硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对胎儿有核红细胞富集效果的比较

目的分析硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对胎儿有核红细胞(FNRBC)的富集效果。方法选取2020年1月—2022年12月拟于医院产科门诊进行产前筛查的112例孕妇为研究对象,所有孕妇均采集外周肘静脉血10 mL,分别通过硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法对血液样本中FNRBC进行富集。比较两种方案富集前后细胞形态及细胞计数情况,记录两组方案对FNRBC的富集时间及富集所得FNRBC的无菌试验结果。结果硅芯片纳米微流体技术对FNRBC的富集时间长于磁激活细胞分选法(P<0.05);两种方案的无菌试验阳性发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与磁激活细胞分选法相比,硅芯片纳米微流体技术进行FNRBC富集时所得的总细胞量较少,FNRBC量较多,FNRBC比例较高(P<0.05)。结论硅芯片纳米微流体技术与磁激活细胞分选法进行FNRBC富集所得样本受污染风险均较低,与磁激活细胞分选法相比,硅芯片纳米微流体技术去除混杂细胞的能力较强,且获得的FNRBC数量较多,对FNRBC的富集效果较好,但所需时间较长。

基于荧光激活细胞分选技术的超高通量酶活性筛选方法及其应用

基于荧光激活细胞分选(FACS)技术的超高通量酶活性筛选方法是新出现的一类高通量筛选技术.它利用流式细胞仪高灵敏度、高通量的特点,能以极高的速度(>108/天)对大容量酶基因文库进行筛选.FACS筛选技术的出现突破了常规筛选方法低效、耗时、费力等瓶颈问题,极大地提升了人类对大容量基因文库的探索能力,因此在新酶基因筛选、酶活性检测、酶定向进化等领域有广泛的应用潜力.综述了FACS超高通量酶活性筛选方法的最新研究进展,着重介绍了其在酶定向进化中的应用.

磁激活细胞分离术检测胃癌循环血微转移的研究

目的：用磁激活细胞分离术（MACS）检测胃癌患者外周血和门静脉血中癌细胞，探讨胃癌血液徽转移情况。方法：术前抽取23例胃癌患者和7例对照者的外周血，术中取其门静脉血，经MACS富集、分离．用流式细胞仪检测癌细胞含量。结果：未经MACS的血标本中较少发现癌细胞，富集后的标本癌细胞阳性率在胃癌组与对照组（外周血：16／23 VS 1／7，门静脉血：19／23 VS 1／7，P〈0.01）以及pTNM Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期患者（外周血：0．19％VS 0．48%，P〈0.01，门静脉血0．42％ VS 1．89％，P〈0．001）差别均有统计学意义。胃癌组门静脉血中游离癌细胞阳性率高于外周血（1．81％ VS 0．42％，P〈0．01）。结论：MACS能有效地富集血中癌细胞，提高癌细胞检出率：循环血癌细胞数量与胃癌病理分期密切相关。MACS检测血中癌细胞对判断肿瘤转移及选择化疗合理途径、时机、监测疗效有指导意义。

磁性激活细胞分选技术分离胃癌患者外周血、门静脉血癌细胞及临床初步应用

目的 建立一种分离血液中肿瘤细胞的磁性激活细胞分选 (MACS)技术并评价其临床价值。方法 采用胃肿瘤细胞膜表位的MG7、CEA、QY和MMP9单抗分别与溴化氰活化的Sepharose 4B磁珠交联 ,从胃癌患者外周血、门静脉血中分离出肿瘤细胞。结果 应用MACS技术从外周血中分离出肿瘤细胞的阳性率为4 9.15 % (2 9/5 9) ,从门静脉血中分离出肿瘤细胞的阳性率为 90 .32 % (2 8/31) ,两者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。用MACS技术从外周血、门静脉血中分离出肿瘤细胞的阳性率与患者临床分期无关。结论 MACS技术是一种有效分离肿瘤细胞的可靠方法 ,可从胃癌患者外周血中分离出少量肿瘤细胞 ,有助于进一步探讨恶性肿瘤的发生、发展、浸润转移。

荧光激活细胞分选转基因标记斑马鱼神经元

对常规试验方法加以改进,使之适用于斑马鱼脑部荧光标记神经细胞的分选。以lhx5∶Kaede转基因株系为例,利用转基因斑马鱼脑部制备单细胞悬液进行荧光激活细胞分选(Fluorescence-activated cell sorting,FACS),获得lhx5荧光标记细胞。提取总RNA后进行基因芯片分析从而了解lhx5标记神经元的基因表达特性。结果显示,通过本流程可成功制备斑马鱼幼鱼脑部单细胞悬液,lhx5∶Kaede平均荧光阳性率为6%。提取RNA质量及总量均能满足基因芯片要求。基因芯片结果显示lhx5及其他标记分子的表达均得到了显著富集。有效地分离斑马鱼幼鱼中枢神经系统荧光标记细胞,可用于特定细胞群的基因表达谱分析。

荧光激活细胞分离技术在角膜缘干细胞研究中的应用

目的探讨荧光激活细胞分离技术(FACS)在体外培养的兔角膜缘上皮细胞生物学特性研究中的应用。方法收集新西兰白兔的角膜缘组织进行组织块培养。采用FACS分离出体外培养的兔角膜缘上皮细胞中的侧群(SP)细胞和非SP细胞。用2%锥虫蓝染色法对分离出的SP细胞进行克隆形成率(CFE)检测以评估SP细胞的活性,用免疫组织化学染色检测K3/12和ABCG2蛋白在SP细胞和非SP细胞中的表达。结果SP细胞在体外培养的兔角膜缘上皮细胞中占(0.22±0.09)%,分离出的SP细胞的CFE为(5.52±0.45)%,而非SP细胞为(0.78±0.73)%,二者差异有统计学意义(t=2.17,P<0.01);大部分SP细胞呈K3/K12抗原阴性,ABCG2免疫标记呈阳性;而非SP细胞呈K3/K12抗原阳性,ABCG2免疫标记呈阴性。结论FACS可以应用于体外培养的兔角膜缘上皮细胞的SP细胞分离,分离出的SP细胞具有较强的增生能力。

利用荧光激活细胞分选技术获取荧光蛋白标记肾小球足细胞

目的:本实验旨在以双荧光蛋白标记的转基因小鼠为动物模型,建立适用于小鼠荧光标记足细胞的分选方法。方法:对现有的常规实验方法加以优化,在使用报告基因小鼠的前提下辅以更有效的磁珠灌注法提取肾小球,进一步制备单细胞悬液进行荧光激活细胞分选(FACS),获得绿色荧光蛋白标记足细胞。利用荧光显微镜及荧光定量PCR分析证实分选所得足细胞基因表达特性。结果:通过本实验方法可更有效制备肾小球单细胞悬液和高纯度的足细胞,每只小鼠可提取超过3×105的足细胞,占细胞总量的14.93%,质量可满足后续转录谱和蛋白组学等相关研究。结论:应用FACS技术可有效地从荧光标记小鼠中提取高纯度足细胞,为足细胞基因组学、蛋白组学水平的研究奠定基础。

激活细胞,吞噬肿瘤

在生物体内,有一些细胞会无情地吞噬其他细胞。这种“细胞相食”的现象其实是一种很常见的自然过程。例如,在人体内,白细胞每秒都会吞噬掉数百万个衰老的红细胞。一项发表于《美国科学院院刊》(PNAS)的新研究认为,通过一组基因来刺激细胞间的同类相食行为,可以提升-种新型癌症免疫疗法的效果。

免疫检查点T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域、人内源性逆转录病毒-H长端重复相关蛋白2在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的分析免疫检查点T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域(VISTA)、人内源性逆转录病毒-H长端重复相关蛋白2(HHLA2)在子宫内膜癌(EC)中的表达及临床意义。方法选取2017年9月至2019年10月唐山市妇幼保健院收治的120例的EC患者作为研究对象,收集其的EC组织和癌旁正常组织。检测EC组织和癌旁正常组织VISTA、HHLA2的表达;采用Spearman分析免疫检查点VISTA、HHLA2的相关性;Kaplan-Meier分析VISTA、HHLA2与预后的关系;Cox回归分析影响EC患者预后的危险因素。结果EC组织中VISTA、HHLA2阳性表达率显著高于正常癌旁组织(P<0.05)。Spearman相关性结果显示EC组织中VISTA与HHLA2表达呈正相关性(r=0.587,P<0.05)。EC组织中VISTA、HHLA2表达与临床病理特征有关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线结果显示VISTA阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(χ^(2)=11.864,P<0.05),HHLA2阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(χ^(2)=4.975,P<0.05)。Cox回归分析结果显示VISTA和HHLA2是影响EC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论免疫检查点VISTA、HHLA2在EC中高表达,其是影响EC预后的危险因素,二者可能是有价值的预后标志物。

淋巴细胞激活基因3蛋白结构功能及其在结直肠癌治疗中的应用研究进展

淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一种新发现的免疫检查点,LAG-3蛋白主要表达于效应T细胞和调节性T细胞(Treg)中,由4个与CD4高度同源的细胞外免疫球蛋白样域组成,以主要组织相容性复合体Ⅱ、半乳糖凝集素-3为配体,参与调控T细胞的免疫应答、保持免疫稳态。LAG-3蛋白可直接抑制T细胞增殖、调控Tregs细胞功能、调节抗原提呈细胞功能抑制T细胞活化三种途径调节T细胞的免疫应答。LAG-3对结直肠癌或有较好的诊断敏感性,其甲基化状态可能对结直肠癌的风险评估及诊断有一定的作用,并有可能成为预测结直肠癌患者预后的潜在标志物。联合阻断PD-1和LAG-3作为结直肠癌免疫治疗的策略已显示出极大的潜力。

B细胞激活因子及其靶向药物与炎症性肠病的研究进展

B细胞激活因子(B-cell activating factor,BAFF)作为B细胞的关键调节因子,参与多种自身免疫性疾病。炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因尚不明确的慢性、反复发作的肠道炎症性疾病,近年来全球发病率呈上升趋势。多种因素引起的异常免疫反应与IBD发病密切相关,B细胞异常活化及自身抗体产生增加在溃疡性结肠炎的发病中已得到证实,而BAFF是否参与IBD发病机制尚不明确。该文就目前关于BAFF在IBD发病机制中的潜在作用以及在IBD中针对BAFF的靶向治疗研究进行综述,旨在为IBD靶向治疗提供思路。

靶向成纤维细胞激活蛋白分子影像的临床研究与应用进展

[背景]肿瘤微环境中的肿瘤相关成纤维细胞(CAF)在肿瘤生物行为中起重要作用,成纤维细胞激活蛋白(FAP)作为CAF的特异性标志物,在90%的上皮肿瘤中均有表达.近年来,FAP抑制剂(FAPI)正电子发射断层成像(PET)在肿瘤疾病与非肿瘤疾病中的临床研究和应用进展迅速,成为领域内的前沿热点.[进展]FAPI PET/计算机断层扫描(CT)在包括头颈部肿瘤、肺癌、消化系统肿瘤、肉瘤等多种肿瘤的诊断评价中显示出克服其氟代脱氧葡萄糖(FDG)PET/CT的不足、显著提升诊断效能的优点.同时,以FAPI为载体的放射性核素诊疗一体化研究也引起关注.本文对FAPI PET/CT在肿瘤与非肿瘤疾病的临床研究和应用进展以及基于FAPI的放射性核素诊疗一体化研究动向进行综述.[展望]未来随着FAPI分子探针药动学的进一步提升,更多前瞻性大样本量的临床研究系统性评价FAPI分子影像在肿瘤疾病和非肿瘤疾病中的价值,以及不同治疗方式的联合,FAP有望成为重要的诊疗一体化靶点,为肿瘤治疗提供全新的策略.

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白相关疾病预防及治疗研究进展

幽门螺杆菌(H.pylori)中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)是新近发现的H.pylori的主要毒力因子之一,几乎所有H.pylori菌株都有表达。HP-NAP被激活后,可刺激中性粒细胞、单核细胞、树突状细胞、肥大细胞和淋巴细胞,参与炎症的发展和组织损伤。本文对HP-NAP在相关疾病的预防、治疗中的最新研究进展予以综述。

关于利拉鲁肽TGFβ1诱导的心脏成纤维细胞 激活临床应用研究

深入分析利拉鲁肽在TGFβ1诱导的心脏成纤维细胞激活过程中的实际应用情况,明确利拉鲁肽对心肌成纤维细胞活化产生的具体影响。方法:需要构建大鼠模型,培养初代大鼠乳鼠心脏成纤维细胞,利用TGFβ1进行刺激诱导,使心脏成纤维细胞活化增殖,并利用不同浓度的利拉鲁肽对成纤维细胞进行处理。之后需要开展细胞活性检测以及细胞增殖检测,同时需要完成转化生长因子β(TGFβ1)的mRNA表达水平。检测工作主要通过免疫应急检测明确相关蛋白的表达变化情况,对多组样本进行单因素方差分析,确定终的结果。结果:在利拉鲁肽浓度不同的情况下对心肌成纤维细胞活性进行处理时,并不会产生影响,P>0.05;TGFβ1组细胞的增殖水平比较明显,不同浓度的利拉鲁肽细胞增殖水平比TGFβ1组的细胞增殖水平更低,P<0.05;TGFβ1的mRNA表达水平比对照组更低,其中浓度为100和200的利拉鲁肽组细胞中TGFβ1的因子mRNA水平明显比TGFβ1组相关指标水平更低,P<0.05。结论利拉鲁肽对TGFβ1的心脏纤维细胞激活有一定的抑制作用能够减轻因为TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞活化以及分泌。利拉鲁肽在发挥作用的过程中,主要是对AKT磷酸化机制进行抑制达到减缓心肌成纤维细胞活化与增殖的作用。

放射性核素标记成纤维细胞激活蛋白抑制剂在肝癌诊疗中的临床应用进展

肝癌在全球具有较高的发病率和死亡率,传统形态学影像可为其诊疗提供重要的疾病解剖信息,而结合PET显像所反映的功能信息可进一步提升肿瘤的诊断准确度并辅助治疗决策。成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)是肿瘤相关成纤维细胞的标志性蛋白,在多种上皮来源的恶性肿瘤中高表达,是肿瘤诊治的重要靶点。相较于常规应用的^(18)F-氟代脱氧葡萄糖PET显像,FAP抑制剂PET显像具有图像对比度高和不受血糖影响等优势。近年来,靶向FAP的多种放射性药物在不同肝癌类型的诊断、分期及靶向治疗等方面得到了持续拓展,本文对其相关应用进展进行综述。

白血病抑制因子及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子对血流感染脓毒症患者的诊断及预后评估价值

目的研究血清白血病抑制因子(LIF)及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)对血流感染(BSI)脓毒症患者的诊断及预后评估价值。方法选择2021年1月~2022年7月期间我科收治的脓毒症患者,检测抗生素治疗前的血清LIF、RANTES水平;根据血培养结果分为BSI组和非BSI组,BSI组包括革兰阳性(G^(+))菌感染和革兰阴性(G^(-))菌感染患者,评估患者的28 d预后。结果BSI组血清LIF和RANTES水平高于非BSI组(P<0.05);BSI组中G^(-)患者血清LIF和RANTES水平高于G^(+)患者(P<0.05);BSI组中死亡的G^(-)患者血清LIF和RANTES水平高于存活的G^(-)患者(P<0.05),BSI组中死亡的G^(+)患者血清LIF和RANTES水平与存活的G^(+)患者比较差异无统计学意义(P>0.05);血清LIF和RANTES对脓毒症患者BSI、BSI脓毒症患者G^(-)菌感染具有诊断价值,对G^(-)菌感染导致BSI脓毒症的预后具有评估价值。结论血清LIF和RANTES是诊断BSI脓毒症、评估细菌感染类型以及G^(-)菌感染导致BSI脓毒症预后的潜在标志物。

小胶质细胞激活与抑郁症的研究进展

小胶质细胞过度活化介导的神经炎症和氧化应激是抑郁症的重要病理特征,重度抑郁症(MDD)患者表现出与大脑严重炎症相关的突触缺陷和小胶质细胞激活,从某种程度上讲,抑郁症就是小胶质细胞疾病。因此,本文从小胶质细胞激活的炎症表型、与抑郁症相关的小胶质细胞激活机制、小胶质细胞表型转换与抗抑郁治疗等方面进行综述,旨在进一步探索神经炎症导致抑郁、及小胶质细胞激活表型疗法治疗抑郁症的机制。

小胶细胞激活和突触功能异常对阿尔茨海默病进展的影响

大量的研究支持阿尔茨海默病(AD)在病程早期脑内即出现明显的小胶质细胞激活,并诱发神经炎症反应,成为破坏突触功能的主要因素,最终导致患者出现记忆障碍和精神异常等临床症状。因此,在AD早期抑制小胶质细胞激活和突触功能下降有可能成为阻止AD病程发展的治疗时机。中医药在未病先防的作用中具有显著优势,且多种中药具有清热、解毒、安神等作用功效。本课题组近年来利用行为学、电生理、分子生物学和化学遗传学等技术,发现桂枝、甘草等中药及其有效成分对AD小鼠海马的小胶质细胞激活和突触功能下降具有显著的调节作用,从而改善AD小鼠记忆障碍,并探讨其深入的药理机制。

莫诺苯宗对肺腺癌细胞自噬和凋亡的分子机制研究

目的:探究莫诺苯宗和自然杀伤细胞激活受体基因(KLRC3)对肺腺癌(LUAD)细胞凋亡和自噬的影响,为LUAD的治疗提供理论基础。方法:分别使用不同浓度莫诺苯宗处理LUAD细胞,并采用CCK-8法检测莫诺苯宗对LUAD细胞活力的影响;随后,使用80μmol/L的莫诺苯宗、50 nmol/L的KLRC3干扰质粒(si-KLRC3)、和100 nmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)1.5μg/ml KLRC3过表达载体(pcDNA-KLRC3)处理细胞后采用流式细胞术和Western blotting检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量。结果:莫诺苯宗浓度大于20μmol/L时可有效减弱LUAD细胞活力,且以剂量依赖性地促进了LUAD细胞的凋亡和自噬(均P<0.05)。KLRC3在LUAD细胞中低表达,干扰KLRC3减弱了莫诺苯宗对LUAD细胞自噬和凋亡的促进作用,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。此外,过表达KLRC3也促进了LUAD细胞的凋亡和自噬,而KLRC3和莫诺苯宗对LUAD细胞凋亡和自噬的促进作用均可被3-MA所抵消,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:莫诺苯宗可能通过促进KLRC3的表达诱导自噬进而促进LUAD细胞的凋亡。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。