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL和M-CSF mRNA的表达水平。结果:造模大鼠90%出现关节炎症状。治疗4周后,模型组、CsA治疗组和KFSG治疗组与正常对照组比较,RANKL mRNA和M-CSF mRNA的表达增高,OPGmRNA的表达降低,RANKL mRNA/OPG mRNA比值亦增高,差异均有统计学意义。KFSG治疗组与模型组比较,OPG mRNA的表达水平上调,M-CSF mRNA的表达水平下调,RANKL mRNA/OPG mRNA比值下降,差异均有统计学意义。结论:KFSG治疗RA骨质破坏的分子机制可能与其上调OPG mRNA的表达、下调M-CSF mRNA的表达及降低RANKL mRNA/OPG mRNA比值有关。

p38MAPK抑制对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的观察p38MAPK信号转导通路在成骨细胞分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclear factor-κBligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达中的作用。方法取第1继代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,药物刺激组分别加入10-8mol/L 17β-雌二醇和10-7mol/L雷洛昔芬;含阻断剂组预先添加5μmol/L SB202190阻断p38MAPK通路后,再加17β-雌二醇或雷洛昔芬。72 h后用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞ALP、OPG和RANKL的转录水平。结果17β-雌二醇和雷洛昔芬能够促进成骨细胞分化,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL无明显变化(P>0.05);阻断p38MAPK信号转导通路后,成骨细胞分化受抑,OPG、RANKL的表达和OPG/RANKL降低(P<0.05)。结论p38MAPK抑制可干扰体外培养成骨细胞分化,抑制RANKL和OPG的过度表达。

雷公藤内酯醇对佐剂关节炎模型大鼠关节中核因子-κB受体激活剂配基表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对佐剂关节炎大鼠关节中核因子-κB受体激活剂配基(RANKL)和护骨素(OPG)表达的影响。方法:复制大鼠佐剂关节炎模型,关节炎起病后分别灌胃给予雷公藤内酯醇和甲氨蝶呤,关节炎病程高峰期运用免疫组化和图像分析技术测定关节滑膜和骨组织RANKL和OPG的表达,同时测定胫骨关节端骨密度。结果:给予雷公藤内酯醇和甲氨蝶呤的大鼠骨密度均高于模型组(P<0.05),大鼠关节滑膜、软骨下骨和小梁骨区域中RANKL表达量均低于模型组(P<0.05,P<0.01),OPG关节骨组织表达量均低于模型组(P<0.05)。结论:抑制炎性关节中RANKL表达可能是雷公藤内酯醇和甲氨蝶呤抑制类风湿关节炎关节骨侵蚀的机制之一。

佐剂性关节炎大鼠骨密度及血清骨保护素和核因子-κB受体激活因子配体的变化

目的:观察佐剂性关节炎大鼠的骨密度、血清骨保护素(OPG)及核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)的表达。方法:将30只SD大鼠随机均分为正常对照组、模型1组、模型2组,除正常对照组外,其余大鼠均制成佐剂性关节炎模型。造模后第21天处死模型1组,第28天处死正常对照组和模型2组。以双能X线吸收测定法测量整体右侧胫骨和距胫骨远端约1cm兴趣区检测骨密度;ELISA方法检测血清OPG、RANKL的表达。结果:模型1组大鼠兴趣区的骨密度明显低于正常对照组(P<0.01);模型2组大鼠兴趣区的骨密度均较模型1组和正常对照组显著降低(P<0.01);3组大鼠整体右侧胫骨骨密度值差异无统计学意义(P>0.05)。模型1组、模型2组血清OPG、RANKL表达及OPG/RANKL比值与正常对照组差异均有统计学意义(P<0.01)。同时模型1组与模型2组血清OPG、RANKL表达及OPG/RANKL比值差异亦均有统计学意义(P<0.01)。结论:佐剂性关节炎大鼠胫骨远端骨丢失的发生在整体胫骨之前。造模后第21天和第28天的OPG表达降低,RANKL表达升高,OPG/RANKL比值降低。

核因子-κB受体激活剂配体-核因子-κB受体激活剂信号传导通路在骨髓瘤骨病中的研究进展

多发性骨髓瘤是一种恶性克隆性浆细胞疾病,目前仍无法治愈,约90%多发性骨髓瘤患者在疾病的进程中出现骨髓瘤骨病,严重影响了患者的生活质量和疾病预后。骨髓瘤骨病的传统治疗包括双膦酸盐、放疗、手术治疗等。近年来随着研究证实核因子-κB受体激活剂配体(RANKL)-核因子-κB受体激活剂(RANK)信号传导通路在骨髓瘤骨病中发挥重要作用,为治疗骨髓瘤骨病提供了新靶点。本文就RANKL-RANK信号传导通路在骨髓瘤骨病中的发病机制及靶向治疗新进展进行综述。

雷公藤多苷对佐剂性关节炎模型大鼠关节中核因子κB受体激活剂配基表达的影响

目的探讨雷公藤多苷对佐剂性关节炎大鼠关节中核因子κB受体激活剂配基(RANKL)和护骨素(OPG)表达的影响。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,关节炎起病后分别灌胃给予雷公藤多苷和甲氨蝶呤,关节炎病程高峰期运用免疫组化和图像分析技术测定关节滑膜和骨组织RANKL和OPG的表达,同时测定胫骨关节端骨密度。结果给予雷公藤多苷和甲氨蝶呤的大鼠骨密度均高于模型组(均P<0.05),大鼠关节滑膜、软骨下骨和小梁骨区域中RANKL表达量均低于模型组(P<0.01或P<0.05),OPG关节骨组织表达量均低于模型组(均P<0.05)。结论抑制炎性关节中RANKL表达可能是雷公藤多苷和甲氨蝶呤抑制类风湿关节炎关节骨侵蚀的机制之一。

跑台运动训练对脊髓损伤后大鼠肺损伤及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的:探讨跑台运动训练对脊髓损伤(SCI)后大鼠肺损伤及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路表达的影响。方法:选取54只SD雌性大鼠,随机分成3组,包括假手术组、SCI制动组、SCI运动组。SCI运动组及SCI制动组分别于术后第3天开始跑台运动训练或制动干预,BBB评分评定大鼠脊髓损伤后后肢运动功能。分别在运动或制动后第3天、第7天取肺组织,HE染色检测大鼠肺组织病理结构变化;免疫组化检测肺组织HMGB1蛋白表达情况;qRT-PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α m RNA表达情况;Western Blot检测HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达情况。结果:BBB评分结果显示,与假手术组比较,SCI制动组、SCI运动组BBB评分均显著下降(P<0.05);SCI运动组与SCI制动组评分结果比较无显著性差异(P>0.05)。HE染色结果显示,SCI制动组及SCI运动组第3天、第7天肺组织中均出现水肿、出血、炎性细胞浸润,相较于SCI制动组,SCI运动组肺损伤评分显著降低(P<0.05)。qRT-PCR、免疫组化、Western Blot结果均显示,与假手术比较,SCI制动组、SCI运动组第3天、第7天肺组织中HMGB1、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等因子的表达均显著上调(P<0.05),且SCI运动组较SCI制动组显著降低(P<0.05)。结论:跑台运动训练可改善脊髓损伤后大鼠肺损伤,其机制可能与调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,抑制肺组织炎症反应相关。

马齿苋多糖调节PPARγ/NF-κB通路对大鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的探究马齿苋多糖通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)/核因子κB(NF-κB)通路对大鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法SPF级SD大鼠随机抽取10只作为对照组(正常饮食喂养),其余大鼠高脂饮食+维生素D3一次性腹腔注射60万U/kg构建动脉粥样硬化斑块模型,喂养10周。将造模成功的大鼠随机分为模型组、马齿苋多糖低剂量组(50 mg/kg,灌胃)、马齿苋多糖高剂量组(200 mg/kg,灌胃)、GW9662组(PPARγ抑制剂,1 mg/kg,尾静脉注射)、马齿苋多糖高剂量+GW9662组(200 mg/kg马齿苋多糖灌胃,1 mg/kg GW9662尾静脉注射),每组10只,按照各自剂量给药,持续4周。ELISA试剂盒检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C-反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平;HE染色与油红O染色观测大鼠腹主动脉病理变化及斑块形成情况;透射电镜观察大鼠腹主动脉超微结构;Western blot检测大鼠腹动脉中PPARγ、NF-κB p65蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组大鼠腹主动脉可见粥样斑块形成,血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、MCP-1水平、腹主动脉组织NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05),腹主动脉组织PPARγ蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,马齿苋多糖低、高剂量组大鼠腹主动脉粥样斑块减少,血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、MCP-1水平、腹主动脉组织NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.05),腹主动脉组织PPARγ蛋白表达升高(P<0.05);GW9662组大鼠腹主动脉粥样斑块增加,血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、MCP-1水平、腹主动脉组织NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05),腹主动脉组织PPARγ蛋白表达降低(P<0.05);与马齿苋多糖高剂量组相比,马齿苋多糖高剂量+GW9662组大鼠腹主动脉粥样斑块增加,血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、MCP-1水平、腹主动脉组织NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05),腹主动脉组织PPARγ蛋白表达降低(P<0.05)。结论马齿苋多糖可能通过调控PPARγ/NF-κB通路,抑制大鼠动脉粥样硬化斑块形成,进而缓解疾病进展。

百合总皂苷对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用及PPARγ/NF-κB通路的影响

目的探讨百合总皂苷对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤的保护作用及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/核因子(NF)-κB通路的影响。方法建立大鼠SAH模型,将造模成功的48只大鼠按随机数表法分为模型组、尼莫地平组(40 mg/kg)、百合总皂苷低、高剂量组(0.53、1.06 g/kg),每组12只,另取12只健康大鼠设为假手术组;尼莫地平组、百合总皂苷低、高剂量组大鼠于造模成功开始给予相应药物灌胃,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天灌胃1次,持续4 w后,测定大鼠神经功能评分、脑组织神经细胞凋亡率,观察脑组织形态学变化,测定脑组织PPARγ、NF-κB mRNA和蛋白表达水平。结果模型组SAH脑面积大,尼莫地平组和百合总皂苷各剂量组SAH脑面积明显减少;假手术组蛛网膜下腔脑组织结构正常;模型组蛛网膜下腔脑组织可见明显红细胞,炎症细胞浸润明显;尼莫地平组和百合总皂苷各剂量组蛛网膜下腔脑组织红细胞数目减少,炎症细胞浸润减少。与假手术组相比,模型组神经功能评分、脑组织PPARγmRNA和蛋白表达水平显著降低,脑组织神经细胞凋亡率、NF-κB mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,尼莫地平组、百合总皂苷低、高剂量组神经功能评分、脑组织PPARγmRNA和蛋白表达水平显著升高,脑组织神经细胞凋亡率、NF-κB mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);百合总皂苷高剂量组神经功能评分、脑组织PPARγmRNA和蛋白表达水平显著高于百合总皂苷低剂量组,脑组织神经细胞凋亡率、NF-κB mRNA和蛋白表达水平显著低于百合总皂苷低剂量组(P<0.05);尼莫地平组和百合总皂苷高剂量组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论百合总皂苷可减少SAH脑面积、脑组织炎症细胞浸润、神经细胞凋亡,对大鼠SAH后早期脑损伤具有保护作用;其机制可能与百合总皂苷促进SAH大鼠脑组织PPARγmRNA和蛋白表达,抑制NF-κB mRNA和蛋白表达有关。

欣力康提取物调控STAT3/NF-κB信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨欣力康提取物调控信号转导和转录激活因子(STAT)3/核因子(NF)-κB信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响。方法 体外培养膀胱癌细胞,设空白对照组和不同浓度的欣力康组。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测欣力康提取物对细胞增殖能力的影响,采用Transwell检测细胞的侵袭能力,采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用Western印迹检测细胞侵袭、迁移相关蛋白的影响;采用荧光酶报告基因法检测欣力康提取物对信号通路活性抑制率的影响。结果 与对照组相比,不同浓度的欣力康提取物组对膀胱癌细胞均有明显增殖抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,不同浓度欣力康组侵袭细胞数明显较低(P<0.05);与对照组相比,不同浓度欣力康组细胞迁移率明显较低(P<0.05);与对照组相比,欣力康提取物作用细胞后,侵袭和迁移相关蛋白表达明显较低(P<0.05);与对照组相比,不同浓度的欣力康组STAT3/NF-κB信号通路活性抑制率明显较高(P<0.05)。结论 欣力康提取物可以通过抑制STAT3/NF-κB信号通路来抑制膀胱癌增殖和迁移。

右美托咪定对结肠癌细胞p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探讨右美托咪定(Dex)对结肠癌细胞增殖、凋亡及p38有丝分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法将人结肠癌细胞Caco2随机分为对照组(常规培养)、Dex低剂量组(1μmol/L Dex培养液)、Dex高剂量组(3μmol/L Dex培养液)、激活剂组(5μg/mL p38MAPK/NF-κB信号激活剂LPS)、Dex高剂量+激活剂组(3μmol/L Dex培养液与5μg/mL LPS)。CCK-8法测定Caco2细胞增殖率,流式细胞仪检测Caco2细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法测定Caco2细胞中增殖相关蛋白(p53、ki-67),凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及p38MAPK/NF-κB通路蛋白的表达情况。结果与对照组相比,Dex低、高剂量组Caco2细胞凋亡率、Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2均显著升高(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2水平显著降低(P<0.05),激活剂组Caco2凋亡率、Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2均显著降低(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05)。与Dex高剂量组相比,Dex低剂量组、Dex高剂量+激活剂组Caco2细胞凋亡率、Bax水平及Bax/Bcl-2均显著降低(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论Dex可显著抑制人CRC细胞Caco2的增殖,并促进其凋亡,可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

二甲双胍抑制炎症相关AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路改善肾小管上皮细胞衰老的分子机制

目的:研究二甲双胍对D-半乳糖诱导肾小管上皮细胞(NRK-52E)衰老的保护作用及其对腺苷酸激活蛋白激酶/细胞沉默调节蛋白1/核转录因子-κB(AMPK/Sirt1/NF-κB)信号通路的影响。方法:Western blot检测不同浓度D-半乳糖(50,100,200 mmol·L^-1)和二甲双胍(10,30,60 mmol·L^-1)干预后细胞衰老标志物Klotho、P27和P16蛋白表达水平及AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路蛋白表达量;细胞计数试剂盒(CCK8)法检测NRK-52E细胞增殖活性。结果:与对照组比较,D-半乳糖干预能显著升高Klotho和Ac-NF-κB蛋白表达水平,显著降低P27、P16、p-AMPK和Sirt1蛋白表达水平(P<0.05),且D-半乳糖呈浓度依赖性。不同浓度二甲双胍干预后,与D-半乳糖组(100 mmol·L^-1)比较,Klotho和Ac-NF-κB蛋白表达水平显著降低,P27、P16、p-AMPK和Sirt1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且二甲双胍呈浓度依赖性,而细胞增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在D-半乳糖诱导的NRK-52E细胞衰老模型中,二甲双胍在体外具有抗衰老的作用,并且通过抑制炎症相关AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路而缓解衰老过程。

白细胞介素6受体抗体对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核因子-κB受体激活因子配体表达影响的实验研究

目的探讨白细胞介素6受体抗体（IL-6R—Ab）对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖与核因子-κB受体激活因子配体（RANKL）表达的影响。方法从膝关节镜术中获取RA患者滑膜组织，培养成纤维细胞。实验分为4组：甲氨蝶呤（MTX）组、IL-6R—Ab组、IL-6R—Ab联合MTX组、空白对照组。分别采用CCK-8检测IL-6R—Ab、MTX对RA滑膜成纤维细胞增殖活力影响；荧光定量（FQ）-PCR检测各组培养体系中的滑膜成纤维细胞RANKLmRNA的表达。结果CCK一8检测结果显示：与空白对照组比较，MTX组、IL-6R—Ab组及联合组成纤维细胞的生长受到抑制（F=54．64，P〈0．05）；IL-6R—Ab联合MTX组RA滑膜成纤维细胞的生长显著受到抑制（P〈0．01）；但MTX组与IL-6R—Ab组未见统计学差异。EHSA检测结果提示：与MTX组相比，IL-6R—Ab组的RANKL表达量降低（P〈0．05），IL-6R—Ab联合MTX组的RANKL表达量明显降低（P〈0．01）。FQ—PCR检测显示，MTX组、IL-6R—Ab组、联合组均能抑制RANKLmRNA的表达（F=32．17，P〈0．05）；与MTX组或IL-6R—Ab组相比，IL-6R—Ab联合MTX组RANKLmRNA的表达也受到抑制（P〈0．05）。结论IL-6R—Ab单独或联合MTX使用均能抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖活力，显著抑制RANKL的表达。本研究为IL一6R—Ab防治RA滑膜成纤维细胞所造成的关节破坏提供细胞与分子生物学方面的理论依据。

黄芩苷对人牙周膜细胞RANKL-OPG表达的影响及其作用机制

目的研究黄芩苷对人牙周膜细胞核因子-κB受体激活物配基和骨保护素(RANKL-OPG)表达的影响及其作用机制。方法首先构建转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βⅡR)靶向siRNA真核表达载体,转染正常人外周血T细胞,使T细胞表面的TGF-βⅡR基因沉默,继而将转染与未转染靶向性TGF-βⅡR基因沉默的T细胞和正常人牙周膜成纤维细胞置于加有黄芩苷和内毒素的培养基中,分为6组:①正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+转染siRNA1的T细胞+黄芩苷;②正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+转染siRNA1的T细胞;③正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+正常T细胞+黄芩苷;④正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+正常T细胞;⑤正常牙周膜成纤维细胞+黄芩苷;⑥正常牙周膜成纤维细胞。共培养48h,RT-PCR检测牙周膜细胞RANKL和OPG的表达,计算RANKL/OPG比值。结果①酶切鉴定正确的克隆测序结果与设计的目的序列完全一致;②转染siRNA1的T细胞组的TGF-βⅡRmRNA的表达被明显抑制;③RANKL/OPG的比值在各组间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建了TGF-βⅡR靶向siRNA真核表达载体并成功转染T细胞;黄芩苷可以降低牙周膜细胞表面RANKL/OPG比值;TGF-β的信号传导在黄芩苷影响牙周膜成纤维细胞表面的RANKL/OPG表达过程中起着重要作用;黄芩苷并非只通过TGF-β信号传导通路,而是亦通过其他通路对牙周膜成纤维细胞表面的RANKL/OPG进行调控。

独活寄生汤联合艾灸疗法治疗RA的效果及对患者血清MMP-3、RANKL、OPG水平的影响

目的:分析用独活寄生汤联合艾灸疗法治疗类风湿关节炎(RA)的效果及对患者血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体激活剂配体(RANKL)、基质金属蛋白酶-3(MMMP-3)水平的影响。方法:选择2020年1月至12月绵阳市中心医院收治的62例RA患者作为试验对象。按照随机数表法将其分为对照组(n=31)和观察组(n=31)。用独活寄生汤对对照组患者进行治疗,用独活寄生汤联合艾灸疗法对观察组患者进行治疗,然后比较两组患者的疗效、临床症状评分及血清OPG、RANKL、MMMP-3的水平。结果:观察组患者治疗的总有效率高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗3个月后,观察组患者的关节肿胀评分、关节晨僵评分和关节疼痛评分均低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗3个月后,观察组患者血清OPG的水平高于对照组患者,其血清RANKL和MMMP-3的水平均低于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:用独活寄生汤联合艾灸疗法治疗RA的效果显著,能有效减轻患者的临床症状,改善其血清MMP-3、RANKL、OPG的水平。

Act1对高糖诱导肾小管上皮细胞炎症反应及细胞外基质表达的调控作用

目的 研究核因子-κB激活剂1(Act1)对高糖诱导肾小管上皮细胞炎症反应及细胞外基质表达的调控作用。方法 培养肾小管上皮细胞MK2,设置对照组和高糖组,处理12 h、24 h、48 h、72 h后检测细胞中Act1的mRNA和蛋白表达水平;设置si-NC组(5.5 mmol/L葡萄糖培养基中转染NC siRNA)、si-NC+高糖组(30 mmol/L葡萄糖培养基中转染NC siRNA)、si-Act1+高糖组(30 mmol/L葡萄糖培养基中转染Act1 siRNA),48 h后检测细胞中Act1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、I型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)的mRNA和蛋白表达水平以及培养基中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果 高糖组处理12 h、24 h、48 h、72 h时细胞中Act1的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05);si-NC+高糖组处理48h时细胞中Act1、N-cadherin、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的mRNA和蛋白表达水平以及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量均高于si-NC组,细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均低于si-NC组(P<0.05);si-Act1+高糖组处理48h时细胞中Act1、N-cadherin、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的mRNA和蛋白表达水平以及培养基中TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量均低于si-NC+高糖组,细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均高于si-NC+高糖组(P<0.05)。结论 Act1表达增加对高糖诱导肾小管上皮细胞炎症反应激活和细胞外基质增多具有促进作用。

五味子乙素调节MAPK/NF-κB/AP-1信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元损伤的影响

目的探究五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)调节丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)/核转录因子-κB(Nuclear factor-kappa beta,NF-κB)/激活蛋白-1(Activator protein-1,AP-1)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元损伤的影响。方法选用SD大鼠144只,随机分为6组(24只/组):Sham组、Model组、Sch B低剂量组(10 mg/kg Sch B)、Sch B中剂量组(20 mg/kg Sch B)、Sch B高剂量组(40 mg/kg Sch B)、激活剂组[40 mg/kg Sch B+2 mg/kg茴香霉素(Anisomycin)];采用改良线栓法致大鼠大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),建立缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)模型;对各组大鼠进行Loeffler神经学评分以评估大鼠神经功能缺损程度;氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定大鼠脑梗死面积;称重法检测大鼠脑组织含水量;苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,HE)观察大鼠脑组织损伤;原位末端标记染色法(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL)观察大鼠神经细胞凋亡情况;二氯荧光素双醋酸盐(2',7'-Dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测大鼠脑组织活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;分别使用超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)试剂盒检测脑组织SOD活性与MDA水平;western blot检测脑组织中增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、凋亡相关蛋白[BCL-2关联X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Cysteine proteinase3,Caspase-3)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3Ⅱ)、卷曲螺旋肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Coiled-coil myosin-like BCL2 interacting protein,Beclin-1)]和MAPK/NF-κB/AP-1通路蛋白的表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠脑组织中SOD活性减弱、神经学评分、PCNA蛋白表达水平降低,病理损伤加重、脑梗死面积百分比、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、ROS,MDA水平、Bax,Caspase-3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1、磷酸化-P38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 Mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化-核转录因子-κB p65(p-Nuclear transcription factor kappa-B p65,p-NF-κB p65)/核转录因子-κB p65(Nuclear transcription factor kappa-B p65,NF-κB p65)、AP-1蛋白表达水平升高(P<0.05);与Model组比较,Sch B低、中、高剂量组大鼠SOD活性增强、神经学评分、PCNA蛋白表达水平升高,病理损伤减轻、脑梗死面积百分比、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、ROS,MDA水平、Bax,Caspase-3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-p38MAPK/p38MAPK,p-NF-κB p65/NF-κB p65,AP-1蛋白表达水平降低(P<0.05);与Sch B高剂量组比较,激活剂组大鼠脑组织中SOD活性减弱、神经学评分、PCNA蛋白表达水平降低,病理损伤加重、脑梗死面积百分比、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、ROS,MDA水平、Bax,Caspase-3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-p38MAPK/p38MAPK,p-NF-κB p65/NF-κB p65,AP-1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论Sch B通过抑制MAPK/NF-κB/AP-1信号通路,从而减轻缺血性脑卒中大鼠的神经元损伤。

宣肺止嗽方对COPD模型大鼠IL-17信号通路的影响

目的:探讨宣肺止嗽配方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠白细胞介素-17(IL-17)信号通路的影响。方法:将60只Wistar大鼠随机分为空白组10只和造模组50只,采用气管滴注脂多糖联合被动烟熏建立COPD模型大鼠。造模成功后采用随机数字表法分为模型组、地塞米松组、宣肺止嗽方高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g·kg^(-1)·d^(-1))。空白组和模型组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水灌胃,宣肺止嗽方各干预组灌胃给药,地塞米松组给予2.57×10^(-4)g·kg^(-1)·d^(-1)地塞米松灌胃,持续治疗28 d。肺功能检测仪进行肺功能指标水平测定;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-17、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组化(IHC)检测肺组织IL-17A、白细胞介素-17受体A(IL-17RA)、核转录因子-κB激活剂1(Act1)、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF6)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化阳性表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA的情况。结果:与空白组比较,模型组血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.05),肺功能流速指标和容量指标明显下降(P<0.05),时间指标和其他指标均明显升高(P<0.05),肺组织IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6mRNA和蛋白水平及下游NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-p38 MAPK阳性表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α含量均有不同程度的降低(P<0.05),肺功能指标均有不同程度的改善(P<0.05),宣肺止嗽方高、中剂量组IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6 mRNA和蛋白水平及下游NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-p38 MAPK阳性表达明显减弱(P<0.05)。结论:宣肺止嗽方能有效对抗COPD炎症反应,其机制可能与下调IL-17A、IL-17RA、Act1、TRAF6蛋白表达,进而抑制下游NF-κB、p38 MAPK信号通路,减少IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、IL-1β的释放,进而减轻气道炎症反应有关。