白藜芦醇通过激活去乙酰化酶1/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶信号通路影响牛脂肪细胞凋亡

本试验旨在研究植物提取物白藜芦醇(RES)对牛皮下脂肪细胞凋亡率以及去乙酰化酶1(SIRT1)/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子的mRNA和蛋白质表达量的影响。选取18月龄鲁西黄牛的皮下前体脂肪细胞,在细胞分化的第0天,更换为RES浓度分别为0(对照)、100、200和400μmol/L的培养液处理48 h,每组设3个重复。应用Hoechst33342染色检测细胞凋亡的形态学变化,流式细胞分析仪检测细胞凋亡率,荧光定量PCR(q PCR)和免疫印迹试验(Western-blot)分别检测SIRT1/AMPK信号通路上的关键因子SIRT1、A MPKα、叉头转录因子1(Fox O1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白质表达量,并利用油红O染色鉴定脂肪细胞。结果表明,与对照组相比:不同浓度RES处理后的牛皮下脂肪细胞凋亡率均极显著增高(P<0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3、Bax的mRNA表达量均显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3的蛋白质表达量均显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01);200和400μmol/L RES处理后,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),Bax的蛋白质表达量极显著提高(P<0.01),Bcl-2的蛋白质表达量极显著降低(P<0.01)。100μmol/L RES处理后时,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量以及Bcl-2、Bax的蛋白质表达量均与对照组差异不显著(P>0.05)。由此可见,RES通过激活SIRT1/AM PK信号通路,同时激活通路下游的Fox O1,促进了牛皮下脂肪细胞的凋亡,为通过营养调控技术降低牛皮下脂肪沉积提供了一定的理论基础。

宫颈癌组织中RACK1、IQGAP1表达及与患者临床病理特征和β-连环蛋白相关性

目的:分析宫颈癌组织中激活的白激酶C受体1(RACK1)、IQ序列三磷酸鸟苷酶激活蛋白(IQGAPl)表达及与临床病理特征和β-连环蛋白(β-catenin)的相关性。方法:收集2018年1月-2020年12月本院行宫颈癌手术治疗的患者106例临床资料,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫组化技术检测RACK1、IQGAP1、β-catenin mRNA和蛋白表达,分析宫颈癌组织中RACK1、IQGAP1表达及与临床病理特征和β-catenin的相关性。结果:宫颈癌组织中RACK1 mRNA的相对表达量(0.27±0.11)低于癌旁组织(0.75±0.19),IQGAP1 mRNA(0.65±0.18)、β-catenin mRNA(0.61±0.21)高于癌旁组织(0.22±0.13、0.32±0.17),RACK1蛋白阳性率(18.9%)低于癌旁组织(63.2%),IQGAP1(76.4%)、β-catenin(68.9%)蛋白阳性率高于癌旁组织(28.3%、31.1%)(均P<0.05)。RACK1在高分化、TNM分期为I期、无淋巴结转移的宫颈癌组织中阳性率高于中低分化、TNM分期为II-III期、有淋巴结转移患者的组织,IQGAP1在中低分化、TNM分期为II-III期的宫颈癌组织中阳性率高于高分化、TNM分期为I期组织(均P<0.05)。宫颈癌中RACK1表达与β-catenin呈负相关(r=-0.405,P<0.05),IQGAP1表达与β-catenin呈显著正相关(r=0.346,P<0.05)。结论:宫颈癌组织RACK1低表达,IQGAP1高表达;RACK1蛋白表达异常可能与患者宫颈癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移及β-catenin表达有关,IQGAP1蛋白表达异常可能与分化程度、TNM分期及β-catenin表达有关。

白介素1-β对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用及调节机制(英文)

目的探讨细胞因子白介素-1β(IL-1β)对人肺腺癌细胞株A549细胞环氧合酶2(COX-2)表达的影响及调节机制。方法A549细胞培养达80%融合后,用不同浓度的IL-1β(0、0.1、1、5和10ng/mL)干预或用5ng/mLIL-1β干预不同时间(0、3、6、9、12和24h)观察白介素-1β(IL-1β)对A549细胞COX-2表达的影响;用5ng/mLIL-1β与有丝分裂原激活的细胞外调节激酶(ERK)抑制剂PD098059、P38有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580、蛋白激酶C(PKC)抑制剂H-7共同干预A549细胞观察IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的信号传导途径;用COX-2系列报告基因质粒及对照质粒转染A549细胞后予以IL-1β干预,以不加IL-1β干预的细胞为对照组观察IL-1β对COX-2启动子的影响;Westernblot检测COX-2蛋白表达,RT-PCR检测COX-2mRNA表达。COX-2报告基因活性应用荧光素酶活性分析法测定。结果A549细胞COX-2蛋白表达和mRNA表达呈IL-1β浓度依赖性表达增加,干预9h表达达高峰;SB203580、H-7可明显抑制IL-1β诱导A549细胞COX-2表达,PD098059对IL-1β诱导A549细胞COX-2表达无影响;IL-1β对COX-2报告基因无影响。结论PKC途径和P38MAPK途径参与IL-1β诱导A549细胞COX-2蛋白表达。

激活性蛋白激酶C受体1表达的降低对小鼠认知功能的影响

目的探讨降低激活性蛋白激酶C受体1(RACK1)的表达是否能影响小鼠的认知功能。方法将ICR小鼠水迷宫训练5d后随机分为空质粒对照组(CON组)和干扰组(SiRNA组)。测试两组水迷宫的潜伏期。两组分别进行侧脑室注射RACK1干扰质粒和空质粒,7d后水迷宫测试潜伏期。结果脑室注射前两组潜伏期无统计学差异(P=0.29)。RACK1干扰后潜伏期SiRNA组明显较CON组延长(P<0.05)。SiRNA组在干扰前后潜伏期对比也出现统计学差异(P<0.05)。干扰RACK1后,经RT-PCR测定,SiRNA组RACK1mRNA表达明显降低(P=0.032)。结论本研究证明RACK1的表达降低能够影响小鼠的认知功能。

敲低RACK1基因抑制C2C12细胞中MyoG和MHC基因表达

本实验旨在研究RNA干扰(RNAi)RACK1基因对C2C12成肌细胞中肌分化标志基因MHC和MyoG表达的影响。将人工合成的靶向RAKC1基因的3条si RNA(1,2,3)转染C2C12细胞,用RT-qPCR方法检测并筛选干扰效率最高的1条siRNA。将筛选出的si RNA转染C2C12成肌细胞并诱导细胞分化,通过RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法在mRNA及蛋白水平检测RACK1基因沉默后对MHC和MyoG表达的影响。此外,Western blot方法检测RACK1基因沉默后对PI3K/Akt和Erk/MAPK通路激活的影响。结果表明:RACK1-si RNA-2干扰效率最高,转染48 h后抑制率可达70%。随后,C2C12细胞转染si RNA-2,诱导分化48h后RTqPCR表明,MHC和MyoG的m RNA表达均显著性下调(P<0.05);诱导分化72 h后,Western blot和免疫荧光结果表明MHC和MyoG的蛋白表达明显低于对照组,但AKT和Erk磷酸化水平未见明显变化。上述结果表明,干扰RACK1能显著抑制MHC和MyoG的表达,提示RACK1正向调控C2C12成肌细胞的分化。

参附强心合剂对心衰大鼠心肌能量代谢AMPK-PGC-1α通路的影响

目的探讨参附强心合剂对心衰大鼠心肌能量代谢单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)-过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)通路的调控及其作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法制作大鼠心衰模型,经4周造模成功后将造模组大鼠随机分为:模型组,参附强心合剂高、中、低剂量组,曲美他嗪组,予药物溶液灌胃4周后,取腹主动脉血及左心室组织,用ELISA法测血清中血清B型脑尿钠肽(BNP)、乳酸脱氢酶(LDH)、游离脂肪酸(FFA)含量,Western blot法对心室组织中AMPK、p-AMPK、PGC-1α进行半定量分析。结果 (1)各中药组血清BNP、LDH、FFA较模型组显著降低(P<0.05)。其中,中药高剂量组BNP、FFA水平与曲美他嗪组无显著差异[(265.74±19.89)ng/mL比(240.62±21.40)ng/mL,(482.64±23.89)ng/mL比(463.09±25.95)ng/mL(P>0.05)];中药高、中剂量组LDH水平与曲美他嗪组相当(295.25±29.34)ng/mL、(317.83±25.99)ng/mL比(283.09±31.41)ng/mL(P>0.05);(2)各组大鼠心肌组织中AMPK蛋白表达水平未见显著差异(P>0.05);中药高剂量组p-AMPK蛋白表达与曲美他嗪组均明显增加(P<0.01),两者之间未见明显差异[(1.128±0.085)ng/mL比(1.180±0.208)ng/mL(P>0.05)];各用药组PGC-1α蛋白表达均明显增加(P<0.05),但中药各剂量组PGC-1α蛋白表达与曲美他嗪组之间无显著差异(P>0.05)。结论参附强心合剂可以降低心衰大鼠的血清BNP、FFA、LDH水平从而减轻心衰。参附强心合剂可能通过激活AMPK-PGC-1α信号通路,提高p-AMPK、PGC-1α的表达以调节脂肪酸氧化代谢及葡萄糖转运,从而改善心衰大鼠心肌能量代谢,从而起到治疗心衰的作用。

AMPK信号通路在ECG诱导人鼻咽癌细胞株C666-1凋亡中的作用研究

目的研究AMPK信号通路在ECG诱导人鼻咽癌细胞株C666-1凋亡中的作用。方法人鼻咽癌C666-1细胞给予AMPK特异性抑制剂compound C或不同浓度ECG处理后,分别采用CCK-8法和TUNEL染色法检测细胞增殖情况和凋亡;采用Western blotting法检测AMPK、p70S6K、S6等相关蛋白磷酸化水平。结果 ECG可剂量依赖性地增加C666-1细胞中AMPK的磷酸化水平并抑制p70S6K和S6的磷酸化;给予compound C预处理之后可显著逆转ECG对C666-1细胞增殖和凋亡的影响,并逆转ECG对AMPK、p70S6K和S6等磷酸化水平的影响。结论ECG通过调控AMPK依赖的通路抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导其凋亡。

慢病毒介导RNAi沉默IL-1 Ⅰ型受体在大鼠骨关节炎MAPK信号转导中的作用

目的观察慢病毒介导的RNAi沉默IL-1Ⅰ型受体对实验性大鼠膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)中的丝裂素原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径的影响,探讨IL-1和MAPK在OA中的作用。方法40只SD大鼠随机分为A～D4组,每组10只。A～C组行单侧前交叉韧带和内侧半月板前1/3切除术,分别于术后第7和9天,A组关节腔中注射慢病毒介导IL-1Ⅰ型受体有效RNA干扰片段,B组注射慢病毒介导IL-1Ⅰ型受体无效RNA干扰片段,C组单纯注射生理盐水。D组为正常动物不做处理。术后4周处死动物,对关节软骨的状况进行评分。取膝关节软骨组织,用Western blot方法检测软骨组织中p38、ERK1/2和JNK1/2的蛋白质表达水平。结果大体观察显示:A组软骨退行性变显著轻于B、C组(P<0.05),但高于D组(P<0.05)。Western blot显示,A组p38蛋白质表达水平显著低于B、C组(P<0.05),与D组没有显著性差异(P>0.05)。A组ERK1/2和JNK1/2的表达显著低于B、C组(P<0.05),但要显著高于D组(P<0.05)。结论慢病毒介导RNA干扰沉默IL-1Ⅰ型受体能抑制MAPK的表达,特别是对其中的p38蛋白质抑制更为明显。

RACK1对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨激活性蛋白激酶C受体1(RACK1)对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的机制。方法收集2020年12月-2021年12月新疆医科大学第一附属医院24例患者的宫颈鳞癌(CSCC)组织及24例无宫颈病变的正常宫颈(NC)组织,采用qRT-PCR检测CSCC和NC组织中RACK1 mRNA的表达水平,并检测CSCC组织中增殖和凋亡相关基因c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平;采用Spearman秩相关分析CSCC组织中RACK1 mRNA与增殖和凋亡相关基因mRNA表达的相关性。采用qRT-PCR及Western blotting检测RACK1在宫颈癌细胞C33a、SiHa和正常宫颈内皮细胞H8中的表达情况。通过慢病毒转染C33a、SiHa细胞以沉默RACK1的表达,根据不同处理分为正常对照组(NC)、空载组(sh-NON)和沉默组1(shRACK1-1)、沉默组2(shRACK1-2),并验证细胞转染效率,采用MTT法及平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,qRT-PCR检测RACK1沉默后各组细胞中c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平,Western blotting检测RACK1沉默后各组细胞中c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2以及磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、JAK2、磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(p-STAT3)、STAT3蛋白的表达水平。结果CSCC组织RACK1 mRNA表达水平明显高于NC组织(P<0.001)。Spearman秩相关分析结果显示,宫颈癌组织中RACK1 mRNA的表达水平与caspase-3(r=–0.679,P<0.001)、caspase-9(r=–0.735,P<0.001)、Bax(r=–0.691,P<0.001)mRNA表达水平呈明显负相关,而与c-myc(r=0.713,P<0.001)、Bcl-2(r=0.846,P<0.001)mRNA表达水平呈明显正相关。qRT-PCR与Western blotting检测结果显示,与H8细胞比较,C33a、SiHa细胞中RACK1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.001)。RACK1沉默后,与sh-NON组及NC组比较,shRACK1-1组及shRACK1-2组RACK1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。与sh-NON组比较,shRACK1-1组及shRACK1-2组细胞增殖和集落形成能力也明显降低(P<0.001),而细胞凋亡率明显增高(P<0.001)。此外,与sh-NON组比较,shRACK1-1组及shRACK1-2组caspase-3、caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平明显增高,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显增高,而c-myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.001或P<0.01)。结论RACK1在宫颈癌组织及细胞中呈现高表达,靶向沉默RACK1基因可有效降低增殖相关蛋白c-myc与抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,但显著增加宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达,可能与激活JAK2/STAT3信号通路有关。

益气活血中药对急性心肌梗死后大鼠心肌线粒体生物合成相关蛋白的影响

目的观察益气活血中药西洋参茎叶总皂苷(PQS)和精制血府胶囊配伍对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌AMPK活化的线粒体生物合成相关蛋白的影响。方法 SD雄性大鼠60只,高脂饲料喂养28d,4%水合氯醛麻醉后,结扎冠状动脉前降支造成AMI模型,成活大鼠共26只,随机分为模型组和益气活血组,每组13只;并设假手术组(只穿刺,不结扎)13只。术后2d开始灌胃药物,益气活血药液中包含了PQS和精制血府浸渍膏,药物灌胃剂量为PQS 162mg/(kg·d),精制血府3.6mg/(kg·d),模型组和假手术组大鼠灌胃等量的蒸馏水。灌胃28d后,将大鼠麻醉,行超声心动图检测,测定大鼠左室收缩末内径(LVDs)、左室舒张末内径(LVDd)、射血分数(EF)。完成后,打开大鼠胸腔,取出心脏,进行心肌病理组织学检测及心肌组织内AMP激活蛋白激酶α2(AMPKα2)、过氧化物酶体增生物激活的受体γ共激活因子1α(PGC1α)基因和蛋白的测定。结果心脏超声结果显示:与假手术组相比,模型组大鼠LVDs、LVDd值显著增大(P<0.05),EF值显著下降(P<0.05);与模型组相比,益气活血组大鼠LVDs、LVDd值均降低(P<0.05),EF值升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示:与假手术相比,模型组大鼠心肌组织内AMPKα2、PGC1α基因表达下调(P<0.05);与模型组相比,益气活血组心肌组织内AMPKα2、PGC1α基因上调(P<0.05)。Western结果:与假手术相比,模型组大鼠心肌组织内AMPKα2、PGC1α蛋白表达下调(P<0.05);与模型组相比,益气活血药物组心肌组织内AMPKα2、PGC1α蛋白表达上调(P<0.05)。结论益气活血中药可改善AMI后左室功能,抑制AMI后左室重构,该作用可能与促进线粒体生物合成蛋白(AMPKα2、PGC1α)的表达有关。

RACK1、HSF1、E-cadherin在宫颈癌中的表达及与临床特征、预后的关系

目的探讨激活的激酶C受体1(RACK1)、热休克转录因子1(HSF1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)在宫颈癌中的表达及其与临床特征、预后的关系。方法选取68例宫颈癌患者、28例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者、23例因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的宫颈癌组织、CIN组织及正常宫颈组织。比较各组RACK1、HSF1、E-cadherin阳性表达率,并分析RACK1、HSF1、E-cadherin阳性表达与宫颈癌临床特征的关系,及其对预后的影响。结果宫颈癌组织中RACK1、HSF1的阳性表达率均高于CIN组织及正常宫颈组织,E-cadherin的阳性表达率分别低于CIN组织及正常宫颈组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。临床分期为Ⅲ期、深肌层浸润、低分化、有淋巴结转移的宫颈癌患者的宫颈癌组织中RACK1、HSF1阳性表达率分别高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、浅肌层浸润、中~高分化、无淋巴结转移宫颈癌患者的宫颈癌组织,E-cadherin阳性表达率分别低于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、浅肌层浸润、中~高分化、无淋巴结转移宫颈癌患者的宫颈癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox比例风险模型显示,年龄>50岁、腺癌、临床分期为Ⅲ期、深肌层浸润、低分化、有淋巴结转移、RACK1阳性表达、HSF1阳性表达均是影响宫颈癌预后的危险因素,E-cadherin阳性表达是宫颈癌预后的保护因素。结论RACK1、HSF1、E-cadherin可作为宫颈癌患者预后的参考指标。

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13通过单磷酸腺苷激活的蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶点复合物通路对高糖诱导的大鼠原代肝窦内皮细胞自噬功能影响的研究

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13(CTRP13)通过单磷酸腺苷激活的蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶点复合物(AMPK/mTOR)通路对高糖诱导的大鼠原代肝窦内皮细胞(rLSECs)自噬功能的影响。方法分离、鉴定、培养rLSECs,分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+LV-CTRP13组、HG+慢病毒空载体(LV-Con)组(HG+LV-Con),构建CTRP13慢病毒过表达载体(LV-CTRP13)及慢病毒空载体(LV-Con)并转染r LSECs,分别使用AMPK抑制剂Compound C、mTOR抑制剂Torin1、自噬抑制剂3MA干预,分为HG+LV-Con+Compound C组、HG+LV-CTRP13+Compound C组、HG+LV-Con+Torin1组、HG+LV-CTRP13+Torin1组、HG+LV-Con+3MA、HG+LV-CTRP13+3MA组。透射电子显微镜观察自噬小体,qRT-PCR、Western blot法检测各组CTRP13、自噬相关蛋白Beclin1、人微管相关蛋白轻链3II(LC3II)、人质膜膜泡关联蛋白(PLVAP)及p-AMPK、p-mTOR mRNA和蛋白表达。结果与NC组比较,HG、HG+LV-CTRP13组自噬小体数量降低(P<0.05)。与HG组比较,HG+LV-CTRP13组自噬小体数量升高(P<0.05)。NC、HG+LV-CTRP13组CTRP13 mRNA和蛋白表达高于HG、HG+LV-Con组(P<0.05)。HG+LV-CTRP13组Beclin1、LC3II、p-AMPK、AMPK mRNA表达,Beclin1、LC3II/LC3I蛋白表达高于HG、HG+LV-Con组(P<0.05),PLVAP、p-mTOR、mTOR mRNA表达,PLVAP蛋白表达低于HG、HG+LV-Con组(P<0.05)。与HG+LV-CTRP13比较,HG+LV-CTRP13+Compound C组p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05),CTRP13、Beclin1、LC3II/LC3I蛋白表达降低(P<0.05),HG+LV-CTRP13+Torin1组p-AMPK、Beclin1、LC3II/LC3I蛋白表达升高(P<0.05),CTRP13、p-mTOR蛋白表达降低(P<0.05),HG+LV-CTRP13+3MA组p-AMPK、p-mTOR、LC3II/LC3I蛋白表达升高(P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达降低(P<0.05)。结论CTRP13过表达通过激活AMPK/mTOR信号通路对rLSECs自噬功能发挥保护作用,延缓肝窦毛细血管化。

白藜芦醇上调阿尔茨海默病模型大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸受体1及蛋白激酶C基因和蛋白的表达

目的探讨白藜芦醇对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)模型大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR1)及蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)基因和蛋白表达的影响。方法将60只Wistar雌性大鼠随机分为6组,分别为:假手术对照组,AD模型对照组,白藜芦醇低、中、高剂量(20、40和80 mg/kg)干预组,0.8 mg/kg戊酸雌二醇阳性对照组。采用去卵巢合并腹腔注射100 mg/kg D-半乳糖制备AD大鼠模型,同时白藜芦醇灌胃干预12周。干预后用实时荧光定量PCR检测大鼠海马组织NMDAR1和PKC基因的表达,用Western Blot检测NMDAR1总蛋白、磷酸化蛋白和PKC蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组NMDAR1及PKC基因和蛋白的表达明显下调(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇各剂量组NMDAR1和PKC基因的表达显著上调(P<0.05),以80 mg/kg组最为明显(P<0.01),对NMDAR1基因上调程度与戊酸雌二醇相当,40和80 mg/kg干预组p-NMDAR1/NMDAR1比值明显增加(P<0.05或P<0.01),PKC蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),与戊酸雌二醇效果相当。结论白藜芦醇上调NMDAR1及PKC基因的表达并且促进NMDAR1蛋白磷酸化和PKC蛋白的表达,可能是其改善AD模型大鼠记忆的机制之一。

PKCβ1和MEK1/2在子宫内膜异位症组织及间质细胞中的表达及意义

目的探讨蛋白激酶Cβ1(PKCβ1)和丝裂原激活的蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)在子宫内膜异位症(EMs)组织及间质细胞中的表达及其意义。方法收集因EMs行手术治疗于术中或术后经病理科证实为子宫内膜异位症的患者60例,分为EMs在位内膜组(30例)和EMs异位内膜组(30例);同期因良性卵巢肿瘤经手术治疗的患者30例作为对照组(正常子宫内膜组)。采用免疫组化法检测3组组织中PKCβ1,MEK1/2的表达;另选取EMs组在位内膜及正常组内膜各10例提取原代子宫内膜间质细胞分离培养,采用Western-blot,检测EMs组及正常组子宫内膜间质细胞中PKCβ1、MEK1/2、MMP9、PCNA蛋白的表达情况。结果EMs在位及异位内膜组中PKCβ1,MEK1/2的表达均高于正常子宫内膜组(P<0.05),且异位内膜组中PKCβ1,MEK1/2的表达高于在位内膜组(P<0.05)。EMs在位内膜组间质细胞中PKCβ1、MEK1/2蛋白的表达高于正常组间质细胞(P<0.05)。MMP9和PCNA是与细胞的侵袭和增殖性密切相关的蛋白,EMs在位内膜组间质细胞中MMP9、PCNA蛋白的表达高于正常组间质细胞(P<0.05),提示EMs间质细胞的侵袭和增殖性增高。相关分析发现PKCβ1、MEK1/2与MMP9、PCNA的表达水平呈正相关关系。结论PKCβ1、MEK1/2在子宫内膜异位症患者在位、异位内膜组织及在位内膜间质细胞中呈高表达,并与MMP9、PCNA的表达呈正相关,提示PKCβ1、MEK1/2可能在子宫内膜异位症间质细胞的侵袭、增殖中发挥作用。

运动诱导骨骼肌线粒体生成中沉默信息调节因子1的作用

背景:沉默信息调节因子 1 是新近受到体育科学领域关注的能量代谢调节因子,在运动骨骼肌线粒体生成中与其他信号分子一起发挥作用。目的:综述沉默信息调节因子 1 在运动诱导骨骼肌线粒体生物合成中的作用及机制。方法:应用计算机检索 PubMed 和 Highwire 数据库 2000 年 1 月至 2013 年 1 月有关运动、沉默信息调节因子 1、骨骼肌线粒体生物合成的文献,检索词为 SIRT1,AMPK,PGC-1α,mitochondrial biogenesis,skeletalmuscle, exercise,限定文章语言为 English。对资料进行初审,选取沉默信息调节因子 1 与运动诱导骨骼肌线粒体生物合成有关的文献,排除重复研究。结果与结论:共收集相关文献 165 篇,排除重复研究,纳入 62 篇。沉默信息调节因子 1 作为一种 NAD+依赖的去乙酰化酶,在运动中被激活,通过上调过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子表达而诱导骨骼肌线粒体生物合成,其分子机制涉及一磷酸腺苷激活的蛋白激酶、低氧诱导因子 2α等信号分子。但近年来的一些研究对沉默信息调节因子 1 在骨骼肌线粒体生物合成中的作用提出了质疑,认为其并非为运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成所必需。沉默信息调节因子 1 在运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成中发挥重要调控作用,但采用蛋白和活性等不同检测方法,在实验结果上可能会造成较大差异。

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法将HBZY-1细胞分为5组:正常组、LPS组(100 ng·m L^(-1)LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^(-1)LPS+0.5μmol·L^(-1)雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)川陈皮素+0.5μmol·L^(-1)雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot法检测AMPK/NLRP3信号通路蛋白水平。结果与正常组比较,LPS组CAT、SOD、GSH水平、细胞OD值以及AMPK蛋白水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及NLRP3蛋白水平明显升高(P<0.05)。与LPS组比较,川陈皮素组CAT、SOD、GSH水平、OD值以及AMPK蛋白水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及NLRP3蛋白水平明显下降(P<0.05);而雷帕霉素组以上指标均呈现与川陈皮素组相反的趋势(P<0.05)。与川陈皮素组比较,川陈皮素+雷帕霉素组以上指标均呈现与川陈皮素组相反的趋势(P<0.05)。结论川陈皮素可能通过上调AMPK/NLRP3信号通路减轻LPS诱导的肾小球系膜细胞细胞炎性损伤。下调AMPK/NLRP3信号通路可消除川陈皮素对LPS诱导的肾小球系膜细胞细胞炎性损伤的改善作用。

有氧运动抑制心力衰竭大鼠心脏脂质沉积:AMPK-PPARα信号通路的作用

目的:观察8周有氧运动对心力衰竭大鼠心脏脂质沉积和心功能的影响,探讨AMP激活的蛋白激酶(AMPK)—过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)信号通路在其中的作用机制。方法:结扎大鼠冠状动脉建立心梗后心衰模型,术后4周随机分为假手术安静组(Sham组)、心梗安静组(MI-Sed组)和心梗运动组(MI-Ex组)。MI-Ex组进行为期8周的跑台运动,Sham组和MI-Sed组保持安静状态。实验结束后,左心室导管法测定血流动力学参数包括左心室收缩期压力(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax)和左室压力最大下降速率(-dp/dtmax);比色法测定心肌和血浆游离脂肪酸(FFA)水平;氧化酶法测定心肌甘油三酯含量;实时荧光定量PCR检测心肌PPARα和肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)mRNA水平;Western blot法检测心肌总AMPKα、磷酸化的AMPKα(p-AMPKα)、PPARα和CPT-1蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,MI-Sed组LVSP、±dp/dtmax显著性下降(均为P<0.01),LVEDP则显著性升高(P<0.01);血浆FFA、心肌FFA和甘油三酯水平升高(均为P<0.01);心肌PPARα和CPT-1 mRNA及蛋白显著降低(均为P<0.01),p-AMPKα蛋白显著升高(P<0.05)。与MI-Sed组比较,MI-Ex组LVSP、±dp/dtmax显著性升高(均为P<0.01),LVEDP则显著性下降(P<0.01);血浆FFA、心肌FFA和甘油三酯水平显著降低(均为P<0.01);心肌PPARα和CPT-1 mRNA和蛋白以及p-AMPKα蛋白水平均显著性升高(均为P<0.01)。结论:长期有氧运动活化AMPK-PPARα信号通路,上调CPT-1表达,促进心肌对FFA的氧化利用,从而减轻HF后心脏脂质过度沉积、改善脂毒性心脏异常并提高心功能。

电针抑制脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡机制研究

目的:从肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/激活性蛋白激酶C受体1(RACK1)分子开关探讨电针干预脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠细胞凋亡机制。方法:64只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、依达拉奉组、电针组,每组16只。线栓法制备CIRI大鼠模型后,依达拉奉组、电针组每12 h分别予依达拉奉溶液给药和“内关”“百会”穴电针干预,共5次。Longa法评价大鼠神经功能缺损症状;TTC染色法观察大鼠脑组织缺血损伤情况;TUNEL染色法检测细胞凋亡指数;Western blotting法检测RACK1、p-IRE1α、CHOP蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、凋亡指数、CHOP表达升高,RACK1表达降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,治疗后电针组、依达拉奉组大鼠神经功能缺损评分、凋亡指数降低,电针组大鼠RACK1、p-IRE1α表达升高,CHOP表达下降,差异有统计学意义(均P<0.01)。治疗后与模型组比较,依达拉奉组大鼠p-IRE1α表达升高,CHOP表达下降,差异有统计学意义(均P<0.01)。依达拉奉组与电针组大鼠神经功能缺损评分、细胞凋亡指数比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。电针组大鼠RACK1表达高于依达拉奉组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:电针可抑制CIRI大鼠脑组织内细胞凋亡,减轻脑损伤,其机制可能与针刺启动IRE1α/RACK1分子开关相关。

RACK1基因过表达对子宫颈癌细胞增殖的影响

目的探讨激活的蛋白激酶C受体1 (RACK1)基因过表达对子宫颈癌细胞增殖的影响,为临床治疗提供参考。方法选取子宫颈癌患者胚肾上皮细胞293T、宫颈癌细胞株HeLa,并购置宫颈癌细胞株SiHa与Caski,分别对其予以细胞培养、包装蛋白激酶C受体1 (RACK1)慢病毒、转染等处理,运用流式细胞仪细胞周期进行检测,并运用蛋白印迹法对相关蛋白的表达进行测量,分别观察流式细胞仪与蛋白印迹法的检测结果。结果三种细胞株的中S期细胞所占比例明显较高,差异有统计学意义(P<0.05);但G1期与G2/M期与阴性对照比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HeLa、SiHa与Caski的RACK1基因过表达的稳转宫颈癌细胞株中的有关蛋白cyclin D1、β-catenin、AKT、p-AKT表达高于基因未过表达,p21蛋白表达明显低于基因未过表达,但p53蛋白表达与基因未过表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RACK1基因的过表达能够在较大程度上加强子宫颈癌细胞增殖,对于子宫癌的发生与发展具有较大的促进作用。

足细胞能量代谢调节因子与糖尿病肾病

足细胞结构和功能异常是糖尿病肾病(DN)发生蛋白尿并不断进展的重要原因。足细胞主要通过糖酵解供能,而线粒体稳态对于足细胞正常发挥生物学功能极为重要。研究发现,糖尿病时足细胞胰岛素敏感性下降,线粒体功能障碍进而导致足细胞能量利用障碍和足细胞损伤。AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRTl)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)共激活因子1α(PGC-1α)通路是足细胞能量代谢的重要调节因素,维持线粒体稳态并抑制氧化应激,对糖尿病足细胞发挥保护作用。本文将简介足细胞能量代谢相关调节因子对DN足细胞保护作用和DN相关的治疗策略。